国家社会公益研究专项计划(202DIA50034-03) 作品数:4 被引量:8 H指数:2 相关作者: 徐宝梁 王珣 曹际娟 董薇 段玉玺 更多>> 相关机构: 中国检验检疫科学研究院 辽宁出入境检验检疫局 沈阳农业大学 更多>> 发文基金: 国家社会公益研究专项计划 国家质检总局科技计划项目 国家标准化管理委员会项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
转基因小麦的定性PCR筛选检测技术 被引量:3 2007年 为了建立转基因小麦的PCR检测方法标准,以B73、B72、B102三个被转入外源高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)基因的转基因小麦品系为材料,对目前国内外转基因小麦中通用的标记基因bar和uid A、NOS终止子和Ubiquitin启动子进行了定性PCR的筛选检测,在国内外首次找到了小麦中特有的内参照基因麦谷醇溶蛋白基因(GAG56D),设计并合成了麦谷醇溶蛋白基因(GAG56D)和Ubiquitin启动子的引物序列,并对PCR反应条件进行了优化,PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳分析后,可以检测到预期大小的目的片段。同时对PCR产物用实时荧光定量PCR进行了确证实验,并得到预期的结果。定性PCR最低检测灵敏度为0.5%(w/w)。建立的转基因小麦定性PCR筛选检测方法具有通用性。 栾凤侠 张洪祥 白月关键词:小麦 转基因 PCR SYBR~ Green I实时荧光PCR鉴定检测转基因油菜RT73品系 被引量:1 2007年 根据转基因油菜RT73品系转入的外源基因质粒图谱,设计品系鉴定的特异性引物,进行SYBR!Green I实时PCR检测,建立转基因油菜品系鉴定的SYBR Green I实时PCR方法。同时针对油菜FatA基因设计出内源基因。结果表明:应用实时PCR技术,利用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为80.2(±0.5)。SYBR Green I实时PCR能通过溶解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是鉴定转基因油菜RT73品系的新方法。 邱驰 董薇 曹际娟 段玉玺关键词:SYBR 转基因油菜 高分子量谷蛋白亚基转基因小麦检测技术的研究 被引量:3 2005年 针对该实验材料转入的外源基因选择了标准中通用的外源基因CaMV35S,NOS,bar和植物内源基因tRNALeu作为特异性引物,对影响定性PCR检测(反应体系:氯化镁浓度,引物和模板浓度;反应条件:退火温度和时间,循环数等)的主要条件进行了实验优化和选择,同时对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明,可以检测到CaMV35S,NOS,bar外源基因预期大小的目的条带,表明定性PCR检测所优化的条件适合转基因小麦。实验还测定了定性PCR最低检测灵敏度为1%(w/w)。同时对转入外源目的基因进行了表达蛋白的检测,蛋白电泳结果表明检测出1Dx5亚基和1Dy10亚基。 栾凤侠 张洪祥 徐宝梁 白月关键词:转基因小麦 蛋白检测 小麦中转基因成分PCR与实时荧光PCR的定性检测低限 被引量:1 2009年 为了确定小麦转基因成分PCR和实时荧光PCR方法的定性检测低限,将转基因小麦B73与非转基因小麦(检测外源基因)、小麦与大米(检测内源基因)分别进行质量分数配比后提取DNA用于测定相对检测低限,再将100%转基因小麦B73的DNA进行浓度稀释用于测定绝对检测低限,并应用已知的NOS、bar、ubiquitin,ui-dA(GUS)外源基因和Wx012、GAG56 D内源基因的引物和探针对模板DNA分别进行PCR与实时荧光PCR扩增。结果表明,最终确定PCR方法检测小麦转基因成分的相对检测低限为0.1%(质量分数),绝对检测低限为0.5 ng/μL;实时荧光PCR方法的相对检测低限为0.1%(质量分数),绝对检测低限为0.01 ng/μL。所确定的检测低限可满足国家对转基因产品的最低标识要求。 白月 栾凤侠 王珣关键词:转基因小麦 PCR