国家现代农业产业技术体系建设项目(nycytx-024-01-20) 作品数:6 被引量:18 H指数:2 相关作者: 陈由强 吴毕莎 柯崇榕 黄建忠 陈如凯 更多>> 相关机构: 福建师范大学 中华人民共和国农业部 福建省农业科学院 更多>> 发文基金: 国家现代农业产业技术体系建设项目 引进国际先进农业科技计划 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 生物学 轻工技术与工程 化学工程 更多>>
筛选甘蔗SPSⅢ启动子诱饵片段结合蛋白的酵母单杂交诱饵质粒的构建 被引量:2 2011年 主要构建了可以与酵母染色体发生重组的质粒pAbAI-Bait,并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞获得转化子,将阳性克隆进行PCR与DNA测序的方法鉴定,结果表明:酵母单杂交中报告质粒pAbAI-Bait构建成功,可用于酵母单杂交体系. 邹丽娟 高玉娜 周平 叶冰莹 陈由强 陈如凯关键词:酵母单杂交 转录因子 甘蔗叶片蛋白质组双向电泳技术优化 被引量:5 2011年 为了建立适合甘蔗叶片蛋白质组研究的双向电泳技术,对甘蔗叶蛋白质的溶解方法、IEF电泳、上样量等关键步骤进行了优化.结果表明:裂解液中有2 mmol/L的硫脲才能更充分地溶解蛋白;上样量1.0 mg时得到质量较好的凝胶图谱;甘蔗叶片蛋白质主要分布在pH4~7范围.通过对甘蔗叶片蛋白双向电泳技术的优化,提高了双向电泳图谱分辨率和蛋白点数,建立了一套适用于甘蔗叶片蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)方法,为甘蔗糖代谢相关的差异蛋白质组学研究提供参考. 张燕 何文锦 叶冰莹 陈由强 陈如凯关键词:甘蔗 蛋白质组 双向电泳 甘蔗双低频酶cDNA-AFLP体系的优化 被引量:2 2010年 目的:建立一个适合于甘蔗(Saccharum officenarum)为研究材料的cDNA-AFLP反应的优化体系。方法:用Rever-tAidTM First Strandc DNA Synthesis Kit反转录获得第一链,用Rnase H、E.coliDNA聚合酶Ⅰ和E.coliDNA连接酶合成双链cDNA,用双低频酶EcoRⅠ和PstⅠ对dscDNA酶切,连接,预扩增,和选择性扩增的关键因素进行分析。结果:500ng的dscDNA双酶切5h,将16℃过夜连接的产物稀释1倍用作预扩增的模板,预扩增产物稀释50倍作为选择性扩增模板,6%聚丙烯酰胺凝胶检测及银染,扩增条带均匀分布,清晰可辨且主要分布在200~2000bp之间。结论:该体系具有稳定性高,重复性好等优点,可用于甘蔗cDNA-AFLP分析。 郭静 林荣华 胡薇 陈由强 陈如凯关键词:甘蔗 CDNA-AFLP 酿酒酵母SNF4基因敲除缺失菌株的构建 被引量:8 2011年 构建一株酿酒酵母SNF4基因缺失菌株并研究其对乙醇产量的影响。扩增带有SNF4基因上下游同源序列和Kanr筛选标记的SNF4基因敲除组件,转化到酿酒酵母YS2获得阳性克隆子,然后将质粒pSH65转到阳性克隆子中,半乳糖诱导pSH65表达Cre酶切除Kanr筛选标记,获得SNF4等位基因完全缺失菌株YS2-△SNF4。发酵实验结果表明,缺失菌株YS2-△SNF4乙醇产量较出发菌株提高了7.57%。利用Cre-LoxP系统,成功构建了SNF4等位基因完全缺失菌株并提高乙醇产生量。 林晓华 柯崇榕 吴毕莎 郑永标 李力 陈由强 黄建忠关键词:酿酒酵母 基因敲除 酿酒酵母PDC1基因过表达菌株的构建 被引量:1 2013年 扩增PDC1全长和Kan基因,构建带有Kanr和Ampr的整合表达载体pSH-PDC1,线性化后LiAc/SS Carrier DNA/PEG法高效转化酿酒酵母YS2-△adh2-△ald6.G418结合PCR筛选获得阳性转化子,然后转入pSH65质粒,半乳糖诱导表达Cre酶切除Kan基因,获得PDC1过表达菌株.荧光定量PCR分析表明过表达菌株PDC1的mRNA表达量是出发菌株的2.078倍,遗传性能稳定,生长情况与出发菌株无明显差异.发酵试验显示过表达菌株蔗糖消耗速率较出发菌株缓慢,乙醇最大积累量为72 h的12.03%,提高了5.62%.利用同源重组原理和Cre-LoxP系统,成功构建PDC1基因过表达突变株并提高了乙醇产量. 柯崇榕 吴毕莎 邵庆伟 杨威 黄建忠关键词:酿酒酵母 基因过表达 荧光定量PCR 乙醇发酵 酿酒酵母SNF4基因的克隆及生物信息学分析 被引量:1 2012年 SNF4基因编码的Snf4p具有调节Snf1复合体的蛋白激酶活性功能,根据已知的SNF4基因序列设计引物扩增获得S.cerevisiae YS2的SNF4基因完整序列。序列分析表明,SNF4基因的开放阅读框为969bp,编码322个氨基酸残基。应用生物信息方法预测其理化性质、疏水性、信号肽、亚细胞定位、活性位点及其高级结构。结果表明:Snf4p为具有一定亲水性的非跨膜胞内稳定酸性蛋白,功能结构域为CBS_pair superfamily结构域,二级结构主要由a-螺旋组成,空间结构是由4个CBS结构域构成两个CBS对围绕形成的二聚体。Snf4p的第一个CBS对区域的β片层结构是Snf1p、Sip2p的β发夹结构结合作用区。 吴毕莎 柯崇榕 林晓华 林清强 陈由强 黄建忠关键词:酿酒酵母 生物信息学