国家自然科学基金(39893209)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 新城疫病毒HN蛋白基因真核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2000年
- 将质粒ｐＫＳＨＮＳ、ｐＫＳＨＮＣ、ｐＫＳＨＮＱ、ｐＫＳＨＮＬ和 ｐＫＳＨＮＢ利用 ＢａｍＨＩ和 ＸｂａＩ双酶切后回收。将转座载体 ｐＦａｓｔ ＢａｃＩ同样方法酶切、回收。分别将回收的 ＨＮＳ、ＨＮＣ、ＨＮＱ、ＨＮＬ、ＨＮＢ与 ｐＦａｓｔ ＢａｃＩ连接，使目的基因亚克隆到 ｐＦａｓｔ ＢａｃＩ上的 ｏｃｕ基因启动子下游的 ＭＣＳ上，然后转化 Ｅ． ｃｏｌｉ ＤＨ５ａ，以 ＬＢ／ＡＭＰ＋ ＧＭ平板筛选阳性重组子，经酶切鉴定，再转化至 Ｅ． ｃｏｌｉ ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞中，经抗性培养和蓝白斑筛选，挑取白色菌落为阳性重组表达载体，经酶切鉴定后，分别命名为ＢａｃｍｉｄＨＮＳ、ＢａｃｍｉｄＨＮＣ、ＢａｃｍｉｄＨＮＬ和ＢａｃｍｉｄＨＮＢ．经小量提取后，转染ｓｆ－９细胞，２７℃培养７２小时，应用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测和鉴定表达的 ＨＮ蛋白。结果表明，本研究成功地构建了 Ｂａｃｍｉｄ ＨＮ重组表达载体，并在 ｓｆ－９昆虫细胞中表达了 ＮＤＶＨＮ基因，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ出现一条特异性泳带，约７４ｋｕ，Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ结果出现一条杂交带，分子量与之相同，进一步证明构建的重组表达载体表达了ＮＤＶＨＮ基因。
- 丁壮金宁一王兴龙金扩世王宏伟吕杰李太元米志强殷震
- 关键词：新城疫病毒HN基因真核表达载体
- 新城疫病毒(昌黎株)F蛋白基因的克隆和序列分析
- 2000年
- 以鸡胚尿囊液繁殖的新城疫病毒 (昌黎株 ) ,经差速离心浓缩后 ,提取 RNA,参考国外发表新城疫病毒 F基因序列 ,设计并合成了一对长度皆为 2 6 bp特异性引物。经 RT- PCR扩增出 NDV昌黎株部分 F基因序列 ,将其插入本室构建的 Fp KS(- ) ,进行序列测定。序列分析表明该部分 F基因长度为810 bp,编码 2 6 7个氨基酸 ,有 4个半胱氨酸残基和 2个糖基化位点 ,裂解位点区 (112 - 117)氨基酸序列为 R- R- Q- K- R- F,与所有强毒株在这一区域的序列 (R/ K- R- Q- R/ K- R- F)相符 ,证明
- 米志强金宁一王兴龙丁壮金扩世王承宇
- 关键词：新城疫病毒F基因
- 新城疫病毒昌黎株与国外毒株HN蛋白基因核苷酸及氨基酸差异性分析被引量：8
- 2000年
- 参考国外发表的新城疫病毒 ( NDV)的 HN基因序列设计了 1对特异性引物 ,应用 RT-PCR对 NDV昌黎株 (野毒 )的 HN基因进行了扩增 ,扩增产物克隆后测序。扩增出的 HN基因核苷酸长度为 1 74 2 bp,编码 571个氨基酸 ,序列中有 6个糖基化位点 ,1 3个半胱氨酸残基 ,与国外发表的强毒株序列相符。核苷酸同源性在 88.5%～ 92 .9%,推导的氨基酸序列同源性在 90 .0 %～ 94 .2 %之间。
- 丁壮金宁一王兴龙金扩世罗坤郭志儒殷震
- 关键词：新城疫病毒HN蛋白基因
- 应用Bac to Bac系统表达NDV长春株HN蛋白基因被引量：3
- 2001年
- 将质粒 p KSHNC利用 Bam HI和Xba I双酶切后回收。将转座载体 p Fast Bac I同样方法酶切、回收。将回收的 HNC与 p FastBac I连接 ,使目的基因亚克隆到 p Fast Bac I上的 ocu基因启动子下游的 MCS上 ,然后转化 E.coli DH5 α,以 LB/AMP+ GM平板筛选阳性重组子 ,经酶切鉴定 ,再转化至 E.coliDH1 0 Bac感受态细胞中 ,经抗性培养和蓝白斑筛选 ,挑取白色菌落为阳性重组表达载体 ,经酶切鉴定后 ,命名为 Bacmid HNC。经小量提取后 ,转染 sf- 9细胞 ,2 7℃培养 72 h,应用SDS- PAGE和 Western- blot检测和鉴定表达的 HN蛋白。结果表明 ,本研究成功地构建了 Bacmid HN重组表达载体 ,并在 sf- 9昆虫细胞中表达了 NDV长春株 HN基因 ,SDS-PAGE出现一条特异性泳带 ,约 74k Da,Western- blot结果出现一条杂交带 ,分子量与之相同 ,进一步证明构建的重组表达载体表达了 NDV长春株
- 丁壮金宁一王兴龙金扩世王宏伟米志强殷震
- 关键词：新城疫病毒HN基因
