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天疱疮治疗的研究进展被引量：1: 2011年; 天疱疮是一组威胁患者生命的自身免疫性大疱性疾病.传统的系统糖皮质激素和免疫抑制剂治疗虽可降低患者的死亡率,但常因其不良反应而限制了临床应用.随着对天疱疮发病机制研究的不断深入,一些新的治疗方法正逐步应用于临床或正处于试验研究阶段,如清除血清中的致病性抗体、生物制剂（CD20拮抗剂、肿瘤坏死因子-α拮抗剂）、p38促丝裂原活化蛋白激酶抑制剂、胆碱能受体激动剂、CD40/CD154阻断剂、桥粒芯蛋白3合成肽等.目前,由于上述药物价格昂贵、缺乏可靠的临床疗效数据或尚处于试验阶段等多种原因,尚未在临床治疗中广泛应用.; 周璐冯素英; 关键词：天疱疮

胆碱能受体激动剂逆转天疱疮棘层松解的机制研究被引量：6: 2015年; 目的研究胆碱能受体激动剂对天疱疮棘层松解的逆转作用及其机制.方法将HaCaT细胞与寻常型天疱疮IgG（PV-IgG）共培养建成天疱疮细胞模型后,再加入胆碱能受体激动剂卡巴胆碱共培养,以PV-IgG诱导的天疱疮细胞模型作为对照,通过细胞解离实验定量分析卡巴胆碱对棘层松解的逆转情况,用免疫荧光方法定性观察桥粒蛋白变化;分别用RIPA和Triton X-100裂解细胞,得到总蛋白和胞质蛋白,用蛋白免疫印迹灰度值定性分析HaCaT细胞表面与黏附相关的桥粒芯蛋白3（Dsg3）、桥斑珠蛋白（PG）的变化,不同时间点p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、表皮生长因子受体（EGFR）的磷酸化水平;用定量聚合酶链反应（qPCR）检测上述细胞表面蛋白在mRNA水平的变化;通过免疫共沉淀方法定性分析Dsg3与PG相互作用的变化情况.结果 PV-IgG组细胞碎片数为46.67±2.03,卡巴胆碱组为18.67±2.52,两组比较,t=11.22,P＜ 0.01;免疫荧光实验发现,卡巴胆碱可以逆转PV-IgG所致的桥粒分子内化.在天疱疮细胞模型中,细胞总的Dsg3和PG含量下降,非桥粒部分的Dsg3下降,非桥粒PG含量增加,且Dsg3与PG的相互作用减弱,加入卡巴胆碱后可逆转上述变化.卡巴胆碱也可使Dsg3 mRNA的相对表达量（2-△△Ct）由1.428±0.215增加至4.974±0.948（t=3.65,P=0.01）,PG mRNA的相对表达量由1.563±0.247增加至13.420±1.715（t=6.85,P＜0.01）.磷酸化实验中,卡巴胆碱可以抑制EGFR磷酸化,而对p38 MAPK磷酸化无明显影响.结论胆碱能受体激动剂卡巴胆碱具有逆转棘层松解的作用,这种逆转作用的机制可能包括：抑制Dsg3和PG内化并增加其表达,增强Dsg3与PG的相互作用,抑制棘层松解关键信号EGFR的磷酸化.; 李志量张洁尘徐浩翔杨永红冯素英王宝玺; 关键词：天疱疮胆碱能激动剂 HACAT细胞

不同亚型天疱疮患者血清对HaCaT细胞桥粒芯糖蛋白3表达的影响被引量：5: 2015年; 目的:确定3例不同亚型天疱疮患者(寻常型、副肿瘤型和落叶型天疱疮)血清对HaCaT细胞桥粒芯糖蛋白1、3(DSG1、3)及mRNA表达的影响。方法:采集3例患者血清,ELISA测定抗DSG1抗体和抗DSG3抗体;血清培养HaCaT细胞,直接免疫荧光检测细胞表面DSG1、3荧光强度,qPCR测定DSG3 mRNA的表达。结果:寻常型天疱疮患者血清抗DSG1抗体及抗DSG3抗体均阳性,副肿瘤型天疱疮患者血清抗DSG3抗体阳性,落叶型天疱疮患者血清抗DSG1抗体阳性。3例患者血清分别作用后,HaCaT细胞表面DSG3荧光强度均降低;寻常型及副肿瘤型天疱疮患者血清作用后,HaCaT细胞DSG3 mRNA表达增加,落叶型天疱疮患者血清作用后,HaCaT细胞DSG3 mRNA表达降低。结论:抗DSG1抗体血清可以降低DSG3表达;抗DSG3抗体血清可以增加细胞中DSG3的表达,但血清中的抗DSG3抗体存在以及KC细胞对DSG3的内吞等作用会将其表达的蛋白减少。; 李惠林麟张洁尘冯素英周武庆弓娟琴王宝玺; 关键词：HACAT细胞天疱疮

桥粒芯糖蛋白1、3在HaCaT细胞、A431细胞及原代角质形成细胞中的表达被引量：1: 2014年; 目的测定不同类型角质形成细胞（KC）桥粒芯糖蛋白（DSG）1、DSG3及DSG1mRNA、DSG3mRNA表达。方法不同KC（HaCaT细胞、A431细胞及原代KC）培养后，直接免疫荧光观察细胞DSG1、DSG3的表达，定量聚合酶链反应（qPCR）测定DSG1mRNA、DSG3mRNA相对表达水平。结果DSG1与DSG3表达于三种角质形成细胞，荧光强度显示，A431细胞高于HaCaT细胞，HaCaT细胞高于原代KC。三种细胞均表达DSG1、DSG3mRNA，原代KCDSG1与DSG3mRNA的相对表达量分别为HaCaT细胞的291．7％及237．4％，差异有统计学意义（P〈0．01）；A431细胞DSG1mRNA为HaCaT细胞的0．1％、DSG3mRNA则为HaCaT细胞的18．8％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论三种KC均可用于对DSG1、DSG3的相关研究；相对而言，正常培养的A431细胞表面DSG1、DSG3表达较HaCaT细胞及原代KC高；原代KCDSG1、DSG3mRNA水平较HaCaT细胞及A431细胞高。; 李惠冯素英林麟周武庆徐浩翔李志量靳培英; 关键词：角蛋白细胞

乙酰胆碱受体对HaCaT细胞黏附功能的影响及作用机制: 2014年; 目的研究乙酰胆碱途径药物对Ha Ca T细胞黏附功能的影响及其作用机制。方法培养Ha Ca T细胞至融合状态后,分别加入适当浓度的乙酰胆碱途径药物(M受体抑制剂阿托品,N受体抑制剂筒箭毒碱,乙酰胆碱受体激动剂卡巴胆碱),用细胞黏附检测方法检测细胞黏附的变化情况,结果以细胞碎片数表示;分别用Triton X-100和RIPA裂解细胞,得到胞浆蛋白和总蛋白,用蛋白免疫印迹测定细胞表面与黏附相关的蛋白桥粒芯蛋白1、桥粒芯蛋白3、桥斑珠蛋白、E-钙黏素的变化;用定量多聚酶链反应(q PCR)检测上述细胞表面蛋白在mRNA水平的变化。结果对照组、阿托品、筒箭毒碱、卡巴胆碱作用后细胞碎片数目分别为6.33±1.15,35.00±2.65,6.33±1.53,6.00±1.00;阿托品在蛋白质和mRNA水平减少桥粒芯蛋白3表达,并使桥粒芯蛋白3从胞膜脱离,卡巴胆碱可增加桥粒芯蛋白1、桥粒芯蛋白3、桥斑珠蛋白表达,并促使桥粒芯蛋白1、桥斑珠蛋白黏附于胞膜。筒箭毒碱对各种细胞表面蛋白均无明显影响。结论 Ha Ca T细胞表面的乙酰胆碱受体可以调节细胞间黏附分子,尤其是桥粒分子的表达,并影响这些分子在细胞膜上的稳定性,从而介导细胞间黏附,这种作用主要通过M受体实现。; 李志量张洁尘杨永红冯素英王宝玺; 关键词：乙酰胆碱受体 HACAT细胞

乙酰胆碱受体在天疱疮患者体内的表达被引量：3: 2012年; 目的:研究不同型别天疱疮患者体内乙酰胆碱受体的表达状况,初步探讨其与病情活动度和天疱疮分型的关系。方法:主要采用免疫组化和ELISA方法。结果:乙酰胆碱受体IgG(acetylcholine receptor IgG,AChR IgG)在30例天疱疮患者中有8例患者为阳性,7例为寻常型天疱疮,1例为落叶型天疱疮,与正常对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05);在AChRIgG阳性的患者中,病情分级较重,当病情得到有效控制后,外周血AChR IgG的吸光度(A)值下降。AChRM3亚型在寻常型天疱疮中褐色的颗粒仍然分布在基底层,但颜色加深,颗粒变大,且大小不一致。AChRM3亚型在落叶型天疱疮中的表达模式与正常对照组无统计学差异。AChRα亚基在寻常型天疱疮和落叶型天疱疮中褐色的颗粒仍然分布在全层,但颜色加深-颗粒变大,且大小不一致。结论:在落叶型天疱疮和寻常型天疱疮中,AChR抗体的表达状况不同。AChR抗体更易出现在桥粒芯糖蛋白(Dsg)3抗体阳性患者的外周血中,在Dsg3阳性患者皮损的组织切片中,除了AChRα蛋白之外,AChRM3蛋白的染色模式也发生了改变。这提示Dsg3抗体更易导致AChR途径的异常。; 冯素英周武庆桑红桂李阿梅林麟靳培英王宝玺; 关键词：天疱疮乙酰胆碱受体

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国家自然科学基金(81071295)

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