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包载人基质金属蛋白酶组织抑制因子1重组腺病毒微球的制备及其表征: 2011年; 背景:高分子载药微球可控释药物,易于实现靶向给药,是近年发展快速的的新剂型。目的:制备携带人基质金属蛋白酶组织抑制因子1的重组腺病毒微球,并进行表征分析。方法:采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇包被携带人基质金属蛋白酶组织抑制因子1基因的重组腺病毒制成微球,体外检测其形态大小、包封率、载病毒率及释放规律。重组腺病毒微球感染人肝癌细胞株HepG2,检测感染效率,明胶酶谱分析测定微球对HepG2分泌TIMP-1的影响,Western blot检测人基质金属蛋白酶组织抑制因子1蛋白的表达,MTT实验检测细胞增殖率,体外侵袭小室实验检测细胞侵袭力。结果与结论:构建的包载人基质金属蛋白酶组织抑制因子1重组腺病毒的PELA微球直径约1.965μm,包封率为60.0%,载病毒率为10.5×108/mg,在120h内释放病毒量接近60%,总释放时间长于240h。腺病毒微球感染HepG2细胞,当微球>10mg时,感染效率可达90%以上。微球感染HepG2细胞后经Western blot检测可见人基质金属蛋白酶组织抑制因子1蛋白的表达。MTT实验及体外侵袭实验结果均提示重组腺病毒微球对HepG2细胞的体外增殖和侵袭有抑制作用,腺病毒微球组细胞增殖率较低(P<0.05),腺病毒微球感染的HepG2细胞体外侵袭力明显降低(P<0.01)。结果证实,制备的人基质金属蛋白酶组织抑制因子1重组腺病毒微球,高效缓释,可明显抑制肝癌HepG2细胞体外增殖和侵袭。; 夏冬贺凯李显蓉徐亮; 关键词：基质金属蛋白酶组织抑制因子腺病毒微球

携改良rHBVpre-S1基因酵母表达载体的构建及其免疫原性鉴定被引量：1: 2013年; 目的:构建携改良rHBVpre-S1基因的酵母表达载体,探讨rHBVpre-S1蛋白的免疫原性。方法:以我国HBV流行株adr的DNA为模板,PCR法扩增HBVpre-S1基因,再应用PCR定点突变技术对HBVpre-S1的抗原决定簇氨基酸的编码基因作无免疫原性修饰,酶切后与酵母穿梭表达载体pGBKT7连接,测序后命名为pGBKT7-rHBVpre-S1,提取转化质粒的酵母蛋白行免疫蛋白印迹分析。蛋白纯化后,以蛋白颗粒行腹腔内注射免疫昆明小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗pre-S1抗体的阳性率。结果:成功地构建了携改良rHBVpre-S1基因的酵母表达载体,免疫印迹检测出人rHBVpre-S1蛋白的表达,昆明小鼠经目的抗原免疫5次后其抗体阳性率显著性低于对照组。结论:构建的pGBKT7-rHBVpre-S1基因酵母表达载体兼具嗜肝性及无免疫原性的优势,可为肝病的靶向基因治疗提供理想的载体。; 夏冬甘云辉姚晖徐亮; 关键词：乙型肝炎病毒免疫原性酵母表达载体

包载TIMP-1重组腺病毒微球的制备及其对肝癌细胞增殖的抑制被引量：6: 2010年; 目的:制备携带人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)的重组腺病毒乳酸聚乙烯醇(poly-DL-lactide-poly,PELA)微球,探讨其对HepG2肝癌细胞增殖的影响。方法:采用溶剂挥发法双乳液体系,以可降解的生物材料PELA包被携带TIMP-1基因的重组腺病毒制成微球,测定其粒径、载病毒量、包封率及释放规律。重组腺病毒微球感染HepG2细胞,荧光显微镜观测感染效率,透射电镜观测超微结构,半定量RT-PCR检测TIMP-1mRNA表达;MTT法检测HepG2细胞增殖。结果:成功构建包载TIMP-1重组腺病毒的PELA微球,直径约1.965μm,包封率为60%,载病毒率为10.5×108efu/mg,在120h内释放病毒量接近60%,总的释放时间长于240h。空白微球无毒性PELA病毒微球感染HepG2细胞后,细胞稳定表达TIMP-1mRNA;对HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率表达47%。结论:包载TIMP-1重组腺病毒的PELA微球可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,为化学高分子载体运载基因治疗肝癌提供了实验依据。; 夏冬吴斌梁建群余少鸿徐亮; 关键词：基质金属蛋白酶组织抑制因子腺病毒微球

第三型腹膜炎的中西医结合治疗与预后评估被引量：1: 2014年; 目的:探讨第三型腹膜炎(tertiary peritonitis,TP)的临床治疗方法及其预后评估。方法:78例TP患者随机分组,对比单纯西医治疗和中西医结合治疗的临床疗效,同时利用APACHEⅢ(简称APⅢ)评分系统进行预后评估分析。结果:32例单纯西医治疗组,死亡23例,死亡率为71.9%;46例中西医结合治疗组,死亡15例,死亡率为32.6%(P<0.01)。APⅢ评分与实际病死率间呈显著正相关(r=0.73,P<0.01),APⅢ评分与预计病死率间亦呈显著正相关(r=0.76,P<0.01)。结论:中西医结合治疗TP相较单纯西医治疗有更好的临床疗效,APⅢ评分可用于TP的预后评估。; 夏冬夏国栋刘庆邹庆伟徐亮; 关键词：腹膜炎第三型腹膜炎中西医结合治疗

携改良型HBVpre-S1基因表达载体的构建及表达: 2012年; 目的:构建携改良型HBVpre-S1基因表达载体。方法:以我国HBV流行株adr的DNA为模板,PCR法提取并扩增HBVpre-S1,用定点突变延伸法完成突变。将突变后的HBVpre-S1基因片段通过双酶切,转化到制备好的DH5a感受态细胞中,纯化、质粒测序后,用醋酸锂法转化酵母细胞AH109。表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western免疫印迹检测。结果:成功扩增出HBV流行株adr的HBVpre-S1基因片段,成功完成HBVpre-S1基因的突变,重组质粒pGBKT7-HBVpre-S1构建成功。Western免疫印迹分析,显示对照无表达,而转化了pGBKT7-HB-Vpre-S1的印迹分析可见明显目的基因蛋白条带且无杂带。结论:成功扩增出HBVpre-S1基因片段并构建出携改良型HBVpre-S1基因表达载体,并在酵母中融合表达成功。; 刘小波董荣坤甘云辉黄建朋张征夏冬徐亮吴宏杰; 关键词：真核表达载体酵母细胞

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四川省卫生厅科研基金(090210)

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