云南省自然科学基金(2002C0070M)
- 作品数：12 被引量：65H指数：6
- 相关作者：林月秋汤逊周田华阳运康蔡培强更多>>
- 相关机构：成都军区昆明总医院中国科学院美国迈阿密大学更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因工程化分泌神经营养因子-3的鼠胚神经干细胞实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的:探索以Lentivirus为载体,构建同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和神经营养因子-3(NT-3)的基因工程化鼠胚神经干细胞(NSC)的可行性。方法:体外分离培养鼠胚NSC,用同时携带NT-3和GFP的lentivirus转染构建工程化NSC;用荧光显微镜、鼠胚背根神经结培养(DorsalRootGanglion,DRG)、Westernblot等方法检测基因工程NSC的转基因表达。结果:荧光显微镜观察到几乎100%的工程化NSC表达GFP;DRG培养和Westernblot检测到基因工程化NSC能高效分泌NT-3蛋白。结论:以Lentivirus为载体,构建同时携带并稳定表达GFP和NT-3的基因工程化鼠胚NSC是可行的,可为脊髓损伤基础研究提供有价值的细胞资源。
- 蔡培强汤逊林月秋Blits BOudega M阳运康徐林周田华
- 关键词：神经干细胞基因工程神经营养因子-3脊髓损伤
- 人胚神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤被引量：13
- 2005年
- 目的探讨人胚神经干细胞(hNSC)移植治疗脊髓损伤(SCI)的可行性。方法分离、培养和鉴定hNSC;用5溴2脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记hNSC,并将其移植到14只T10半横断的Wistar大鼠损伤脊髓内(另外14只T10半横断损伤的大鼠作为对照组,仅损伤脊髓内注射DMEM/F12培养液),用BrdU的FITC免疫荧光染色检测移植细胞的存活和迁徙,用NF200、GFAP免疫组织化学鉴定移植细胞的分化,BBB评分评定大鼠功能恢复情况。结果(1)获得了大量的hNSC;(2)用免疫组织化学可以检测到移植的hNSC能在体内长时间存活(达2个月)并向远处迁徙,并分化为神经元和胶质细胞;(3)检测到实验组大鼠BBB得分明显高于对照组大鼠(P<0.01),在SCI后第10周时实验组和对照组BBB得分最大差距达到2.1分。结论hNSC移植能促进SCI大鼠后肢功能恢复,它是SCI移植治疗较有价值的细胞资源。
- 蔡培强汤逊林月秋徐林阳运康周田华
- 关键词：脊髓损伤
- 人胚胎神经干细胞移植治疗大鼠脊髓完全横断损伤被引量：8
- 2006年
- 目的:探讨利用人胚胎神经干细胞(hNSC)移植治疗大鼠脊髓完全横断损伤的效果。方法:分离、培养和鉴定hNSC。将培养的hNSC植入脊髓完全横断的Wistar大鼠损伤局部,并设DMEM-F12培养液注射组(对照组)。移植术后第1、2、4、6、8、10周对两组大鼠进行BBB运动功能评分,观察脊髓功能恢复情况;并取损伤处脊髓组织行免疫组织化学染色,了解双苯亚甲胺(Hoechst)标记的移植细胞在体内存活和分化情况。结果:体外细胞培养可获得大量hNSC;细胞移植4周后,实验组的BBB运动功能评分较对照组明显提高(P<0.01);第4周、第10周免疫组化结果示移植的hNSC在损伤脊髓内存活、分化形成神经元和神经胶质细胞,并向损伤脊髓头尾两侧迁徙。结论:hNSC移植后仍保持其多向分化能力;hNSC移植可改善脊髓全横断损伤大鼠的运动功能。
- 尹国栋汤逊林月秋徐永清周田华
- 关键词：脊髓损伤人胚胎神经干细胞细胞移植
- 人BDNF重组逆转录病毒载体的构建被引量：1
- 2005年
- 目的构建PLEGFP—BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备。方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片段,插入到PMD18-T载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株,获得PMD18T—BDNF克隆,对该克隆进行限制性酶切分析和DNA序列测定;从阳性克隆中获取hBDNF全长编码片段,与真核表达载体PLEGFP质粒连接,构建PLEGFP—BDNF真核表达重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌JM109,再经氨苄LB培养基筛选,酶切,PCR与测序鉴定。结果PLEGFP—BDNF重组逆转录病毒构建成功。结论hBDNF在大肠杆菌中的成功表达在转基因治疗CNS病变方面具有潜在应用价值。
- 阳运康林月秋汤逊蔡培强
- 关键词：HBDNF重组逆转录病毒载体质粒BDNF基因真核表达重组质粒真核表达载体
- 人胚胎嗅鞘细胞与神经干细胞联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的研究被引量：11
- 2006年
- 目的:探索人胚胎嗅鞘细胞(hOECs)与神经干细胞(hNSCs)联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。方法:制作Wistar大鼠脊髓全横断模型,9—10d后,分别将取材自人胎脑的hOECs和hNSCs移植到脊髓损伤处(联合移植组),并设hOECs移植组、hNSCs移植组和对照组,移植术后第1、2、4、6、8、10周进行BBB运动功能评分,取材行荧光化学(Hoechst33342)和免疫组织化学染色(P75、NF-200、GFAP、Synaptophysin)观察。结果:术后4—10周,hNSCs组、hOECs组和联合移植组的BBB评分较对照组明显提高(P<0.05),其中,联合移植组的运动功能改善更显著。免疫组化染色显示,hNSCs可以在损伤脊髓内存活10周以上,并分化为神经元或星形胶质细胞,联合移植组和hOECs组P75染色呈阳性反应,hOECs与hNSCs联合移植可促进神经突触的形成,恢复神经元之间的联系。结论:hOECs和hNSCs联合移植可促进脊髓全横断损伤大鼠神经突触的再生,改善其肢体运动功能。
- 尹国栋汤逊林月秋徐永清周田华
- 关键词：人胚胎神经干细胞BBB评分
- Lentivirus介导神经营养因子-3促进脊髓损伤大鼠功能恢复被引量：3
- 2005年
- 目的探讨Lentivirus介导分泌神经营养因子-3(NT-3)直接体内转基因治疗大鼠脊髓损伤作用和机制。方法将28只Wistar大鼠在T10水平制成半横断损伤模型,随机分为体内转基因治疗组和损伤对照组,每组14只;用携带NT-3和绿色荧光蛋白(GFP)的Lentivirus对大鼠行直接体内转基因治疗;荧光显微镜观察体内转基因表达,后肢运动功能评分法(BBB评分)检测大鼠后肢功能恢复情况。结果用荧光显微镜检测到损伤脊髓内有较多的持续表达转基因的细胞;BBB评分结果显示,从伤后第4周开始,实验组大鼠后肢功能较对照组明显恢复(P<0.01),至第10周时,实验组和对照组BBB分差增大,达3.3分。结论Lentivirus是一种有效的转基因载体,由Lentivirus介导分泌NT-3的直接体内转基因治疗能够明显促进损伤脊髓的功能恢复。
- 蔡培强汤逊林月秋Oudega Mart徐林Blits B阳运康M.OUDEGA
- 关键词：神经营养因子-3介导转基因治疗后肢运动功能微镜观察
- Lentivirus介导分泌神经营养因子-3的基因工程神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究被引量：8
- 2005年
- 蔡培强汤逊林月秋Martin OudegaBas Blits徐林阳运康
- 关键词：神经干细胞移植治疗神经营养因子-3基因工程分泌介导
- 人胚胎嗅鞘细胞移植修复大鼠脊髓全横断损伤被引量：6
- 2006年
- [目的]探索人胚胎嗅鞘细胞（hOECs）移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。[方法]分离、培养并鉴定人胚嗅鞘细胞，24只Wistar大鼠，随机分为实验组和对照组，均行T10节段脊髓全横断。术后第9～10d，实验组、对照组分别移植Hoechst33342标记的hOECs 5μl（2．5×10^5个细胞）、DMEM—F12培养基5μl。移植术后第1、2、4、6、8、10周进行BBB运动功能评分，取材行荧光化学（Hoechsd3342）和免疫组织化学染色（P75、NF-200、Synaptophysin）。双盲条件下进行数据统计。[结果]移植的hOECs可以在损伤脊髓内存活10周以上，可向损伤脊髓头尾两端迁移；术后4～10周实验组的BBB运动功能评分明显高于对照组（P〈0．01）；P75染色实验组呈阳性反应；NF-200和Synaptophysin免疫组化染色，实验组神经纤维、突触数目和密度都较对照组高。[结论]hOECs移植对脊髓全横断损伤大鼠运动功能恢复具有促进作用。
- 尹国栋汤逊林月秋徐永清周田华
- 关键词：脊髓损伤细胞移植BBB评分
- 人胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定研究被引量：14
- 2003年
- 目的:研究人胚胎神经干细胞的培养条件及体外分化情况。方法:从12周龄人胚胎脑皮质分离细胞,采用无血清培养技术,协同应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和重组人白血病抑制因子(rhLIF)进行培养;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记检测细胞的增殖能力,间接免疫荧光化学法检测细胞的分化情况。结果:培养得到的大量半悬浮生长的神经干细胞球能够传代培养;BrdU标记阳性,可诱导分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论:人胚胎脑皮质分离细胞培养得到的细胞群具有神经干细胞的基本特征,可进一步用于基础及临床研究。
- 唐少锋汤逊蔡景霞林月秋周田华
- 关键词：胚胎神经干细胞细胞分离细胞培养细胞鉴定
- Lentivirus介导表达多基因的人胚基因工程神经干细胞的实验研究
- 2005年
- 目的:探索以Lentivirus为载体,构建同时携带并表达多基因的基因工程人胚神经干细胞(hum an neu鄄ral stem cell,hNSC)的可行性,为脊髓损伤治疗的研究提供材料。方法:培养和鉴定hNSC;用携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)和神经营养因子-3(neurotrophic factor-3,NT-3)的Lentivirus转染hNSC;用荧光显微镜观察、鼠胚背根神经结培养(dorsal root ganglion,DRG)和Slot blot等方法检测基因工程hNSC的多基因表达情况。结果:培养获得了大量的hNSC;荧光显微镜观察到几乎100%的hNSC表达GFP;基因工程hNSC的培养液能促使大鼠DRG旺盛生长;Slot blot检测到基因工程hNSC能高效分泌NT-3蛋白。结论:以Lentivirus为载体能构建同时携带并稳定表达多基因的基因工程hNSC,为脊髓损伤治疗的基础研究及进一步临床应用提供了有价值的细胞资源。
- 蔡培强汤逊林月秋OUDEGA MBLITS B阳运康徐林周田华
- 关键词：LENTIVIRUS人胚神经干细胞基因工程神经营养因子-3
