深圳市医学重点学科建设基金(200802102)
- 作品数：3 被引量：11H指数：3
- 相关作者：段朝晖罗金刚更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院深圳市人民医院更多>>
- 发文基金：深圳市医学重点学科建设基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Legumain对TNF-α和CHX共同诱导的细胞凋亡的拮抗作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨Legumain(LGMN)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和放线菌酮(CHX)共同诱导的细胞凋亡的抑制作用,为进一步研究Legumain在肿瘤细胞生长增殖的分子机制以及相关的肿瘤治疗提供实验基础和理论依据。方法采用Western Blot和水解多肽发色底物法分别测定人胚胎肾(HEK)293细胞株和小鼠成纤维细胞L929细胞株中的Legumain表达量,细胞增殖实验(MTT法)检测Legumain对由TNF-α和CHX共同介导的细胞增殖抑制的拮抗作用,激光共聚焦显微镜和流式细胞技术观察Legumain的抑制细胞凋亡效果。结果实验组中的HEK293+Legumain细胞和采用AEPI预先处理的L929细胞对一定浓度范围的TNF-α和CHX共同介导的细胞增殖抑制有的拮抗作用(P<0.01或0.05);激光共聚焦显微镜观察,Annexin V-PI双染法结果表明实验组的HEK293+Legumain细胞未发生细胞凋亡现象;流式细胞技术,JC-1染色法测定细胞线粒体膜电位结果表明实验组的HEK293+legumain细胞的凋亡百分比明显低于对照组(P<0.01)。结论Legumain具有拮抗由TNF-α和CHX共同诱导的细胞凋亡作用。
- 吴文苑段朝晖谢亚琴余涟
- 关键词：LEGUMAINHEK293细胞L929细胞细胞凋亡
- 多重PCR法和HPV分型基因芯片法在高危型人乳头瘤病毒感染检测中的应用被引量：5
- 2009年
- 目的评价高危型人乳头瘤病毒(HPV)多重核酸扩增荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在HPV感染女性患者标本基因分型的临床应用效果。方法应用13种高危型HPV多重PCR荧光检测法对在深圳市人民医院进行宫颈癌筛查的653例疑似HPV感染女患者的宫颈细胞样本进行检测,并与HPV分型基因芯片检测法的检测结果进行比较,2种方法检测13种高危型HPV不一致的样本经序列分析方法进一步验证。结果13种高危型HPV多重PCR荧光检测法检测HPV阳性样本,阳性检出率为21.5%(140/653);用HPV分型基因芯片检测法验证,与13种高危型HPV多重PCR荧光检测法一致的阳性样本占20.4%(133/653),总一致率为98.2%。2种方法的检测结果具有高度一致性(kappa值=0.945);用HPV分型基因芯片检测法检出:HPV单一型别感染占59.4%(79/133),主要的高危HPV型别为HPV16、52、39、68、33和59型,6种高危型占总数的87.3%(69/79),其中HPV16和HPV52为主要感染,占44.9%。结论高危型HPV多重PCR荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在13种高危型HPV的检结果具有高度一致性;多重PCR荧光检测法覆盖主要的13种高危型HPV,分型基因芯片检测法可进行具体的单一型别分型。2种检测方法的联合应用,对宫颈癌筛查和预防具有较高的临床应用价值,同时可为HPV分子流行病学和HPV疫苗的应用研究提供依据。
- 吴文苑段朝晖方红辉唐曙明刘艾芹
- 关键词：人乳头瘤病毒16病毒
- Legumain对肿瘤细胞侵润力和血管内皮细胞管腔形成的作用被引量：6
- 2009年
- 目的探讨肿瘤组织中过度表达的一种天冬酰胺肽链内切酶Legumain在肿瘤细胞侵润性生长和血管内皮导管形成中的作用及相关机制。方法采用体外细胞培养的方法,观察在缺氧条件下人乳腺癌细胞MDA MB231和人静脉血管内皮细胞HUVEC中Legumain的蛋白表达量;观察Legumain对MDA MB231细胞的侵润能力的影响以及人工合成的Legumain抑制物(asparaginly endopepidase inhibitor,AEPI)对人静脉血管内皮细胞HUVEC小管腔形成能力的影响;用免疫组织化学的方法观察Legumain与整合素(Integrin)β1的结合情况。结果Western-blot的结果表明,在缺氧条件下,体外培养的人乳腺癌细胞MDA MB231和人静脉血管内皮细胞HUVEC的Legumain蛋白表达量增加。应用免疫荧光双染色法对缺氧条件下培养的MDA MB231细胞进行染色,与正常条件下培养的细胞相比,缺氧条件下培养的MDA MB231细胞体积增大,胞浆内含有大量绿色的Legumain,成点状分布,并有部分Legumain分布在迁移中的细胞表面前缘,与红色的整合素β1重叠,呈现为黄色。在血管内皮细胞小管腔形成试验中,加入AEPI的实验组,HUVEC细胞的小管形成数量明显减少,分别为(13.2±0.85),(5.33±0.35),(0.57±0.23),与对照组(21.3±1.73)相比差异均具有统计学意义(P<0.001)。细胞的侵润能力试验结果表明,加入激活的Legumain后,实验组中的MDA MB231细胞的侵袭能力增高,分别为(170.90±59.27和(321.22±22.39),与对照组(67.56±7.58)相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧条件下,MDA MB231细胞株和HUVEC细胞株的Legumain表达增加,能促进肿瘤细胞的迁移和血管内皮细胞的小管形成。其分子机理之一可能是通过与整合素β1结合。
- 吴文苑余涟刘春罗金刚段朝晖
- 关键词：肿瘤LEGUMAINMDA
