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rhIL-15和rhIL-2诱生的LAK细胞特性比较被引量：3: 2002年; 目的：研究ｒｈＩＬ－１５激活的ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒作用及相关表型的变化。方法：通过用不同浓度的ｒｈＩＬ－１５和ｒｈＩＬ－２分别诱生ＬＡＫ细胞，研究二者诱生的ＬＡＫ细胞的增殖状况；当ｒｈＩＬ－２和ｒｈＩＬ－１５为１５００Ｕ／ｍｌ时，ＭＴＴ法检测ＬＡＫ细胞的细胞毒作用，利用流式细胞仪检测细胞表面ＣＤ分子表达情况。结果：ＬＡＫ细胞的增殖对ｒｈＩＬ－２和ｒｈＩＬ－１５均具有时间和剂量依赖性，且无明显差异；终浓度为１５００Ｕ／ｍｌ时，ｒｈＩＬ－１５诱生的ＬＡＫ细胞杀伤Ｋ５６２细胞的能力强于ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞，而对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性，ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞却明显高于ｒｈＩＬ－１５诱生的ＩＡＫ细胞，且二者杀伤活性均具有时间依赖性；同时ｒｈＩＬ－１５诱生的ＬＡＫ细胞的ＣＤ３－ＣＤ５６＋细胞、Ｃｄ９４＋细胞百分率均高于ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞。结论：ｒｈＩＬ－１５在体内对ＮＫ细胞功能可能具有较强的调节作用。; 朱法良孙汭田志刚张建华张彩张捷; 关键词：LAK细胞增殖细胞毒作用表型 NK细胞 RHIL-2

粘附性NK细胞的制备及免疫学特性初探被引量：1: 2002年; 目的　初步探讨粘附NK细胞的制备方法及免疫学特性。方法　首先经淋巴细胞分离液、贴壁粘附及尼龙毛柱粘附对外周血NK细胞进行初步分离 ,然后联合使用Percoll不连续密度梯度离心法和T细胞Panning法进一步纯化NK细胞 ,应用流式细胞仪鉴定NK细胞并检测其纯度。rhIL 2 (6 0 0 0IU ml)诱导纯化的NK细胞 (R NK)转变为粘附NK(A NK)细胞 ,然后利用细胞计数法、MTT法和RT PCR方法检测A NK细胞的增殖和杀伤等免疫学特性。结果　经过纯化、诱导获得较高纯度、较高活性的A NK细胞。结论　初步建立了利用人外周血NK细胞制备A; 房静田志刚张彩魏海明孙汭张建华张捷; 关键词：NK细胞白细胞介素-2 免疫学

非经典HLA Ⅰ类分子(HLA-G和HLA-E)在人肿瘤细胞系的表达及IFN-γ的调节作用被引量：17: 2001年; 目的：探讨非经典HLA Ⅰ类分子在人肿瘤细胞系的表达及IFN－γ的调节作用。方法：用RT－PCR法检测12种肿瘤细胞系和人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织标本HLA－G和HLA－E mRNA的表达。结果：人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织均有HLA－G和HLA－E mRNA的表达；12株肿瘤细胞中仅人T细胞淋巴瘤Karpas存在HLA－G3的mRNA表达，经IFN－γ处理后，Karpas出现HLA－G1／G5和HLA－G2／G4的表达，宫颈癌Hela细胞、黑色素瘤M21细胞和膀胱癌T24细胞出现HLA－G3 mRNA的表达；12株肿瘤细胞中有9株表达HLA－E mRNA。结论：肿瘤存在HLA－G和HLA－E mRNA的表达，IFN－γ可促进HLA－G mRNA的表达。肿瘤细胞HLA－G和HLA－E的表达可能是肿瘤逃避免疫系统监视的机制之一。; 张彩田志刚魏海明冯进波许晓群张建华孙汭; 关键词：HLA-G HLA-E IFN-Γ 肿瘤

人NK细胞克隆化培养条件的初步探讨被引量：2: 2001年; 为探讨NK细胞克隆化培养的条件,我们首先将人外周血单个核细胞经rhIL-2诱导,使NK细胞得以扩增后,去除T细胞,得到相对纯化的NK细胞。经有限稀释,在饲养细胞及rhIL-2、PHA及LCM等培养条件下,获得NK细胞的单个克隆并进行鉴定。结果表明,每96孔板可获4-16个CD3^-CD56^+NK克隆,每个克隆的细胞数最多可达2.35×10~4,存活约3-5周。以丝裂霉素C(25μg/ml)作为饲养细胞抑制剂,以rhIL-2 200u/ml、PHA 10μg/ml及10％LCM培养,可获得较多的克隆和细胞数。; 张彩田志刚; 关键词：人NK细胞克隆化培养

细胞因子对早期NK细胞分化的调节作用被引量：9: 2000年; NK细胞是不同于T ,B淋巴细胞而能够直接杀伤靶细胞效应的一个特殊淋巴细胞系 ,由骨髓造血干细胞发育而来 ,其分化过程受多种细胞因子的调节 ,其中IL 2作用CD34+造血干细胞产生的NK可能是NK前体细胞 ,具有部分的杀伤活性 ;IL 12是效应最强的NK细胞激活因子 ,但是 ,单独促进生成NK细胞的分化能力很弱 ;IL 15存在于骨髓中 ,可能是NK细胞分化成熟的天然调节因子 ;IL 7可直接诱导NK细胞产生LAK活性 ,其诱导产生的NK细胞比IL; 夏青田志刚; 关键词：自然杀伤细胞分化发育细胞因子

CD34^+细胞免疫亲合柱的研制: 2000年; 本文建立了利用免疫亲合柱纯化CD34+细胞的方法。将亲合素交联于聚丙烯酰胺凝胶Bio Gel上 ,装于塑料柱制成免疫亲合柱 ;将脐血单个核细胞与生物素化抗CD34单克隆抗体作用后 ,加到该免疫亲合柱上进行纯化 ,得到纯化的CD34+细胞。纯化后CD34+细胞纯度达 48 8%± 18 2 % ,细胞回收率为 5 5 6 %± 14 5 % ,台盼蓝染色法显示活细胞达 98%。利用该方法纯化CD34+细胞具有纯度高、回收率高、细胞活性好等优点 ,是一种方便有效的细胞纯化方法。; 王郡甫田志刚张彩刘金生张建华夏青孙汭张捷; 关键词：CD34^+细胞细胞纯化流式细胞仪

人外周血NK细胞纯化、扩增及克隆化的初步探索被引量：11: 2000年; 分别采用Panning法、补体裂解法、绵羊红细胞花环法、Percoll不连续密度梯度离心法对NK细胞进行纯化并以流式细胞仪检测其纯度和计数探索NK细胞的体外扩增条件 ,将纯化NK细胞经有限稀释 ,在饲养细胞、IL 2、PHA及LCM等培养条件下进行克隆化培养并进行鉴定。研究表明NK细胞的纯度由纯化前 10 %左右提高到 30 %～ 70 %不等 ,以Percoll不连续密度梯度离心法所获纯度最高 ,约为 70 %。NK细胞的体外扩增在含有IL 2、PHA及条件培养基最显著。每 96孔板可获 4～ 16个CD3 CD5 6 +NK细胞克隆 ,每 96个克隆的细胞数最多可达 2 35× 10 5。; 徐彤张彩田志刚王君甫张建华孙汭; 关键词：NK细胞纯化扩增克隆

人外周血NK细胞纯化方法的初步比较被引量：9: 2000年; 目的 :初步探索NK细胞的纯化方法并在此基础上研究其生物学特性。方法 :分别利用Panning法、补体裂解法、绵羊红细胞花环法对NK细胞进行纯化并利用流式细胞仪检测其纯度 ,利用MTT法检测NK细胞对K5 6 2细胞的杀伤特性 ,利用RT PCR检测NK细胞在IL 2作用下IFN γ基因表达情况。结果 :NK细胞的纯度由纯化前 10 %左右提高到 5 5 75 % ,不同纯化方法有所不同 ,纯化NK细胞较天然人PBMC对靶细胞K5 6 2的杀伤作用强 ,IL 2的促进作用更为明显 ,纯化NK细胞较外周血单个核细胞 (PBMC)有更强的体外增殖能力 ,NK细胞在IL 2作用下IFN γ基因表达提高。结论 :初步建立了人外周血NK细胞纯化及体外扩增的方法 ,纯化NK细胞与人PBMC和LAK细胞相比具有独特的生物学特性。; 徐彤田志刚张彩张建华夏青孙汭; 关键词：NK细胞增殖纯化白细胞介素-2

NK细胞系细胞毒效应MTT比色法优化条件探讨被引量：11: 2002年; 李爱玲孙汭张建华孙安源田志刚; 关键词：NK细胞系细胞毒效应自然杀伤细胞 MTT比色法

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国家自然科学基金(39870729)