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广东省医学科学技术研究基金(A2013561)

作品数：6 被引量：24H指数：4
相关作者：向辉孙世宏张汉斌刘钢柳勤更多>>
相关机构：广州市天河区疾病预防控制中心深圳市易瑞生物技术有限公司南方医科大学更多>>
发文基金：广东省医学科学技术研究基金广州市医药卫生科技项目广州市天河区科技计划项目更多>>
相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生
  • 1篇轻工技术与工...

主题

  • 2篇致病微生物
  • 2篇溶血素
  • 2篇食源
  • 2篇食源性
  • 2篇食源性致病微...
  • 2篇热稳定
  • 2篇免疫层析
  • 2篇副溶血性
  • 2篇副溶血性弧菌
  • 1篇毒力
  • 1篇毒力基因
  • 1篇原核
  • 1篇原核细胞
  • 1篇质粒
  • 1篇中毒
  • 1篇生物学
  • 1篇食品
  • 1篇食品安全
  • 1篇食物
  • 1篇食物中毒

机构

  • 4篇广州市天河区...
  • 4篇深圳市易瑞生...

作者

  • 4篇向辉
  • 3篇张汉斌
  • 3篇孙世宏
  • 2篇柳勤
  • 1篇刘钢

传媒

  • 2篇中国卫生检验...
  • 2篇华南预防医学
  • 1篇中国食品卫生...

年份

  • 1篇2017
  • 1篇2016
  • 2篇2015
  • 1篇2014
共 6 条 记 录，以下是 1-5
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排序方式：
荧光纳米颗粒标记技术快速检测产enterotoxin B金黄色葡萄球菌的实验研究被引量：3
2015年
目的通过制备SA肠毒素B(enterotoxin B)荧光纳米颗粒单克隆抗体,探讨产enterotoxin B的SA快速检测方法。方法将已构建好的重组质粒载体PET-28a-enterotoxin B转化入E.coli BL21(DE3),进行株中诱导表达,获得表达蛋白,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。再免疫Bal b/c小鼠,制备单克隆抗体荧光纳米颗粒偶联物。最后将多克隆抗体包被,制成免疫层析检测试纸条,并设质控线。将不同浓度的标准菌株混入样品中,收集提取液,在反应杯中与荧光纳米颗粒-单抗偶联物和试纸条共同反应5 min,紫外光下肉眼观察结果。结果实验克隆分子量为798 bp的enterotoxin B基因片段,构建的重组质粒载体能高效表达,获得分子量为34.5 k D的目的蛋白质。单克隆抗体荧光颗粒偶联物与阳性菌株特异性反应,阴性对照菌株无反应。结论研制的荧光纳米颗粒-enterotoxin B单克隆抗体偶联物特异性强、稳定性好且灵敏度高,实现短时间内对产enterotoxin B的SA快速检测。
向辉朱海孙世宏李颖张汉斌柳勤
关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B偶联
5种食源性致病微生物毒力基因重组质粒的构建、克隆表达与表达产物的研究被引量：4
2014年
目的构建大肠杆菌O157∶H7、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌5种主要食源性致病微生物毒力基因重组质粒载体并鉴定其表达产物,为探讨高通量磁性荧光纳米颗粒标记相应的抗体技术快速检测带毒力基因的致病微生物的可行性奠定基础。方法分别从5种食源性致病微生物毒力岛中选择特异性的毒力基因进行引物设计,分别提取5种目的细菌DNA片段,经PCR扩增、电泳回收目的基因片段,将目的基因片段与原核表达载体pET-23a、pET-28a、pET-32a构建各自的重组质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒载体,构建后的重组质粒进行酶切和测序鉴定,再转化入表达宿主E·coliBL21(DE3)。在0.1 mmol/L的IPTG诱导下,目的质粒载体在E·coliBL21(DE3)株中表达,SDS-PAGE电泳检测表达蛋白。结果实验成功构建大肠杆菌O157∶H7、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌等细菌的毒力基因重组质粒载体pET-23a-eaeA、pET-28a-tdh、pET-28a-enterotoxin B、pET-32a-invA和pET-28a-ipaH,并克隆出969 bp的eaeA基因片段、567 bp的tdh基因片段、798 bp的enterotoxin B基因片段、1 041 bp的invA基因片段和771 bp的ipaH基因片段。重组质粒载体经酶切和测序与目标基因序列一致。在E·coliBL21(DE3)株中有质粒表达蛋白37.5 kDa(eaeA)、26 kDa(tdh)、34.5 kDa(enterotoxin B)、41 kDa(invA)、32 kDa(ipaH)。结论本研究成功构建了5种食源性致病微生物毒力基因重组质粒并在原核细胞中高效表达,为下一步获得相应的毒力基因抗体及快速诊断试剂的研制应用奠定了基础。
向辉朱海刘钢孙世宏李颖张汉斌柳勤王西丽
关键词：克隆原核细胞
磁性荧光纳米颗粒标记免疫层析技术检测副溶血性弧菌热稳定直接溶血素的试验研究被引量：6
2017年
目的通过抗体与标记的磁性荧光纳米颗粒相结合的免疫层析技术,建立一种快速检测产热稳定直接溶血素(TDH)副溶血性弧菌的方法。方法构建产TDH副溶血性弧菌基因片段并进行扩增,扩增产物与质粒载体(p ET-28a)连接,并在大肠埃希菌中表达,制备抗体。抗体与标记的磁性荧光纳米颗粒偶联后,制成免疫层析检测试纸条。将混有不同浓度标准菌株样品和阴性对照样品分别与荧光纳米颗粒-单抗偶联物和试纸条共同反应5min,紫外光下肉眼观察结果。对试验的敏感性、特异性、重复性进行测试并进行样品模拟试验。结果重组质粒载体在大肠埃希菌BL21(DE3)可稳定高效地表达分子量为26 k D的可溶形式的目的蛋白,并实现了单克隆抗体与磁性荧光颗粒很好的偶联,所得偶联物与最低浓度10 CFU/ml阳性菌株反应,阴性对照菌株无反应。结论试验制备的产TDH副溶血性弧菌毒力基因表达产物与磁性荧光纳米颗粒有机结合,检测操作过程简单,具有灵敏度高、特异性强、重复性好和检测时间短等特点。
向辉朱海孙世宏李颖王西丽张汉斌柳勤
关键词：副溶血性弧菌免疫层析
食源性致病微生物快速检测技术研究进展被引量：5
2015年
近年来由致病微生物引起的食源性疾病正日益危害人类健康,为此国内外研究出多种快速检测食源性致病微生物的新方法。本文简要综述食源性致病微生物快速检测方法最新研究进展,包括培养基增菌技术、理化检测技术、免疫学技术、分子生物学技术和磁性荧光纳米颗粒—磁分离与荧光免疫层析法结合等,简要评价这些技术的优缺点,并对今后食源性致病微生物的快速检测方法进行展望。
向辉
关键词：食品安全食物中毒免疫学技术分子生物学
用双功能磁性纳米标记技术检测产热稳定直接溶血素副溶血性弧菌的实验研究被引量：1
2016年
目的通过抗体与磁性荧光纳米颗粒标记的免疫层析技术,建立一种快速检测产热稳定直接溶血素(TDH)副溶血性弧菌的检测方法。方法构建副溶血性弧菌TDH基因片段,将p ET-28a-TDH重组质粒载体转化大肠杆菌表达并制备克隆抗体。抗体与磁性荧光纳米颗粒偶联后,制成免疫层析检测试纸条。将混有不同浓度标准菌株样品与荧光纳米颗粒-单抗偶联物和试纸条共同反应5 min,紫外光下肉眼观察结果。并进行了实验的敏感性、特异性、重复性测试及样品模拟实验。结果转化的重组质粒载体在E.coli BL21(DE3)可稳定高效地表达目的蛋白。并实现了单克隆抗体与磁性荧光颗粒很好的偶联,所得偶联物与阳性菌株反应特异性强、敏感性高,阴性对照菌株无反应。结论实验成功制备了与副溶血性弧菌TDH毒力基因表达产物相结合的磁性荧光纳米颗粒复合物。检测过程操作简单,具有灵敏度高、特异性强、重复性好和检测时间短等特点。
向辉朱海孙世宏李颖王西丽张汉斌
关键词：副溶血性弧菌免疫层析
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