国家自然科学基金(30600271)
- 作品数：6 被引量：0H指数：0
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- 金黄葡萄球菌agrC结合小肽的筛选及初步鉴定
- 2010年
- 金黄葡萄球菌（简称金葡菌）附属基因调节系统（accessory gene regulatory system，agr）是最重要的毒力因子调节系统和生物被膜形成调控系统。金葡菌几乎所有的胞外和表面毒力因子都在agr的控制之下，agrC是该系统中最重要的信号转导分子。本研究通过噬菌体展示技术，以agrC蛋白为靶分子，对噬菌体随机12肽库进行筛选，寻找能与agrC特异结合的多肽，将其作为靶向治疗金葡菌感染的载体，为临床研究金葡菌生物被膜形成的机制和研制新型靶向药物提供实验依据。
- 李学军杨和平戴晓天
- 关键词：金黄葡萄球菌噬菌体展示技术金葡菌感染生物被膜形成小肽调节系统
- 金黄色葡萄球菌附属基因调节子的表达与纯化
- 2009年
- 目的构建金黄色葡萄球菌附属基因调节子(accessory gene regulator C,agrC)的原核表达质粒pET28α(+)-agrC,并诱导该基因在原核细胞中表达与纯化。方法提取金黄色葡萄球(简称金葡菌)菌基因组DNA,PCR扩增agrC基因的目的片断全长,插入表达质粒载体pET28α(+)中,构建pET28α(+)-agrC重组子,经双酶切和测序证实后,转化表达宿主大肠杆菌DH5α,异丙基--βD硫代半乳糖(IPTG)诱导重组蛋白表达,His标签磁株纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测鉴定蛋白表达。结果成功构建了金葡菌pET28α(+)-agrC大肠杆菌表达重组子,实现了该蛋白在大肠杆菌中的高表达,分离纯化的产物纯度达到90%。结论agrC的成功表达和分离纯化,为该蛋白的生物功能研究和筛选出与该蛋白特异性结合的小肽奠定了基础,从而为深入研究agrC的作用机制并设计针对agrC作用的抗菌药物提供了有力依据。
- 李学军戴晓天杨和平
- 关键词：金黄色葡萄球菌蛋白表达
- 金葡菌肠毒素B对哮喘豚鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响及意义
- 2009年
- 目的:探讨金葡菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)对支气管哮喘豚鼠模型支气管肺泡液高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)及Th1/Th2细胞因子水平的影响。方法:18只豚鼠随机分为对照组6只、支气管哮喘豚鼠模型组6只和SEB组6只,模型组用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)建立豚鼠哮喘模型,SEB组在OVA致敏前10 d于腹腔注射SEB 1 ml(10 mg/L),对照组注射等量生理盐水。支气管哮喘诱发后2 d,收集支气管肺泡灌洗液进行白细胞和嗜酸性粒细胞计数,WB法测定HMGB1水平,ELISA法检测细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果:模型组肺泡灌洗液白细胞数、嗜酸性粒细胞数及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著升高,IFN-γ浓度显著降低。SEB组白细胞数、嗜酸性粒细胞数量及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著低于模型组,IFN-γ浓度高于模型组。结论:SEB能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中HMGB1水平及嗜酸性粒细胞数量及比例,其机制可能与Th1/Th2细胞因子比值调节有关。
- 罗光明戴晓天
- 关键词：金葡菌肠毒素B哮喘高迁移率族蛋白B1
- 金黄葡萄球菌附属基因调节子与生物被膜及耐药的研究进展
- 2008年
- 近年来由于金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染率的增加、产生耐药速度的加快，以及其易于从急性感染向慢性、持久性、复发性感染转变等特点，金黄葡萄球菌（简称金葡菌）导致的感染已逐渐成为人们关注的焦点。其附属基因调节子（accessory gene regulator，Agr）是一种重要的密度感应（quorumsensing，QS）信号系统和毒力因子调节系统，
- 李学军杨和平戴晓天
- 关键词：金黄葡萄球菌生物被膜耐药复发性感染急性感染密度感应
- 金黄色葡萄球菌agrC结合小肽对生物膜的抑制作用
- 2010年
- 目的:体外观察金黄色葡萄球菌附属基因调节子(Accessory gene regulator,agr)agrC的特异结合小肽对葡萄球菌生物膜形成的影响。方法:人工合成agrC结合小肽(命名为N1),微量板半定量和激光共聚焦显微镜观察其对生物膜形成的影响;RT-PCR及Western blot观察其对自溶血素(Autolysin E,altE)和icaA蛋白的转录与表达水平的影响。结果:N1在金葡菌的粘附聚集期能显著抑制生物膜的形成,并影响生物膜形成相关因子的转录与表达。结论:N1可用于预防和治疗早期金葡菌生物膜相关感染。
- 李学军杨和平戴晓天
- 关键词：金黄色葡萄球菌生物膜
- 金黄色葡萄球菌肠毒素B对膀胱癌作用的实验研究
- 2011年
- 目的观察金黄色葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxinB，SEB）对体外自然杀伤细胞（NK）细胞抑制T24膀胱癌细胞增殖及致细胞凋亡作用的影响，探讨SEB尾静脉注射对小鼠T24细胞皮下移植性膀胱肿瘤生长的作用。方法体外细胞实验采用补体裂解法分离收集人血NK细胞，用不同浓度的SEB（10^-5、10^-4和10^-3g/L）与NK细胞作用12h，然后取NK细胞加入T24细胞培养皿中，于12h、24h和48h后测定T24细胞的细胞活力（MTT法）和细胞凋亡率（流式细胞术）。动物实验建立T24细胞小鼠皮下移植膀胱肿瘤模型，30只小鼠随机分为生理盐水组、环磷酰胺组和SEB组（10、50、250μg／kg），检测各组肿瘤重量、抑瘤率，测定血浆和肿瘤TNF—α和IFN-γ水平（ELISA法）。结果NK细胞经过SEB处理后，T24细胞活力显著降低，凋亡率升高，具有显著的时间和剂量效应。SEB组肿瘤重量明显低于生理盐水组，抑瘤率接近环磷酰胺组，具有时间和剂量效应。血浆和肿瘤TNF—α和IFN-γ水平均高于其余两组。结论SEB可通过NK细胞作用及相关细胞因子等显著抑制T24细胞的体外活力及在体生长。
- 杨家荣杨慧潘铁军戴晓天
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B膀胱癌NK细胞
