四川省教育厅自然科学科研项目(10ZA052)
- 作品数：12 被引量：20H指数：4
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- 相关机构：四川农业大学吉林大学第一医院吉林大学更多>>
- 发文基金：四川省教育厅自然科学科研项目四川省科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学更多>>
- 饲料中苏氨酸含量对建鲤肉质及组织蛋白酶B、L的影响被引量：6
- 2019年
- 该试验测定了饲料中3组苏氨酸含量,即7.4 g/kg(缺乏组)、15.7 g/kg(适宜组)、25.2 g/kg(过量组),对建鲤肉质及组织蛋白酶B、L的影响。通过利用显微镜图像分析各处理组肌纤维特征、鱼肉品质指标,荧光合成肽底物法测定组织蛋白酶B(cathepsin B,CTS B)、组织蛋白酶L(Cathepsin L,CTS L)的活性,免疫组化法测定蛋白表达量,研究发现,饲喂90 d后,适宜组的肌纤维密度最高,肌纤维平均直径(22.12μm)最小;肌原纤维耐折力(0.1163μm)相对较高,而其断裂指数(A540=59.70)最低;剪切力(0.1684 kg·f)最高,失水率(21.02%)最低,p H值(6.91)最低;组织蛋白酶B、L的酶活性及表达量最低。综上,饲料中添加适宜水平苏氨酸能够改善鱼肉肌纤维特性及硬度品质,为通过营养素水平调节而提高建鲤鱼肉品质提供一定理论依据。
- 白稚子刘明宇李树红林昊林灵李冉陈治光陈秀华
- 关键词：建鲤肌纤维特性鱼肉品质组织蛋白酶
- 饲料中适宜含量铁对建鲤鱼糜冻藏品质变化及组织蛋白酶B/L的影响
- 2017年
- 对经过不同铁含量的饲料(缺乏组53.9 mg/kg,适宜组146.1 mg/kg)饲喂90 d后的建鲤,取鱼肉加工为鱼糜,于-20℃条件下进行冻藏实验,取样点为0、1、2、4、6周,测定鱼糜冻藏品质指标的变化,包括Ca^(2+)-ATPase活性、总巯基、二硫键、表面疏水性、TBA值;鱼糜冻藏期间组织蛋白酶B、组织蛋白酶L活性采用荧光合成肽底物法进行测定。结果表明,适宜含量铁能极显著提高鱼糜肌动球蛋白初始Ca^(2+)-ATPase活性、总巯基含量(p<0.01),降低二硫键含量(0.01
- 李冉钟海霞李树红杨娟胡强柯勤勤白稚子林灵李美良
- 关键词：铁建鲤鱼糜
- CNBr-Papain-Sepharose 4B亲和填料的制备及其性质研究
- 2021年
- 为探求从鱼类废弃组织及漂洗水中回收Cystatin的高效方法,首先自制了溴化氢-木瓜蛋白酶-琼脂糖凝胶(CNBr-Papain-Speharose 4B)亲和填料,确定了适宜的配基Papain偶联密度,之后测定了该亲和填料的热稳定性、酸碱稳定性、贮藏性能及使用的重复性,最后以该制备的填料对鱼糜漂洗水中的CPIs活性进行了初步回收。以对重组鲢鱼Cystatin吸附率为评价指标,确定适宜Papain偶联密度,即CNBr-Speharose 4B和Papain溶液最佳料液比为1∶7(g∶mL)。CNBr-Papain-Speharose 4B的适宜使用温度为4~40℃,且在pH 3.0~12.0之间稳定。CNBr-Papain-Speharose 4B在4℃下,6个月的贮藏期内,表现较好的稳定性。将填料装柱后进行验证实验,证明该填料的使用重复性能稳定,且最终成功高效地回收了鲢鱼鱼糜漂洗水中的CPIs。
- 刘明宇李树红杨娟林昊杨珂谭小千
- 关键词：填料性能
- 鲢鱼CPIs的三种电泳鉴定方法的比较研究被引量：5
- 2013年
- 本文对Geltain-substrate-SDS-PAGE反相酶谱法(方法 A)、Native-PAGE反相酶谱法(方法 B)和与papain反应后进行SDS-PAGE法(方法 C)三种电泳方法的鉴定效果、灵敏度进行了对比,确定了鲢鱼卵粗提样中小分子CPIs的最适电泳鉴定方法。结果表明,对于在电泳上活性不稳定的鲢鱼卵小分子CPIs而言,方法 A灵敏度较低,且可能出现假阳性现象;方法 B虽能准确鉴定小分子CPIs的存在,但不能判断分子量。方法 C,即小分子CPIs与papain在37℃下反应5h以上,然后进行SDS-PAGE,抑制剂条带清晰可见,鉴定效果好,且能提供分子量分布信息。此外,尽管荧光底物法和Azocasein法都无法检测到鲢鱼肝胰浓缩粗提液中半胱氨酸蛋白酶抑制活性,但是利用C法,则有效地鉴定了其中CPIs的存在和分子量分布情况。综上所述,方法 C或协同方法 B的电泳鉴定方法,适用于鲢鱼下脚料粗提样品中CPIs的鉴定,效果理想,灵敏度高,操作简便。
- 李树红任阳阳李艳芳彭海鑫曹坤李冉苏赵
- 关键词：鲢鱼半胱氨酸蛋白酶抑制剂电泳
- 鲢鱼和草鱼下脚料中CPIs抑制活性比较及其分子量分布的鉴定被引量：4
- 2014年
- 本研究首先确定偶氮酪蛋白（Azocasein）法和荧光合成肽法测定CPIs抑制活性的适宜反应体系,并证实Azocasein法更适合在鲢、草鱼下脚料（卵、皮）粗提过程中监测CPIs的抑制活性,而在层析过程中需采用高灵敏度的荧光合成肽法。Azocasein法测定表明,草鱼卵（349600units、332units/mg）和皮（25600units、87units/mg）中总活和比活均分别显著高于鲢鱼卵（10620units、3.98units/mg）和皮（3726units、14.14units/mg）;同时,草鱼卵中CPIs抑制总活、比活均高于皮;鲢鱼卵中CPIs抑制总活高于皮,但抑制比活则低于皮;此外,根据Sephacryl S-200分子筛层析中活性峰位置,初步判断两种鱼卵和皮组织中均存在高（50~128ku）、低（7~19ku）分子量形式的CPIs,但明胶底物-SDS-PAGE反相酶谱中仅可见高分子CPIs形成的条带,而小于20ku的低分子CPIs均无法得到鉴定。
- 李树红陈海蒋然然李美良李艳芳吴睿姜海洋肖安蓬何杰
- 关键词：鲢鱼草鱼下脚料抑制活性分子量分布
- 草鱼Stefin克隆表达、纯化及活性特征鉴定
- 2016年
- 文章克隆了草鱼（Ctenopharyngodon idellus）Stefin c DNA全长序列,全长294 bp,编码97个氨基酸,无二硫键,N端存在高度保守的Gly（3、4）残基及QXVXG（45-49）序列,比对结果显示其氨基酸序列与Burton＇s mouthbrooder（Haplochromis burtoni）Stefin A1一致性最高,为47.5%。进化树分析表明草鱼Stefin A与Burton＇s mouthbrooder（Haplochromis burtoni）、southern platyfish（Xiphophorus maculatus）、Colisa chuna（Trichogaster chuna）、lamprologini（Neolamprologus brichard）、elephant shark（Callorhinchus milii）及bicolor damselfish（Stegastes partitus）Stefin A聚为一类。将构建的原核表达载体Stefin-Pet30a转入E.coli BL21,以1 mol·L^-1IPTG诱导表达重组Stefin蛋白,而后经梯度尿素洗涤和镍亲和层析纯化,并分别利用SDS-PAGE和TSK-GEL G2000SWxl高效液相色谱检测诱导及纯化效果,SDS-PAGE结果显示重组Stefin蛋白得到高度纯化,最终呈现相对分子量11.4 k D的单一条带;其在高效液相上保留时间25.98 min处亦呈单一活性峰,纯度为96.28%。以荧光合成肽底物（Z-Phe-Arg-MCA）测活法鉴定重组草鱼Stefin对鲤鱼组织蛋白酶B、L的抑制活性,发现该重组蛋白对二者均体现了明显的抑制活性。
- 陈治光李冉李树蕾杨立彬蒋然然钟海霞陈恩蒋光阳李树红
- 关键词：草鱼基因克隆基因表达纯化鉴定
- 饲料中添加适宜水平铁对建鲤肉质、鱼糜稳定性及组织蛋白酶B/L的影响被引量：1
- 2019年
- 探讨饲料中添加适量铁对建鲤肉质、鱼糜品质及其肌肉中组织蛋白酶B/L的影响。以添加适宜水平铁的饲料饲喂90 d的建鲤(适宜组,铁实测质量分数146.1 mg/kg)为研究对象,同时以未添加铁组(缺乏组,铁实测质量分数53.9 mg/kg)作为对照。采样后测定鱼肉品质指标及肌肉中组织蛋白酶B/L活性,并采用免疫组化法进行蛋白表达定量;而后将2组鱼肉加工为鱼糜,并测定其稳定性指标。结果表明,与缺乏组相比,适宜组肌原纤维耐折力、断裂指数分别稍有上升及下降,但差异不显著(P>0.05);剪切力极显著增加31.80%(P<0.01),可溶胶原蛋白含量、不溶胶原蛋白含量和总胶原蛋白含量均分别极显著增加305.45%、180.98%、219.35%(P<0.01)。适宜组鱼肉p H及失水率略呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。适宜组组织蛋白酶B/L活性分别极显著(P<0.01)及显著(0.01
- 李冉钟海霞李树红杨娟胡强柯勤勤白稚子林灵李美良
- 关键词：铁建鲤鱼肉品质
- 建鲤组织蛋白酶L的克隆表达、纯化及活性特征鉴定被引量：1
- 2015年
- 首先采用TA克隆技术克隆建鲤组织蛋白酶L（Cathepsin L,CAT L）成熟肽基因片段并进行双酶切鉴定,进而构建表达载体CAT L-p ET-30a并转入宿主菌E.coli BL21,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）在37℃诱导2 h表达重组CAT L蛋白。而后经尿素梯度洗涤和镍离子亲和层析纯化目的蛋白,并利用SDS-PAGE检测诱导效果和纯化过程。最后以荧光合成肽底物（Z-Phe-Arg-MCA）测活法鉴定建鲤重组CAT L的热稳定性、p H稳定性,以及鱼糜生产和冻藏中常用添加剂对其活性稳定性的影响。双酶切鉴定结果表明成功克隆了目的基因片段,与鲤鱼CAT L基因序列相似性为99.11%。SDS-PAGE分析表明经诱导、尿素梯度洗涤及亲和层析后,成功获得高度纯化目的蛋白,分子量约28 ku。活性鉴定结果表明重组CAT L在20~50℃及p H3.0~6.5范围内稳定;氯化钠、焦磷酸钠对重组CAT L活性的抑制作用呈现剂量依赖关系,而各浓度蔗糖、山梨醇则对其活性无明显作用。本研究成功克隆、表达和纯化了建鲤CAT L,并阐明了热、p H及鱼糜生产和冻藏中常用添加剂对该酶稳定性的不同影响。
- 李冉陈治光蒋然然陈秀华李树红李新钟海霞但静
- 关键词：建鲤组织蛋白酶L克隆表达纯化
- 建鲤组织蛋白酶L的原核表达、纯化鉴定及多克隆抗体的制备
- 2015年
- 对原核表达的重组建鲤组织蛋白酶L(Cathepsin L,CAT L)蛋白进行尿素洗涤和Ni-NTA亲和层析纯化,该目的蛋白经300 mmol/L咪唑洗脱为单一峰,SDS-PAGE结合TSK-GEL G2000SWxl凝胶过滤高效液相色谱分析表明重组CAT L获得了高度纯化,分子量约28 k D,纯度超过95%。Z-Phe-Arg-MCA底物测活法显示该重组CAT L表现为半胱氨酸蛋白酶活性,能与其内源抑制因子Cystatin以1︰1的摩尔比结合,具有生物学活性。以纯化的重组CAT L蛋白免疫Balb/C小鼠获得抗血清,经ELISA法检测获得的CAT L抗血清效价高于1︰512000;Western blotting鉴定结果表明该抗体具有良好的特异性,能够识别原核表达的重组CAT L蛋白。免疫组织化学分析结果表明,该抗体还能识别建鲤小肠、肝胰脏、脾、背肌和心肌组织表达的内源性CAT L蛋白。因此可利用该抗体从蛋白水平检测CAT L在鱼类不同组织中的表达和分布情况。
- 李树红陈志光李冉李新李松陈秀华蒋然然李美良马璐阳
- 关键词：组织蛋白酶L原核表达纯化多克隆抗体免疫组化
- 重组Cystatin对冷藏鲢鱼的抑菌效果被引量：1
- 2019年
- 分离鉴定4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点腐败相关优势假单胞菌,并研究鲢鱼重组Cystatin(家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。首先利用CFC培养基从4℃有氧冷藏鲢鱼去皮肉片货架期终点,分离筛选出腐败相关假单胞菌,并采用生理生化和16 SrDNA法对其进行鉴定,其次将腐败菌株进行回接试验,通过测定各腐败菌回接组的挥发性盐基氮(TVB-N)值、菌落数、感官评分判断其致腐能力。最后,采用滤纸片扩散法和营养肉汤法鉴定重组鲢鱼Cystatin(家族Ⅱ)对优势腐败假单胞菌的抑菌效果。结果表明,荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)和草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)为主要致腐菌,所占比例分别为63.3%、26.7%,且荧光假单胞菌致腐能力强于草莓假单胞菌。重组Cystatin对两种菌均有明显的抑菌效果,且呈剂量依赖关系。
- 钟海霞李冉李树红杨娟胡强柯勤勤林灵白稚子李美良
- 关键词：鲢鱼CYSTATIN抑菌作用
