国家教育部博士点基金(20102136120002)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- 相关机构：辽宁师范大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗增殖蛋白与氧化应激被引量：5
- 2013年
- 抗增殖蛋白为一种高度保守、分布广泛、功能多样的蛋白,由核基因编码,定位于线粒体内膜、细胞核、细胞膜和基质中,由于其参与多种生物学进程,已引起广泛关注。由于其在线粒体上的特殊定位、结构和功能,使其近年在与氧化应激功能相关的研究中开始逐渐成为新的热点。针对抗增殖蛋白与线粒体的研究,系统阐述其在氧化应激及相关疾病和老龄化过程中的重要作用,并对其应用前景作以展望。
- 李铁松高杨王颖李庆伟
- 关键词：线粒体氧化应激疾病
- 七鳃鳗PHB2的真核表达与亚细胞定位
- 2015年
- 以东北七鳃鳗心肌总RNA反转录得到的cDNA为模板,PCR扩增PHB2基因全长CDS区,并将其定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1上,构建真核重组载体pEGFP-N1-Lm-PHB2.提取重组质粒,去除内毒素,利用脂质体介导的方法转染CHL、HeLa和MCF-7细胞,通过Western Blot检测转染后Lm-PHB2是否表达,Confocal观察EGFP融合蛋白在细胞中的表达及亚细胞定位.结果表明:PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切和测序证明真核表达载体构建成功;Western Blot检测到Lm-PHB2蛋白条带,Confocal观察到绿色荧光蛋白GFP,证明真核重组载体成功表达;Lm-PHB2蛋白主要定位在CHL细胞的细胞核,少量存在于基质和线粒体中,而在HeLa和MCF-7细胞中,Lm-PHB2蛋白集中定位在细胞核中.本研究为七鳃鳗Lm-PHB2的功能研究奠定了重要基础.
- 李庆伟李铁松王颖刘欣
- 关键词：七鳃鳗真核表达亚细胞定位
- 重组七鳃鳗PHB2蛋白的原核表达及纯化被引量：1
- 2015年
- 为了研究PHB2蛋白的生物学活性及后续抗体的制备,作者以前期构建的p MD18-T-Lm-PHB2质粒为模板,PCR扩增Lm-PHB2基因全长CDS区,PCR产物经Hind III和Eco R I双酶切后连接至表达载体p ET-32a,构建重组质粒p ET-32a-Lm-PHB2。将鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta Blue,经IPTG诱导表达后,表达产物通过SDS-PAGE和Western blotting进行检测,利用镍柱亲和层析纯化得到纯度较高的目的蛋白r Lm-PHB2。结果表明,经PCR、双酶切和测序鉴定,所构建的重组质粒p ET-32a-Lm-PHB2序列正确,表达产物存在于裂解菌液的上清和沉淀中,经SDS-PAGE和Western blotting证实在约47 ku处有目的蛋白r Lm-PHB2的表达条带。本研究构建了重组七鳃鳗(Lampetra japonica)PHB2蛋白的原核表达载体,并大量表达和纯化目的蛋白,为该蛋白后续的抗体制备及生物活性研究奠定了基础。
- 李铁松王颖高杨李庆伟
- 关键词：海洋生物学原核表达蛋白纯化
