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吉林省科技发展计划基金(20065020)
吉林省科技发展计划基金(20065020)
- 作品数:3 被引量:15H指数:2
- 相关作者:南文龙马鸣潇金宁一贾雷立鲁会军更多>>
- 相关机构:军事医学科学院吉林大学吉林出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金:吉林省科技发展计划基金教育部科学技术研究重点项目长春市科技计划项目更多>>
- 相关领域:农业科学医药卫生更多>>
- H3、H9亚型流感病毒多表位核酸疫苗毒构建及其表达研究
- 构建流感病毒多表位的的核酸疫苗,并研究表位基因在BHK细胞内表达产物的生物学活性。筛选流感病毒主要抗原(HANANP M)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感通用多表位基因(Epi),然后定向克隆至真...
- 陈义锋金宁一赵建增田明尧鲁会军南文龙赵翠青霍晓伟
- 关键词:多表位流感病毒核酸疫苗
- 文献传递
- H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒构建被引量:9
- 2007年
- 目的构建表达H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位重组鸡痘病毒活载体疫苗候选株。方法筛选流感病毒主要抗原(HANANPM)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感多表位基因(Epi),以H5、H7HA融合表达基因为骨架,将多表位基因插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至鸡痘病毒表达载体pUTA-2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游,构建重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA。应用脂质体介导的转染法,将该重组鸡痘病毒中间转移载体与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行3次加压筛选挑斑纯化后传代,并对重组以鸡痘病毒进行PCR和IFA检测和Western blot分析。结果成功构建了重组鸡痘病毒中间转移载体pUTA-2-H7HA-Epi-H5HA,PCR、IFA和Western blot检测阳性。结论筛选出稳定共表达H5H7HA基因和通用多表位基因的重组鸡痘病毒vUTA2-H7HA-Epi-H5HA株,该重组鸡痘病毒的构建为跨种通用型流感病毒活载体疫苗的研究奠定了物质基础。
- 陈义锋金宁一贾雷立鲁会军南文龙田明尧陈晓月马海利马鸣潇刘成宏
- 关键词:重组鸡痘病毒
- H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位核酸疫苗构建及表达研究被引量:8
- 2007年
- 目的构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性。方法筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H7亚型流感病毒HA融合表达基因为骨架,将多表位基因Epi插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至pVAX1,构建抗A型流感H3579亚型的pVAX1-H7HA-Epi-H5HA。最后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞总RNA,以RT-PCR方法检测目的基因;以间接免疫荧光试验(IFA)初步测其表达产物抗原性。结果RT-PCR检测到目的基因;IFA检测到特异性荧光存在。结论本试验所构建的重组质粒pVAX1-H7HA-Epi- H5HA,在真核细胞内均获了有效地转录和表达;而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗多种A型流感病毒的通用核酸疫苗。
- 陈义锋金宁一贾雷立鲁会军田明尧南文龙马鸣潇刘成宏沈国顺马海利陈晓月
- 关键词:表位流感病毒核酸疫苗
- 多重反转录聚合酶链式反应检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒的研究
- 2009年
- 利用多重反转录聚合酶链式反应同时检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒.在GenBank中搜索H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的血凝素基因序列,并利用DNAStar软件分析其相似性,利用Primer Premier 5.0软件设计3对分别针对AIV H5、H7和H9亚型的特异性引物.这3对引物所扩增的cDNA片段大小分别为427、228和830 bp.结果表明,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了同时检测H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术.该多重RT-PCR对H5、H7和H9亚型AIV能同时扩增出3条大小分别为427、228和830 bp的cDNA片段,与其他常见禽病病原的核酸不存在交叉反应.该多重RT-PCR对H5、H7和H9亚型AIV cDNA的最低检出量分别为10 pg、1 ng和10 pg.
- 张文慧王伟利郑聪刘明钱爱东
- 关键词:禽流感病毒H5亚型H7亚型H9亚型