湖南省卫生厅科研基金(B2006-100)
- 作品数：3 被引量：20H指数：2
- 相关作者：贺智敏张志伟欧阳咏梅余艳辉张琼更多>>
- 相关机构：中南大学南华大学更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅科研基金国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EB病毒LMP1-CTAR3对NP69细胞增殖和蛋白质表达的影响被引量：14
- 2009年
- 为了探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)第三个功能活性区域(CTAR3)在鼻咽上皮细胞NP69中的转化作用机制,采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-LMP1和RV-LMP1△232～351分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351稳定表达细胞系.通过绘制生长曲线、平皿克隆形成试验和软琼脂集落形成试验比较野生型和突变型LMP1对NP69细胞增殖的影响,运用蛋白质组学方法鉴定NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351细胞间的差异表达蛋白,选用实时荧光定量RT-PCR与Western blot对其中部分蛋白质点差异表达进行验证.结果发现:a.突变型LMP1△232～351促NP69细胞增殖的能力较野生型LMP1明显降低(n=3,P<0.05);b.鉴定了LMP1-CTAR3在NP69细胞中参与调节的16个蛋白质(表达上调的蛋白质8个,下调的8个).c.实时荧光定量RT-PCR和Westernblot证实了部分上述蛋白质的差异表达.以上结果说明,LMP1-CTAR3是其发挥促细胞增殖的重要活性部位,可能通过参与调节G蛋白和异柠檬酸脱氢酶等蛋白质的表达而起作用.
- 张志伟张琼余艳辉欧阳咏梅贺智敏
- 关键词：EB病毒差异表达蛋白
- EB病毒潜伏性膜蛋白1转化NP69细胞的蛋白表达分析被引量：1
- 2009年
- 目的探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)转化鼻咽上皮细胞NP69的表达蛋白。方法采用比较蛋白质组学方法,鉴定NP69-pLNSX与NP69-LMP1细胞系中的差异表达蛋白,分析LMP1在NP69细胞中参与调节的蛋白。结果鉴定了LMP1在NP69细胞中参与调节有22个蛋白(表达上调的蛋白9个,下调的13个)。结论LMP1在NP69细胞中可能通过调节Vimentin和Keratin 19等蛋白的表达而起转化作用。
- 张志伟刘洁琼余艳辉欧阳咏梅贺智敏
- 关键词：EB病毒差异表达蛋白质
- Epstein-Barr病毒潜伏性膜蛋白1 CTAR3缺失突变体的构建与功能分析被引量：13
- 2008年
- 【目的】探讨Epstein-Barr病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)促细胞转化的主要活性部位及其作用机制。【方法】采用PCR方法重组LMP1羧基末端活化域3(aa232-aa351)对应密码子缺失突变体(LMP1△232-351),将突变型LMP1△232-351和野生型LMP1(LMP1WT)分别导入永生化的鼻咽上皮细胞NP69中,比较二者对细胞的转化作用。同时,构建含JAK3启动子序列的荧光素酶表达质粒(pGL-2/JAK3-LUC),将LMP1△232-351与LMP1WT分别与含有JAK3启动子序列或NF-κB结合序列启动子的荧光酶表达质粒共转染293细胞(用pLNSX质粒作对照),比较二者活化JAK3启动子或转录因子NF-κB的功能。【结果】(1)LMP1△232-351促NP69细胞转化的能力较LMP1WT显著降低(n=3,p<0.01)。(2)LMP1WT能明显呈浓度依赖性活化JAK3启动子,而LMP1△232-351上调能力几乎丧失。【结论】LMP1羧基末端活化域3(aa232-aa351)是LMP1的重要活性部位之一,其促细胞转化的作用与JAK3蛋白表达调节有关。
- 张志伟张琼余艳辉欧阳咏梅贺智敏
- 关键词：EB病毒缺失突变体NF-KB
