教育部“春晖计划”(Z2004-2-65004)
- 作品数：9 被引量：60H指数：6
- 相关作者：丁剑冰马秀敏温浩贾海英曹春宝更多>>
- 相关机构：新疆医科大学新疆医科大学第一附属医院汕头大学更多>>
- 发文基金：教育部“春晖计划”国家自然科学基金新疆医科大学科研创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细粒棘球绦虫EgA31疫苗的分子生物学特征被引量：6
- 2008年
- 免疫预防是控制棘球蚴病经济、快速且有效的方法。近年来棘球蚴病的免疫学和疫苗研制方面均取得了很大进展,分子疫苗成为预防包虫病流行较理想的方法。其中细粒棘球绦虫EgA31疫苗是一有希望的疫苗候选分子,本文从EgA31抗原的基因结构和免疫特性等方面介绍了其分子生物学特征。
- 贾海英丁剑冰傅玉才
- 关键词：细粒棘球绦虫分子生物学特征
- 细粒棘球绦虫重组pET30a-EgA31疫苗的构建和诱导表达被引量：5
- 2009年
- 克隆细粒棘球绦虫EgA31抗原基因,构建pET30a-EgA31原核表达载体,并在大肠埃希菌宿主系统中表达EgA31重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE分析。从细粒棘球绦虫成虫组织中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板RT-PCR克隆获得EgA31抗原基因,将其克隆至pUCm-T载体,测序确定其正确性。利用定向克隆技术将EgA31抗原基因片段克隆至原核表达质粒pET30a上,转化E.coliDH5α,根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆,通过PCR分析和酶切鉴定筛选出阳性克隆。IPTG初步诱导和表达pET30a-EgA31重组蛋白,SDS-PAGE电泳检测,并经凝胶图像分析确定目的蛋白的表达水平。测序表明选取的pET30a-EgA31阳性克隆均为正确连接EgA31抗原基因的重组质粒。经IPTG诱导后重组蛋白得到成功表达,在相对分子量约为31kDa处有表达条带,表达量约占菌体总蛋白质的26%。成功克隆并构建了pET30a-EgA31原核表达质粒,初步诱导表达出EgA31重组蛋白,为进一步研究其免疫特性奠定了基础。
- 贾海英马海梅丁剑冰曹春宝吾拉木·马木提马秀敏张海涛朱明吕国栋温浩
- 关键词：细粒棘球绦虫原核表达质粒
- 棘球蚴感染中的免疫逃避相关分子被引量：6
- 2008年
- 棘球蚴可以依赖有效的免疫逃避机制在宿主体内长期生存,并造成慢性感染。包囊囊壁、原头节和囊液等所含抗原物质多而复杂,在逃避宿主的免疫应答中起重要作用。棘球蚴逃避宿主免疫反应机制分为主动免疫逃避与免疫调节两种:棘球蚴通过抑制补体的激活,耗竭特异性抗体,影响T细胞活性,下调B细胞功能等有效地避开宿主的免疫反应。棘球蚴的EgTeg蛋白和囊液中的抗原B等能明显抑制中性粒细胞的趋化作用;刺激宿主产生TH2型细胞因子,激发非保护性的免疫应答;干扰单核细胞分化和调节树突状细胞的表型,逃逸宿主免疫监视。
- 曹春宝丁剑冰马秀敏
- 关键词：细粒棘球蚴免疫逃避分子
- 细粒棘球绦虫egG1Y162抗原基因的克隆及序列分析被引量：11
- 2009年
- 根据多房棘球绦虫emY162基因序列设计引物,利用PCR以细粒棘球绦虫原头蚴和成虫的基因组DNA和cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162和PUCm-T/egG1Y162cDNA重组质粒,经PCR、酶切及测序后,进行序列分析。细粒棘球绦虫2个不同发育阶段均克隆出egG1Y162基因,从基因组DNA和cDNA克隆得到的片段长度分别为1680bp和459bp,登录号分别为AB458258和AB458259。
- 曹春宝马秀敏丁剑冰贾海英吾拉木·马木提马海梅温浩
- 关键词：细粒棘球绦虫克隆
- PCR-RFLP和微卫星DNA标记法在棘球绦虫感染诊断中的应用
- 2011年
- 目的探讨PCR-RFLP和微卫星DNA标记法诊断棘球绦虫感染的临床价值。方法对40例包虫病患者的40个包囊标本提取DNA后,分别采用PCR-RFLP和微卫星DNA标记法进行检测。结果以棘球绦虫DNA为模板,用特异性引物进行PCR扩增,可得到大小约为561 bp的扩增条带,产物的长度与引物设计的预期产物长度一致。以棘球绦虫DNA为模板,用Sea引物进行PCR扩增,可得到约90 bp的扩增条带,产物的长度与引物设计的预期产物长度一致。40个标本均鉴定为细粒棘球绦虫,39个为细粒棘球绦虫G1基因型,1个为细粒棘球绦虫G6基因型。结论 PCR-RFLP和微卫星DNA标记法是简单、快速、有效的棘球绦虫基因型检测诊断方法。
- 刘春燕马秀敏丁剑冰谌宏鸣
- 关键词：PCR-RFLP方法
- 细粒棘球蚴egG1Y162抗原基因的克隆及蛋白质序列分析被引量：16
- 2008年
- 目的克隆细粒棘球蚴egG1Y162基因序列并进行蛋白序列对比分析。方法从细粒棘球蚴原头蚴提取mRNA,mRNA反转录为cDNA。设计特异引物,以cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后进行序列分析。结果egG1Y162 cDNA为459bp,编码153个氨基酸;同源性比较表明,egG1Y162 cDNA与emY162同源性为95%,与eg95的同源性为30.61%。结论成功克隆egG1Y162抗原基因,egG1Y162蛋白质氨基酸序列与emY162有很高的相似性,但同其他抗原蛋白质序列存在明显差异,所以egG1Y162是一种新的抗原基因。
- 曹春宝马秀敏丁剑冰贾海英吾拉木·马木提张海涛朱明马海梅吕国栋温浩
- 关键词：细粒棘球蚴CDNA
- 细粒棘球绦虫Eg95基因疫苗和重组抗原诱导小鼠免疫应答的比较研究被引量：13
- 2006年
- 目的观察比较细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗诱导小鼠的免疫应答状况。方法实验组和对照组小鼠分别注射Eg95重组抗原(rEg95)、费氏佐剂(FCA)、pcDNA3-Eg95基因疫苗、pcDNA3质粒和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检测抗体IgG和IgG2a亚类水平;采集脾细胞用四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖反应。结果rEg95免疫组小鼠在第二次免疫后开始检测到抗Eg95抗原的IgG,并随着免疫次数的增多,血清抗体效价升高,在第1次免疫后第10周时,免疫抗体滴度可达到1∶25,600。Eg95基因疫苗免疫的小鼠产生抗体滴度随免疫次数的增加而升高,最高可达1∶3,200,但是低于Eg95重组蛋白免疫小鼠产生的抗体滴度水平。pcDNA3-Eg95免疫组产生IgG2a亚类抗体水平明显高于对照组和rEg95组。在第四次免疫后,进行淋巴细胞转化试验,MTT法检测证实rEg95和pcD-NA3-Eg95免疫的小鼠,其脾细胞均可在体外被特异性刺激增生。结论细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗均可诱发小鼠产生特异性免疫应答。
- 丁剑冰马秀敏魏晓丽林仁勇王俨张静萍温浩
- 关键词：细粒棘球绦虫基因疫苗免疫应答小鼠
- 我国棘球绦虫感染的不同宿主状况被引量：10
- 2009年
- 刘春燕马秀敏丁剑冰谌宏鸣
- 关键词：绦虫感染终末宿主棘球绦虫中间宿主动物体内
- 细粒棘球蚴Eg95重组蛋白表达及其血清学反应的研究被引量：8
- 2009年
- 目的诱导表达和纯化细粒棘球蚴Eg95抗原重组蛋白,对其与CE病人血清学反应情况进行研究。方法IPTG诱导pET28a-Eg95原核表达质粒,表达和纯化Eg95重组蛋白,SDS-PAGE电泳对其进行初步鉴定,Westernblot法检测其与中间宿主CE病人血清学反应情况。结果pET28a-Eg95重组蛋白得到成功表达,SDS-PAGE电泳显示相对分子量约为15kDa。Westernblot结果表明,pET28a-Eg95重组蛋白能被CE病人血清识别,11例CE病人血清中8例呈阳性反应。结论细粒棘球蚴Eg95抗原存在于中间宿主CE病人体内,Eg95蛋白作为保护性抗原可能成为CE病人术后辅助性治疗的手段之一。
- 贾海英马秀敏丁剑冰曹春宝朱明吾拉木·马木提温浩
- 关键词：细粒棘球蚴血清学反应
