江苏省自然科学基金(BK2008467)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
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- 热休克蛋白27改善小鼠内毒素血症心功能不全的机制被引量：3
- 2010年
- 目的探讨Hsp27的保护作用是否与激活P13K／Akt信号通路、减轻炎症反应有关。方法（1）诱导小鼠内毒素血症心肌特异性高表达Hsp27转基因鼠（Hsp27Tg）和野生型对照鼠（WT）均腹腔注射内毒素（LPS，10mg／kg）；（2）心功能测定LPS注射后6h，以心脏超声评价，n=6；（3）P13K／Akt信号通路活性测定LPS注射后1h收集心脏，以Western blot法测定Akt及Gsk-3（的磷酸化水平，n=4；（4）NF-B炎症通路活性检测LPS注射后1h以Western blot测定IκBα水平，n=4；同时在大鼠心肌细胞中进行相同实验，n=3；（5）心肌细胞凋亡LPS注射后24h，以TUNEL法检测，n=4。结果（1）Hsp27显著改善LPS所致的心功能不全。与基础值相比，LPS处理使WT，Hsp27Tg均出现心功能不全，但Hsp27Tg的心功能不全程度显著轻于WT（P〈0．01或P〈0．05）。（2）Hsp27显著抑制LPS所致的IKBa降解。与WT比较，高表达Usp27显著减轻了LPS诱导的小鼠心肌IκBα降解[（41．43±24．10）％VS．（72．92±9．20）％，P〈0．05]，培养的大鼠心肌细胞实验结果与之类似。（3）Hsp27可增强激活P13K／Akt信号通路。LPS处理后，WT和Hsp27Tg鼠心肌组织中磷酸化Akt水平分别为（3．11±0．83）和（5．13±0．73），磷酸化GSK-3β水平分别为（3．19±1．04）和（5．71±1．20）。与WT比较，Hsp27Tg心肌组织中的磷酸化Akt和GSK-36水平均显著提高（P〈0．05）。类似结果在体外培养的细胞实验中也被证实。（4）Hsp27显著抑制LPS所致的心肌细胞凋亡。LPS处理后24h，WT和Hsp27强心肌细胞凋亡率分别为（6．46±1．74）％和（2．88±0．91）％，与WT比较，心肌细胞凋亡在Hsp27Tg中被显著减轻（P〈0．01）。结论高表达Hsp27对小鼠内毒素血症心功能不全有显著改善作用，其保护作用与激活P13K／Akt信号通路、抑制NFKB依赖性炎症反应有关。
- 周红梅尤文军张晓进丁正年程蕴琳刘莉
- 关键词：内毒素血症心功能不全热休克蛋白27转基因鼠组织学
- 地塞米松对布比卡因诱导小鼠神经元毒性的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨地塞米松对布比卡因诱导小鼠神经母细胞瘤株（N2a）细胞毒性的影响。方法N2a细胞悬液（10^5／ml）随机分为4组：对照组（C组）、布比卡因组（Bup组）、地塞米松组（Dex组）和地塞米松＋布比卡因组（Dex＋Bup组）。各组N2a细胞分别接种于24孔培养板（0．5ml／孔）和直径10cm的培养皿中（7ml／皿），每组24孔和4皿。C组不行干预；Bup组加入含900μmol／L布比卡因的MEM培养基500μl；Dex组加入含1μmol／L地塞米松的MEM培养基500μl；Dex＋Bup组加入含1μmol／L地塞米松的MEM培养基500μl孵育12h后加入布比卡因900μmol／L。于24孔板中孵育5h时，测定线粒体跨膜电位（△ψm）；于24孔板中孵育9h时观察细胞形态，并计算LDH释放率和细胞核固缩率；于培养皿中孵育5h时测定磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERKs）的表达。结果C组细胞多边形，胞体折光性强，突触伸展良好；Dex组细胞形态学与C组相似；Bup组细胞扁平，突触缩短或断裂，胞体折光性弱；Dex＋Bup组扁平细胞减少，突触缩短或断裂减少，胞体折光性略低。与C组比较，Bup组LDH释放率和细胞核固缩率升高，△ψm降低，p-ERKs和p-Akt表达下调，Dex＋Bup组细胞核固缩率升高，△ψm降低，p-ERK表达下调，p-AKt表达上调，Dex组p-ERKs和p-Akt表达上调（P〈0．01）。与Bup组比较，Dex＋Bup组LDH释放率和细胞核固缩率降低，△ψm增加，p—ERKs和p-Akt表达上调（P〈0．01）。结论地塞米松可减轻布比卡因诱导N2a细胞毒性，其机制可能与恢复线粒体膜电位、抑制Akt和ERKs脱磷酸化有关。
- 马蓉王晓辉彭培培刘莉丁正年
- 关键词：地塞米松布比卡因神经元毒性作用
- PI3K/Akt通路介导HspA12B对小鼠内毒素血症所致心功能不全的保护作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨高表达热休克蛋白A12B(HspA12B)对内毒素血症所致心功能不全的保护作用及其可能机制。方法 HspA12B转基因小鼠和野生型小鼠均分别注射脂多糖(LPS)10mg/kg(A1组,15只;A2组,14只)、渥曼青霉素(WM)1mg/kg+LPS 10mg/kg(B1组,10只;B2组,10只)、生理盐水(C1组,8只;C2组,9只)。用超声心动图测定左心室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(FS),Western blot法检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白表达。结果 A1、A2组p-Akt、p-GSK-3β表达分别低于C1、C2组(P<0.01或P<0.05);与A2组相比,A1组p-Akt、p-GSK-3β的下降程度分别减轻了54.3%、27.4%(P<0.05)。各组LVEF、FS水平由多到少为C1组>A1组>B1组、C2组>A2组>B2组(P<0.01);A1组LVEF、FS较A2组分别提高了56.0%、72.5%(P<0.01)。结论高表达HspA12B改善内毒素血症心功能不全可能是通过激活PI3K/Akt信号通路介导的。
- 张小进周红梅钱进马玉洁程蕴琳丁正年刘莉
- 关键词：热休克蛋白内毒素血症心功能不全PI3K/AKT信号通路
- α-硫辛酸通过激活ERK信号通路促进神经突触生长被引量：1
- 2012年
- 目的探讨α-硫辛酸(LA)促进神经突触生长的可能机制。方法将体外培养的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞分为对照组(A组)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059 40μM组(B组)、LA 500μM组(C组)和PD98059 40μM+LA 500μM组(D组)。用光学显微镜观察细胞突触生长情况,Western blot法检测ERK表达水平。结果与A组相比,C组突触生长、ERK激活水平增加(P<0.01);而D组能明显抑制C组上述观察指标的增加过程(P<0.01)。结论 LA对神经细胞突触生长的促进作用可能是通过激活ERK依赖性信号通路来实现的。
- 朱维娜王晓辉丁正年刘莉李跃华
- 关键词：Α-硫辛酸
- 热休克蛋白27对内毒素血症所致心功能不全的保护作用被引量：1
- 2009年
- 目的探讨心肌特异性高表达热休克蛋白27（Hsp27）对内毒素血症所致心功能不全的影响，并初步探讨其机制。方法所有实验均在南京医科大学第一附属医院老年医学科研究室和南京大学模式动物研究所完成。（1）心肌特异性高表达Hsp27转基因鼠（Hsp27Tg）基因型和表达鉴定：分别采用PCFI法和westernblot法；（2）心功能测定：Hsp27Tg和野生型（WT）对照鼠均被腹腔注射内毒素（LPS，10mg／kg），24h后以超声心动图测定心功能，n=6／组；（3）死亡率：Hsp27Tg和wr鼠腹腔注射内毒素（LPS，20mg／kg），密切监测70h内的累积死亡率，n=37／WT，n=27／Hsp27Tg；（4）NF-κB活性测定：心肌组织样本采用凝胶迁移电泳法，细胞样本采用双报告基因法，n=4／组；（5）多组间的两两比较采用ANOVA和Scheffe检验，生存曲线分析采用log—rank检验，P〈0．05设为相差显著性界值。结果（1）Hsp27Tg小鼠心肌有丰富的Hsp27表达，WT则没有；（2）LPS使WT和Hsp27Tg鼠心功能均显著下降，但与WT比较，Hsp27Tg的心功能显著改善（P〈0．01或P〈0．05），其中EF增加27．3％，FS增加37．1％；（3）至LPS注射后70h，WT和Hsp27Tg小鼠死亡率分别为37．84％和11．11％，与WT鼠比较，Hsp27Tg生存率显著提高（P〈0．05）；（4）Hsp27显著抑制LPS诱导的NF-κB激活（P〈0．01或P〈0．05）。结论Hsp27心肌特异性高表达显著抑制内毒素血症所致的心功能不全，改善生存率，其机制可能与Hsp27下调LPS诱导的NF-κB激活有关。
- 刘莉尤文军闵笑颜张晓进钱波戴俊程丁正年高翔程蕴琳
- 关键词：热休克蛋白内毒素血症心功能不全炎症
- α-硫辛酸对神经突触生长的促进作用被引量：4
- 2011年
- 目的探讨α-硫辛酸（LA）对神经突触生长的影响。方法 （1）N2a细胞接受作用浓度为100、300和500μM的LA刺激,分别于刺激后24～60 h在显微镜下观察突触生长情况。未接受LA刺激的细胞作为对照组。每组4份。（2）大鼠原代海马神经元接受500μM的LA刺激,分别于刺激后24和36 h在显微镜下观察突触生长情况。未接受LA刺激的细胞作为对照组。每组4份。结果 （1）LA作用于N2a细胞24 h后,各组突触生长细胞百分比分别为：对照组（1.85±0.6）%、100μM组（5.3±4.1）%、300μM组（7.8±4.3）%、500μM组（12.5±3.3）%;与对照组比较,只有500μM LA组的突触生长细胞百分比显著增加（P〈0.01）。LA作用60 h后,各组突触生长细胞百分比分别为：对照组（12.5±3.7）%、100μM组（23.2±6.2）%、300μM组（35.0±4.9）%、500μM组（67.6±4.3）%;三个LA处理组的突触细胞百分比均比对照组显著增加（P〈0.01或P〈0.05）。（2）LA作用于大鼠原代海马神经元后24、36 h,突触长度较对照组分别增加了22.9%、30.5%（P〈0.01）。结论 LA对体外培养神经元具有显著促进神经元突触生长的生物学作用。
- 李竞进王竹瑶王晓辉刘莉丁正年
- 关键词：神经突触Α-硫辛酸
