国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-42-G11)
- 作品数：36 被引量：143H指数：7
- 相关作者：邵华斌罗青平张腾飞王红琳温国元更多>>
- 相关机构：湖北省农业科学院长江大学华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项湖北省农业科技创新中心资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- MPN-PCR法定量检测武汉鸡肉制品中的空肠弯曲菌被引量：2
- 2015年
- 空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是引起人类细菌性腹泻的主要人畜共患病原菌之一,严重时可导致人类格林-巴利综合征。其中鸡肉污染导致的食源性传播是人类感染的重要原因。为了调查武汉市鸡肉制品的空肠弯曲菌污染情况,运用最可能数法（MPN）及聚合酶链式反应（PCR）技术结合,即MPNPCR方法 ,对市场采集的128份鸡肉样品进行了空肠弯曲菌的定量检测,结果阳性检出率为18.75%,其中鲜鸡肉检出率为28.26%,冻鸡肉检出率为13.41%,含菌量范围为3.6-92.0 MPN/g。
- 韩梅董俊邵华斌罗玲罗青平潘玲张腾飞
- 新城疫活疫苗(V4/HB92克隆株)对鹌鹑、鸽临床试验被引量：1
- 2014年
- 应用兽药GMP车间生产的3批新城疫活疫苗(V4/HB92克隆株)中试产品分别在安陆和云梦对7 500只鹌鹑和4 500只鸽进行了临床效力试验。安全试验结果表明,3批疫苗用10倍剂量分别对30日龄的鹌鹑和鸽滴鼻,观察10 d,无任何毒副反应。免疫效力试验分为滴鼻和饮水2种方法,3批疫苗滴鼻免疫3 000只鹌鹑,免疫后2周抗体开始上升,ND-HI达3.9 log2,抗体持续16周;饮水免疫的3 000只鹌鹑,2周抗体为3.1 log2,抗体持续8周。三批疫苗滴鼻免疫1 500只鸽,免疫2周ND-HI抗体达4.1log2,抗体持续8周;饮水免疫的1 500只鸽,免疫后2周抗体为3.8 log2,持续8周抗体仍然为4.1 log2。试验攻毒保护力测定结果与ND-HI抗体水平呈正相关。
- 杨峻王红琳温国元罗青平汪宏才艾地云张蓉蓉罗玲张腾飞邵华斌
- 关键词：新城疫活疫苗鹌鹑
- 禽霍乱禽霍乱、新城疫二联灭活疫苗免疫攻毒试验与HI试验的平行关系研究被引量：3
- 2016年
- 对8批禽霍乱、新城疫二联灭活疫苗进行新城疫组分的效力检验,在检测新城疫血凝抑制效价(HI)的同时,进行新城疫病毒强毒攻击试验,旨在寻找抗攻毒保护与HI抗体效价之间的平行关系。结果表明:免疫剂量与HI抗体效价和攻毒保护率呈正相关,免疫40、20、10、5μL剂量组攻毒保护率和HI抗体效价分别为94.9%(75/79)、5.2 log_2,87.5%(70/80)、4.4 log_2,29.1%(23/79)、2.7 log_2,11.4%(9/79)、2.1 log_2;对照组攻毒保护率为0(0/10),HI抗体效价≤2.0 log_2;新城疫HI抗体效价与攻毒保护率也呈正相关,当HI<3.0 log_2,攻毒保护率为4.1%;HI=3.0 log_2,攻毒保护率为22.9%;HI=4.0 log_2,攻毒保护率为87.7%;HI=5.0 log_2,攻毒保护率为94.4%;HI=6.0 log_2,攻毒保护率为100%。本研究为制定疫苗质量标准中新城疫病毒株的效力检验方法和标准提供实验室理论依据。
- 王红琳汪宏才杨峻温国元罗青平罗玲艾地云张蓉蓉张腾飞邵华斌
- 关键词：新城疫禽霍乱疫苗攻毒保护率HI抗体效价
- 致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影的制备及其裂解效率的测定
- 2017年
- 为制备高裂解效率的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,本研究通过编码15个柔性氨基酸linker采用融合PCR法将噬菌体中Φ174的裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因(SN)串联(E-15L-SN),插入温控表达质粒pBV220,构建重组温控双裂解表达质粒(pBV-ES),采用PCR扩增其温控双基因裂解表达盒(DLS-ES)插入E.coli-Pasteurella(大肠杆菌和巴氏杆菌)穿梭质粒pBA1100,构建重组温控双基因裂解穿梭质粒pBA1100-DLS-ES。该质粒可以通过温控制备高裂解率的E.coli和Pasteurella两种菌的菌影。本实验将构建的pBA1100-DLS-ES电转化至致禽肾脏、肠道病变E.coli中,28℃集菌,42℃温控诱导裂解蛋白E和核酸酶A表达。OD_(600nm)值及电镜结果表明,双基因裂解率高于单基因,同时收集菌影时间也比单基因裂解短,42℃诱导2 h含双裂解基因的菌液处理菌体裂解率达到99.9999%,本实验利用菌影形成机制将含青霉素抗性的致禽肾脏、肠道病变E.coli制备成菌影,为新型菌影疫苗的制备提供实验依据。
- 赵星程伊洛卢琴邵华斌杨玉莹罗青平
- 关键词：穿梭质粒
- 新城疫病毒TS09耐热株在BHK细胞上的传代培养被引量：8
- 2012年
- 以新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)TS09耐热株为研究对象,研究了该毒株在幼仓鼠肾传代细胞(BHK细胞)上的培养适应性。通过培养条件的优化、连续传代培养和极限稀释法纯化,获得了一株新的、纯化的、适应BHK细胞的NDV耐热株,命名为TS09-C株。TS09-C株的生物学特性测定结果表明,TS09-C株在BHK细胞中的增殖滴度为107.9TCID50/mL,平均鸡胚致死时间(MDT)大于120 h,脑内致病指数(ICPI)为0。与亲本株TS09株相比,TS09-C株的基因序列发生了较为明显的改变,但TS09-C株与亲本株仍保持着较近的遗传进化关系。
- 温国元商雨郭静杨峻王红琳罗青平张蓉蓉邵华斌
- 关键词：耐热BHK细胞传代
- 禽巴氏杆菌四环素耐药株转录组测序与分析被引量：2
- 2019年
- 为鉴定禽源多杀性巴氏杆菌(avian Pasteurella multocida,Pm)四环素(Tetracycline,Tet)敏感株与耐药株(MIC=32μg/mL)在转录组水平上的差异,本研究采用RNA-seq技术对Tet敏感株与耐药株进行双向测序,通过GO、KEGG和ARDB数据库对表达差异基因进行注释和富集性分析。结果显示,共筛选出442个差异表达基因,其中包括103个上调基因和339个下调基因。通过GO功能富集分析显示差异表达基因多数富集于核糖体结构成分、rRNA结合、跨膜运输和离子转运等生物过程;对差异表达基因进行信号通路富集性分析,大多数差异表达基因分布在ABC转运蛋白与核糖体代谢途径中;对差异表达基因进行耐药基因注释(ARDB),发现其中的耐药基因主要为核糖体保护蛋白和外排系统两类。本研究表明禽源Pm对四环素耐药的耐药机制可能与细胞膜上ABC转运蛋白的过量表达以及核糖体保护蛋白有关。
- 孔令严汪最邵华斌邵华斌卢琴张腾飞
- 关键词：转录组测序
- 鸡源大肠杆菌喹诺酮类药物耐药基因的检测与分析被引量：1
- 2016年
- 为了解湖北地区鸡源大肠杆菌喹诺酮类耐药基因（PMQR）的流行现状与耐药表型的相关性，采用纸片扩散法对2014～2015年分离的54株鸡源大肠杆菌临床分离株进行7种喹诺酮类药物体外敏感性测定，通过PCR检测qnrA、qnrB、qnrS基因，对基因检测阳性株进行I类整合子检测。结果：54株鸡源大肠杆菌对萘啶酸、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、左旋氧氟沙星耐药率分别为72．2％、53．7％、53．7％、51．8％、50．0％、44．4％和22．2％；54株鸡源大肠杆菌中，10株（18．5％）检出qnrA基因，未检出qnrB、qnrS基因，且qnrA基因阳性株I类整合子为阳性。结果表明，湖北地区鸡源大肠杆菌对兽医临床常用的喹诺酮类药物耐药严重，且存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA的流行，而qnrA基因与I类整合子具有相关性，应加强监测。
- 艾地云罗玲张腾飞王红琳温国元邵华斌
- 关键词：大肠杆菌喹诺酮耐药质粒介导
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7 intimin蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2013年
- 本试验选择肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LEE毒力岛上的eae基因原核表达产物intimin作为抗原免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合和4次亚克隆后获得了5株杂交瘤细胞,分别命名为1E8、2B11、3B6、4C10、5D5,效价均在1∶128 000以上.杂交瘤细胞的染色体结果显示5株杂交瘤细胞的染色体数目在90～100条之间.Western blotting鉴定结果表明所制备的单克隆抗体能特异性识别肠出血性大肠杆菌O157：H7 intimin蛋白.间接免疫荧光显示单抗能够与肠出血性大肠杆菌O157∶H7表面抗原结合,荧光镜下可见明显绿色荧光.交叉试验结果显示制备的5株单克隆抗体均不与鸡的其它血清型大肠杆菌（O1、O2、O78、O157）及鸡白痢沙门菌等发生交叉反应,确定为肠出血性大肠杆菌O157∶H7特异性单克隆抗体.
- 罗玲罗青平艾地云王红琳张腾飞邵华斌
- 关键词：肠出血性大肠杆菌单克隆抗体
- 47株空肠弯曲菌湖北禽源株的多位点序列分型被引量：7
- 2016年
- 【目的】为了解湖北地区家禽空肠弯曲菌的流行状况及其分子特征,应用多位点序列分型方法对2013–2014年的47株禽源空肠弯曲菌湖北分离株进行分子分型研究。【方法】以空肠弯曲菌的7个管家基因aspA、glnA、gltA、glyA、pgm、tkt和uncA为目的基因,提取样本基因组后PCR扩增,测序和分析。将测序结果上传数据库进行比对,制作成多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)遗传进化树。【结果】分离株共有38个ST型,10个克隆群,其中最多的克隆群为ST-353CC和ST-464CC,发现2个新的等位基因编号和25个新的ST型。遗传进化树显示,不同家禽宿主中空肠弯曲菌序列型存在一定的差异,不同地区和来源的空肠弯曲菌呈现出遗传多样性。【结论】本研究对湖北分离的47株禽源空肠弯曲菌进行了MLST分析,其结果显示菌株多样性较为丰富,将为我国家禽空肠弯曲菌的流行病学调查提供科学的数据。
- 董俊韩梅周康罗青平邵华斌张腾飞
- 关键词：空肠弯曲菌多位点序列分型
- 新型微生态制剂对肉鸡生长性能及抗病力的影响被引量：7
- 2017年
- 为了探讨益生菌产品"奶托宝"、中草药产品"肠毒百分百"单独和联合使用对肉鸡生长性能及抗病力的影响,选用80只商品用健康肉鸡,分为4组,除对照组外,其他试验组均连续在饮水中添加产品14 d,再停药14 d后,进行攻毒试验。通过鸡平均增重、攻毒保护率等指标来评价益生菌、中草药单独或联合使用的效果。结果显示,联合组的平均增重极显著高于2个单独组(P<0.01),2个单独组平均增重极显著高于对照组(P<0.01);在抗病力方面,联合组抗鸡源大肠埃希氏菌O78的攻毒保护率为60%,2个单独组均为40%,对照组全部发病。说明中草药与益生菌联合使用有协同作用,不仅增重效果更为显著,而且增强了机体免疫力,提高了抗病力。
- 王红琳林开春张腾飞卢琴罗青平罗玲汪宏才李兰珍邵华斌
- 关键词：益生菌中草药肉鸡抗病力
