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免疫磁性细胞分选技术分离纯化新生大鼠骨骺前软骨干细胞被引量：25: 2004年; 目的　探讨前软骨干细胞 ( precartilaginousstemcells,PSCs)的分离纯化方法。　方法　用免疫磁性分选技术分离有成纤维细胞生长因子受体 - 3(fibroblastgrowthfactorreceptor -3,FGFR - 3)表面标志的PSCs。用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光鉴定纯化后的PSCs。　结果免疫磁性分选技术获得高度纯化、高成活率的PSCs( >95 % )。　结论　免疫磁性分选技术能有效分离纯化PSCs。; 游洪波陈安民程浩; 关键词：软骨免疫干细胞细胞分选骨骺新生大鼠分选技术

Immunomagnetic Indirect Positive Sorting of Precartilaginous Stem Cells from Neonatal Rat: 2006年; To investigate the technique of sorting high-purity precartilaginous stem cells from rat＇s perichondrium, neonatal rat＇s perichondrium cells suspensions were incubated with monoclone antibody of anti-fibroblast growth factor receptor-3 （anti-FGFR-3）, and the labeled cells were separated from the suspension in the magnetic field by immuno-beads coated with the second antibody, Purity of the sorted neural stem cells was found to be 93.0 %-99.0 %, with living cells amounting to 80 % -85 %. The magnetic cell sorting system could effectively separate precartilaginous stem cells from perichondrium cell suspensions.; 程浩陈安民游洪波

前软骨干细胞的分离培养及其鉴定被引量：2: 2004年; 目的 :探讨体外分离、培养及鉴定前软骨干细胞 (PCSC) ,为相关的实验研究奠定基础。方法 :采用酶消化法从新生大鼠干骺端中收集细胞 ,用免疫磁珠法分选出前软骨干细胞 ,用DMEM F12培养基进行体外培养 ,用免疫组化方法鉴定 ,对分离出的前软骨干细胞进行相关分子生物学研究。结果 :从新生大鼠干骺端中成功培养出前软骨干细胞 ,培养条件下贴壁生长 ,成团块状 ,细胞表面有FGFR 3的标记物 ;细胞生长迅速。结论; 程浩陈安民游洪波; 关键词：前软骨干细胞细胞培养

藻酸盐水凝胶与前软骨干细胞构建组织工程化骺板被引量：8: 2004年; 目的探讨藻酸盐水凝胶(alginate hydrogel,AH)与前软骨干细胞(precartilaginousstem cells,PSCs)复合物体内构建骺板样组织的可行性。方法利用多聚赖氨酸和藻酸盐制备AH。将PSCs在含有TGF-β3的藻酸盐微珠中培养,分别于7、14、21天将被诱导的PSCs包埋入AH制备成AH-PSCs复合物,未被诱导的PSCs作对照。分别将AH-PSCs自体植入大鼠背部肌肉中,定期取材测定移植物的重量、细胞数,并行组织学检查及Ⅱ型胶原免疫组化检测。结果PSCs被诱导7天组移植物大约70％能形成骺板样结构;PSCs被诱导14天组及21天组的移植物能形成软骨组织及骨组织,但无骺板样结构;PSCs未被诱导的移植物无软骨组织及骨组织形成。被诱导7天组的移植物在20周的平均重量及每个移植物所含的细胞数均大于被诱导14天组或21天组的移植物(P<0.01);被诱导7天组的移植物在20周时平均重量及每个移植物所含的细胞数均大于在4周或10周时(P<0.01)。结论TGF-β3诱导PSCs7天的AH-PSCs复合物在体内能构建骺板样组织。; 游洪波陈安民; 关键词：前软骨干细胞转化生长因子Β

新生大鼠骨骺前软骨干细胞培养及细胞库建立被引量：7: 2005年; 目的　建立新生大鼠骨骺前软骨干细胞 (precartilagious stem cells,PSCs)库 ,为 PSCs作为组织工程种子细胞修复骨骺损伤的研究奠定基础。　方法　利用磁性细胞分选系统分离纯化有成纤维细胞生长因子受体 3(fibroblast growth factor receptor3,FGFR- 3)表面标志的骨骺 PSCs。将纯化后的 PSCs体外扩增至第 3代 ,采用液氮深低温保存细胞 ,应用 RT- PCR、免疫组织化学及免疫荧光等技术定期 (2、4周 )对复苏 PSCs行生物学特性鉴定。　结果　复苏后 PSCs存活率高 (>95 % ) ,细胞生长周期稍滞后。RT- PCR、免疫组织化学及免疫荧光检测均有较强的 FGFR- 3表达。经液氮冻存的 PSCs在细胞增殖、表型特征方面无显著变化 ,基本保持了原代 PSCs的生物学特性。　结论　成功建立了新生大鼠 PSCs细胞库 ,为应用组织工程技术修复骨骺损伤的研究提供良好的种子细胞。; 游洪波陈安民程浩; 关键词：成纤维细胞生长因子受体3 新生大鼠细胞库骨骺损伤

骨缺损区不同时相IGF-Ⅱ的表达与凋亡的相关性被引量：6: 2005年; 目的　探讨骨缺损区在修复过程中胰岛素样生长因子Ⅱ (IGF -Ⅱ )mRNA不同时间中的表达与凋亡的相关性。方法　建立兔桡骨缺损模型 ,利用免疫组织化学方法观察骨缺损区不同时间IGF -Ⅱ的表达 ,同时利用末端脱氧核苷酸酶TDT介导的dUTP -X切口末端标记 (TDT -mediateddUTP -Xnickendlabeling ,TUNEL)法 ,检测细胞凋亡 ,显微镜下观察并作细胞计数。并进行相关性分析。结果　骨折后 5～ 7d间充质细胞、成骨细胞和软骨细胞内均有IGF -ⅡmRNA表达 ,为高峰期。到 14d时表达的细胞数目明显减少。细胞凋亡在骨折后 7d数目最多 ,以软骨细胞和间充质细胞为主。统计学检验证明IGF -ⅡmRNA的表达与细胞凋亡具有正相关。结论　骨折愈合过程中骨缺损区细胞凋亡的发生 ,可以清除无用的细胞 ,IGF -Ⅱ可能直接参加了凋亡的发生。; 肖骏王岩; 关键词：骨缺损区时相凋亡成骨细胞

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国家自然科学基金(30170944)