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国家自然科学基金(30500025): 作品数：11 被引量：80H指数：5; 相关作者：罗勤冯莹颖周青春张晓莉张强更多>>; 相关机构：华中师范大学华中科技大学维尔茨堡大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

Triton X-100在单菌落PCR技术中的优化作用被引量：5: 2009年; 在利用单菌落PCR法直接筛选含有外源基因的重组质粒以及发生同源重组的重组子时,通过0.1%TritonX-100处理模板对PCR技术进行优化。以大肠杆菌DH5α、单核细胞增生李斯特菌的重组克隆为例,单菌落经Triton X-100处理后再进行PCR,琼脂糖凝胶电泳图谱的条带更清晰、杂带减少;克隆鉴定的阳性率明显提高,且在15μL的PCR反应混合液体系中的扩增效果更明显。对单核细胞增生李斯特菌的检测方法可以推广适用于多种革兰氏阳性菌。; 张晓莉冯莹颖张强罗勤蒋苹钱悦; 关键词：TRITONX-100 重组克隆

Sigma B在单核细胞增生李斯特菌耐受环境压力胁迫中的作用被引量：5: 2009年; Sigma B(σB)因子在单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的压力应答和毒力调控中起着重要的作用。研究发现单核细胞增生李斯特菌的致病力与耐受环境条件的胁迫息息相关。在压力存在的情况下能启动一些基因的表达,以增强细菌对环境的耐受性,这些基因包括与耐受渗透压、酸碱性环境、氧化、极端温度和宿主体内胆碱等环境压力相关的基因。本文综述了σB因子在上述几种环境压力胁迫中的作用,为深入了解该菌的生理特征、探讨食品的最佳生产和保藏条件、防止细菌的感染等方面提供新的理论依据。; 张强冯莹颖周青春罗勤张晓莉秦龙娟; 关键词：单核细胞增生李斯特菌 SIGMA B因子

单核细胞增生李斯特菌毒力基因aroA启动子上阻碍PrfA转录调控元件的研究: 2008年; 目的研究食源性致病菌单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，简称LM）毒力基因启动子的结构特点及其与转录调控因子PrfA（positive regulatory factorA）蛋白之间的关系。方法选取picA和aroA两个毒力基冈启动子作为研究对象，picA基因启动子（PplcA）上含有一个高度保守的PrfA蛋白结合序列TFAACAAATGTFAA（PrfA-box）和-10区（TAAGAT），其转录表达受PrfA强调控；aroA基因不受PrfA调控，所利用的启动子ParoA1为非依赖于PrfA的启动子，但是在紧邻ParoA1的下游区域却含有一个与PplcA相似的PrfA—box（TTAAAACATGTTAA）和一个-10区（TTTAAT），该区域疑似为依赖于PrfA的启动子，被命名为ParoA2。应用PCR定点突变和SOEing PCR（重叠区扩增基因拼接法）技术互换了Pplca和ParoA2上可能影响PrfA蛋白结合以及诱发转录起始相关的碱基序列，构建了一系列PplcA—ParoA2杂合突变启动子，并插入到无启动子的lacZ报告基因上游，使lacZ基因的表达置于突变启动子下。获得的启动子融合表达质粒分别电转化入LM野生株P14、PrfA蛋白高表达突变株P14a和prfA基因等位缺失突变株A42中，检测相应的β-半乳糖苷酶活性以确定杂合突变启动子是否具有依赖PrfA的转录活性及其水平高低。结果当启动子上影响PrfA转录调控的两个核心元件PrfA—box与-10区的距离保持在最适的22或23个碱基时，交换印M和ParoA2上的两个相应核心元件的碱基序列并不改变启动子的转录活性。但是，当PplcA上的两个核心元件之间的碱基以及-10区下游的序列被相应ParoA2上的序列所替代后，PplcA依赖于PrfA的转录活性完全丧失，反之，ParoA2上的这两段序列如果被PplcA的序列所替换，ParoA2则表现出依赖于PrfA的转录活性。结论ParoA2的-10区及其下游的序列可能形成发夹结构，阻碍RNA聚合酶-PrfA蛋白复合物结合到解旋的单链模板DNA上生成具有转录起�; 罗勤周青春; 关键词：单核细胞增生李斯特菌转录调控

调控蛋白PrfA的单个氨基酸突变对单核细胞增生李斯特菌毒力基因转录水平的影响被引量：5: 2008年; PrfA是单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)中迄今为止发现的唯一一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子.为了深入研究PrfA结构和功能的关系,模拟一株自然界分离得到的PrfA组成型突变株P14A(血清型4b),将标准野生株EGDe(血清型1/2a)的PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸(简称PrfA*),分别构建野生型PrfA和突变型PrfA*表达融合载体,提取并纯化相应蛋白用于体外转录,直接检测依赖于PrfA的毒力基因plcA,hly和actA启动子的转录活性;同时,将携带prfA和prfA*的载体分别电转化入prfA基因缺失菌株中,应用实时RT-PCR检测plcA,hly和actA体内转录水平.实验结果显示:突变型PrfA*蛋白明显增强了plcA,hly和actA启动子的体外转录活性;依赖于PrfA的毒力基因在携带突变型PrfA*蛋白的菌株中的体内转录水平远远高于携带野生型PrfA蛋白的菌株,说明PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸后增强了PrfA蛋白与其靶基因的结合能力,从而提高其表达水平.; 罗勤周青春冯莹颖张晓莉; 关键词：单核细胞增生李斯特菌体外转录

转录调控蛋白PrfA对两组新近发现的单核细胞增生李斯特菌基因的体外转录作用的研究(英文)被引量：2: 2006年; 目的研究转录调控蛋白PrfA对两组新近发现的单核细胞增生李斯特菌基因的体外转录作用。方法利用本室近年来建立的体外转录系统,对两组基于转录基因组体内研究发现的5个可能的受PrfA不同调节的单核细胞增生李斯特菌基因进行了体外转录活性的研究。结果第一组中的hpt基因的体外转录活性受PrfA正调节,而其它4个基因既不被PrfA正调节也不被负调节。结论除hpt基因外,其它4个基因体外转录结果与体内实验不相一致,说明PrfA在体内可能通过复杂多样的非直接方式、或者还需要一些目前未知的因子来调控这些新近发现的基因的表达。; 罗勤周青春邓灵福高强刘德立GOEBEL Werner; 关键词：体外转录启动子

单增李斯特菌不同PCR快速检测方法比较被引量：19: 2008年; 目的比较3种PCR快速检测方法在检测单核细胞增生李斯特菌时的特异性和灵敏度方面的差异。方法针对单核细胞增生李斯特菌的毒力基因iap和prfA基因,分别设计引物,进行单个PCR、多重PCR、套式PCR等3种方法检测。结果3种PCR方法均具有较强的特异性;套式PCR的灵敏度为102cfu/ml,高于单个PCR(103cfu/ml)和多重PCR(104cfu/ml)。结论多重PCR在特异性检测方面具有优势,而在灵敏度方面,套式PCR要明显优于单个及多重PCR方法。; 李盛丰赵姣钟名华夏国亮邓灵福张筱丽冯莹颖罗勤; 关键词：单核细胞增生李斯特菌多重PCR 套式PCR 特异性

铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统的分子调控机制被引量：12: 2008年; 铜绿假单胞菌是临床上重要的革兰氏阴性条件致病菌。通过Ⅲ型分泌系统,铜绿假单胞菌将其毒力因子注入到真核宿主细胞内部,逃避宿主巨噬细胞的吞噬降解,引起宿主相应的病理变化,是铜绿假单胞菌感染致病的重要原因。本文在简单介绍铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统组成和功能的基础上,主要对调控T3SS基因转录表达的分子机制的研究进展进行综述和讨论。; 罗勤金守光; 关键词：铜绿假单胞菌转录调控

一种库蚊(Culex nigripalpus)细胞凋亡抑制蛋白(IAP)基因克隆和序列分析: 细胞凋亡抑制蛋白(Inhibitor of Apoptosis proteins,IAPs)是细胞程序性死亡级联中重要的抑制因子。在昆虫细胞凋亡调节中IAP途径是主要的调控途径之一。本文从库蚊(Culex nigripa...; 周青春刘绪生王国秀罗勤彭建新; 文献传递

一步法定点突变技术快速构建bsh基因突变启动子被引量：4: 2009年; 目的:建立一种高效便捷的定点突变方法,为基因表达调控以及蛋白质结构和功能的研究提供技术支撑。方法:以构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)中编码胆碱水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的bsh基因突变启动子为例,采用一对完全互补并带有突变位点的引物扩增携带bsh基因启动子的重组质粒DNA全序列,通过DpnⅠ消化PCR产物中剩余的甲基化的模板DNA,酶切后的PCR产物直接转化大肠杆菌,从而获得含有突变启动子的重组质粒。结果:通过一步法定点突变技术成功构建了bsh基因的三种突变启动子。结论:该方法简单高效,只要把握好对引物设计,高保真的DNA聚合酶、模板DNA的浓度以及PCR扩增程序的选择,突变成功率可以达到100%。; 冯莹颖张强周青春罗勤张晓莉秦龙娟; 关键词：单核细胞增生李斯特菌

单核细胞增生李斯特菌PrfA蛋白转录调控毒力基因表达的分子机制被引量：22: 2008年; 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes LM)属于典型的细胞内寄生革兰氏阳性菌,是WHO公布的四大食源性致病菌之一。LM不仅是人畜共患传染病李斯特菌病(listeriosis)的主要病原菌,也是研究胞内感染和细胞介导的免疫应答的模式细菌。绝大多数LM毒力基因的转录表达受到PrfA蛋白的调控。本文简单介绍了LM侵染宿主细胞必需的毒力基因及其产物;重点对毒力基因调节蛋白PrfA的结构和功能,PrfA调节毒力基因表达的主要方式最新进展进行了综述和讨论。; 罗勤张晓莉李兵冯爱平钱跃; 关键词：单核细胞增生李斯特菌毒力基因

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