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猪链球菌ZKHY株gdh基因的克隆与序列分析被引量：2: 2010年; 对猪链球菌ZKHY株的谷氨酸脱氢酶基因（gdh）进行克隆和序列分析，以ZKHY株的基因组DNA为模板，采用PCR方法扩增出谷氨酸脱氢酶基图片段，克隆于pMD-18T载体，转化宿主菌JM109中进行序列测定。将测序结果与GenBank已登录序列进行核苷酸和氨基酸的同源性分析。序列分析显示，成功克隆了猪链球菌ZKHY株的gdh基因，ZKHY与已报道的猪链球菌gdh基因有密切的亲缘关系，核酸序列与血清2、7、9型的同源性为97．2％～98．4％，其中与2型菌株同源性为97．2％～97．3％；与7型菌株同源性为98．4％；与9型菌株同源性为97．6％。其编码的氨基酸序列同源性则更高，与GenBank中已收录的序列同源性在98．9％以上。ZKYH株可能是属于2、7、9型之外的其他血清型；所克隆的基因在猪链球菌之中非常保守，可以进行表达以用作免疫学方面的相关研究。; 刘春生王新娟徐耀辉王川庆杨霞陈陆徐雪; 关键词：猪链球菌克隆

猪链球菌9型荚膜多糖cps9G基因的原核表达: 2011年; 本研究旨在克隆表达猪链球菌9型荚膜多糖部分抗原表位。设计1对引物,采用PCR法以猪链球菌9型河南分离株PY-2的基因组DNA为模板扩增出cps9G全基因序列。用限制性核酸内切酶BamHⅠ、XhoⅠ进行双酶切后,将其定向克隆到pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a-cps9G,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,并优化表达条件。结果表明,经1.2mmol/L IPTG诱导4h后SDS-PAGE分析表明,重组菌株表达出了约50 700的融合蛋白条带,与预期一致。Western-blotting分析表明,该融合蛋白具有特异的生物学活性。这为以后建立快速、简便、特异的免疫学检测方法及制备单克隆抗体提供了较好的抗原,同时为研制猪链球菌亚单位疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。; 刘春生徐耀辉陈陆杨霞王新娟刘春明王川庆; 关键词：猪链球菌克隆原核表达

猪链球菌种及其1、2、7型多重PCR检测方法的建立与应用被引量：8: 2010年; 【目的】建立致病性猪链球菌种及其1、2、7型的快速多重PCR检测方法,并进行初步的临床应用。【方法】根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及其1(14)、2(1/2)、7型特异的cps1I、cps2H、cps7H基因序列,分别设计4对引物,通过对单个基因PCR和多重PCR扩增条件、反应体系的优化,建立了快速检测猪链球菌种及其1(14)、2(1/2)、7型的4重PCR方法。利用保存的猪链球菌不同血清型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株,对建立的多重PCR方法进行特异性和敏感性试验。用所建立的4重PCR方法对河南省不同地市的39份猪扁桃体样品进行检测,并选取部分样品的PCR产物进行测序验证。【结果】所建立的4重PCR方法特异、敏感,对猪链球菌2型的最低检出水平为2.52×103CFU/mL。临床检测及测序结果显示,该多重PCR准确性较高。【结论】建立的4重PCR方法可用于猪链球菌主要致病血清型的快速检测。; 刘春生徐耀辉陈陆刘春明王新娟高冬生王永生张九州王川庆; 关键词：猪链球菌多重PCR

猪溶血性链球菌的分离鉴定及防治试验被引量：1: 2007年; 猪链球菌病（streptococcicosis suume）是由多种链球菌感染引起不同临床症状的疾病，常见的有败血症型、脑膜炎型、化脓性淋巴结炎型和关节炎型。可分为35个血清型，其中以2型流行最广，致病性最强，可引起猪和人败血症、脑膜炎、心内膜炎等症状，发病猪群死亡率可达80％。引起猪链球菌病的病原多为C群的兽疫链球菌（S．zooepide micus）和类马链球菌（S．equisimilis），D群的猪链球菌（S．suis），; 乔宏兴徐耀辉边传周; 关键词：猪链球菌病溶血性链球菌临床症状败血症型链球菌感染兽疫链球菌

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河南省科技攻关计划(072102130009)