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国家高技术研究发展计划(2006AA10Z445): 作品数：13 被引量：48H指数：5; 相关作者：花群义阮周曦杨俊兴陈兵周晓黎更多>>; 相关机构：深圳出入境检验检疫局云南出入境检验检疫局云南农业大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家质检总局科技计划项目中国博士后科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

鹿流行性出血病病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2009年; 为了更好的研究鹿流行性出血病病毒(EHDV)的生物学特性和建立EHDV免疫学检测方法,本研究用纯化的EHDV免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得了2株(1A5和8H6)能够稳定分泌抗EHDV单抗的杂交瘤细胞株。其细胞培养上清效价分别为1∶256和1∶512,腹水效价分别为1∶1024000和1∶2048000;McAb 1 A5和8H6的相对亲和力分别为0.9mg/L和0.7mg/L。间接ELISA结果显示,2株单抗仅与EHDV反应,不与蓝舌病病毒、赤羽病病毒、水疱性口炎病毒、小反刍兽疫病毒和BHK细胞反应,表明2株单抗特异性良好。这2株单抗的获得为研究EHDV生物学特性和建立EHDV检测方法奠定了基础。; 郭莹洁杨俊兴花群义徐聪林庆燕阮周曦陈兵卢体康詹爱军; 关键词：单克隆抗体

小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的制备及鉴定: 2012年; 用基因工程表达的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,获得2株稳定分泌抗PPRVH蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C6和4B10),其细胞培养上清液ELISA效价分别为1:256和1:128,腹水ELISA效价分别为1:128000和1:64000。亚型鉴定表明,2C6和4B10分别为IgG2b和IgG2a。ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与PPRVH蛋白和PPRV反应,不与其它相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好。这2株单克隆抗体的获得为研究PPRVH蛋白生物学特性及建立PPRV免疫学检测方法奠定了基础。; 孙洁杨俊兴吕建强阮周曦陶虹陈兵秦智锋花群义; 关键词：小反刍兽疫病毒单克隆抗体

4种重要虫媒病的核酸液相芯片高通量检测方法的建立被引量：8: 2010年; 为建立可检测鹿流行性出血热病毒（EHDV）、阿卡斑病毒（AKV）、蓝舌病病毒（BTV）和水泡性口炎病毒（VSV）的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中BTV的VP7基因、EHDV的VP7基因、AKV的N基因和VSV的NP基因序列进行序列分析,设计针对这些基因的特异性探针并标记生物素,分别与不同编号的荧光编码微球偶联后再与这些病毒相应基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪（Liquichip 200）检测荧光信号建立了以上4种虫媒病的快速液相芯片检测方法。检测结果显示,该方法具有较好的特异性,偶联特异性探针的微球只与相应的病毒基因的PCR产物反应,而不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度达到50~100个TCID50。本研究建立了可以同时检测鹿流行性出血热病毒、阿卡斑病毒、蓝舌病病毒和水泡性口炎病毒的快速高通量液相芯片技术,为其他类似病毒的快速高通量检测提供了借鉴和经验。; 詹爱军王新卫卢体康陈书琨孙洁陈兵曾少灵花群义; 关键词：蓝舌病病毒水泡性口炎病毒

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定: 2009年; 用纯化的蓝舌病病毒(BTV)免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得2株稳定分泌抗BTV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1F5和4E5)。其细胞培养上清ELISA效价分别为1∶512和1∶256,腹水ELISA效价分别为1∶512 000和1∶128 000。亚型鉴定表明,1F5和4E5分别为IgG1和IgG2a。ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与BTV反应,不与其他相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好。2株单克隆抗体1F5和4E5的相对亲和力指数分别为5.14×106mol/L和6.71×106mol/L。这2株单克隆抗体的获得为建立BTV免疫学检测方法奠定了基础。; 徐聪杨俊兴花群义阮周曦陶虹段纲郭莹洁陈兵詹爱军; 关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体生物学特性

4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立被引量：5: 2010年; 分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。; 阮周曦花群义杨俊兴曾少灵曹琛福秦智锋吕建强林庆燕周晓黎; 关键词：蓝舌病病毒水疱性口炎病毒赤羽病病毒多重RT-PCR

鹿流行性出血病病毒高通量液相芯片检测方法的建立被引量：2: 2010年; 为建立可检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中EHDV的VP7基因进行序列分析,设计EHDV特异性探针并用生物素标记,与荧光编码微球偶联后与病毒VP7基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip200)检测荧光信号建立了EHDV快速高通量液相芯片检测方法。检测结果显示,该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度为100个TCID50。建立了快速检测EHDV的液相芯片技术,为进一步搭建EHDV快速高通量检测平台奠定了基础。; 詹爱军王新卫陈书琨孙洁陈兵阮周曦花群义; 关键词：液相芯片

水疱性口炎研究进展被引量：10: 2007年; 水疱性口炎(VS)是由水疱性口炎病毒(VSV)引起的人畜共患的重大动物疫病。VS病毒生态学复杂,易感动物较多,传播媒介种类广,病毒可在一定区域内长期存在。VSV主要呈嗜上皮性,大量流涎是家畜感染最重要的临床症状,其特征为口腔黏膜、乳房皮肤及蹄冠部皮肤出现水泡及糜烂,人感染后出现类似流感的症状。由于其临床症状与口蹄疫不易区别,发病时容易引起国际贸易恐慌,因此,对VS诊断防治的研究有着重要的社会经济和公共卫生意义。文章从分子生物学特征、流行病学、诊断和防控4个方面对水疱性口炎的研究进行了综述。; 孙洪正徐自忠周晓黎董俊花群义高洪范晴江海天; 关键词：水疱性口炎临床症状

鹿流行性出血病病毒双抗夹心ELISA方法的建立被引量：4: 2011年; 为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,用纯化的抗EHDV特异性单克隆抗体包被ELISA板,用兔抗EHDV IgG作为夹心抗体,IgG作为夹心抗体建立EHDV双抗夹心ELISA方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了试验。用ELISA分别检测EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、水疱性口炎病毒(VSV)、赤羽病病毒(AKV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)样品,用RT-PCR作对照。结果表明,ELISA具有良好的特异性和敏感性。用夹心ELISA和RT-PCR同时检测128份参考样品,结果表明夹心ELISA的特异性和敏感性分别为100%和96.3%,两种方法的符合率为99.2%。本研究结果为EHDV检测及鹿流行性出血病流行病学调查提供了有效的工具。; 陈兵李健波杨俊兴阮周曦孙洁张彩虹刘建利花群义周晓黎; 关键词：双抗体夹心ELISA 单克隆抗体

水疱性口炎病毒单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定被引量：5: 2010年; 用纯化的水疱性口炎毒(VSV)免疫接种Balb/c小鼠,取免疫接种的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌抗VSV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(5B1、8H1、9B9和11E11)。4株单克隆抗体均能与VSV反应,且不与其他病毒及BHK细胞反应,表明4株单克隆抗体特异性良好。4株单克隆抗体腹水ELISA效价分别为1∶512 000、1∶256000、1∶256 000、1∶1 024 000。本试验为研究VSV生物学特性和建立VSV免疫学检测方法奠定了基础。; 杨俊兴花群义卢体康吕建强曹琛福阮周曦张彩虹孙洁周晓黎; 关键词：水疱性口炎病毒单克隆抗体生物学特性

鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达被引量：5: 2009年; 根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体转入大肠埃希菌(E.coliLMG194),用L-阿拉伯糖诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,EHDV VP7基因在LMG194中得到了表达,其表达产物可以与EHDV阳性血清特异性反应,说明该融和蛋白具有免疫学活性。; 杨俊兴花群义陈焕春陈兵吕建强曹琛福阮周曦张彩红; 关键词：VP7基因基因克隆

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