国家自然科学基金(30772344)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- Smad3促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬被引量：7
- 2014年
- 目的探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响。方法 21d SD雌性大鼠腹腔注射孕马血清20 IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养。培养细胞分为3组:空白对照组:培养液中不加任何处理因素;敲低实验组:培养液中加入Smad3基因特异性的SiRNA及转染试剂RNAiMAX;过表达实验组:培养液中加入Smad3真核表达质粒及转染试剂Lipo 2000。免疫细胞化学方法鉴定培养细胞纯度;Western blotting方法检测Smad3蛋白表达变化,检测转染效率。Smad3基因敲低及过表达后,Western blotting方法检测自噬体膜形成标志蛋白LC3B及自噬调控相关蛋白Bcl-2的蛋白表达变化。结果 Smad3敲低时,LC3B蛋白Ⅱ型与Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)变化不明显,Bcl-2蛋白表达明显降低;Smad3过表达时,LC3BⅡ/Ⅰ明显增加,Bcl-2蛋白表达明显增加。结论Smad3基因特异的SiRNA及真核表达质粒可以有效地转入大鼠卵巢颗粒细胞中,Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬,其机制可能与Bcl-2蛋白相关。
- 申春艳董静霞徐健
- 关键词：SMAD3卵巢颗粒细胞自噬免疫组织化学免疫印迹法
- Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞增殖被引量：4
- 2011年
- 目的探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞增殖功能的影响。方法 21d SD雌性大鼠,腹腔注射孕马血清20IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养,用Smad3基因特异的siRNA基因沉默后,采用免疫细胞化学法检测颗粒细胞中Smad3蛋白表达的变化,以判定基因沉默效率,Smad3基因沉默后用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Cyclin D2蛋白表达的变化。结果 Smad3基因沉默后,卵巢颗粒细胞中PCNA阳性细胞百分比为(25.80±1.70)%,显著低于空白对照组(40.80±2.50)%,Smad3基因沉默后Cyclin D2阳性细胞百分比为(25.00±2.90)%,与空白对照组(55.50±2.50)%相比明显减少。结论 Smad3基因可促进大鼠卵巢颗粒细胞的增殖。
- 金玉洁董静霞刘玉霞申春艳徐健
- 关键词：SMAD3SIRNA颗粒细胞免疫组织化学
- 盐酸吉西他滨对乳腺癌小鼠Tusc2、Lats2基因表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨盐酸吉西他滨对乳腺癌小鼠肿瘤抑制因子候选基因2(Tusc2)、大型肿瘤抑制因子2(Lats2)基因mRNA及蛋白水平表达的影响。方法首先建立小鼠乳腺癌模型,盐酸吉西他滨药物处理前(0d)、处理后第5天(5d)、处理后第10天(10d)分别取材,采用RT-PCR和Western blotting方法检测Tusc2、Lats2基因表达量的变化。结果盐酸吉西他滨作用乳腺癌小鼠第10天(10d)后,RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,实验组Tusc2与Lats2 mRNA相对表达量分别增加约4.5倍与8倍(P<0.05),其余各组与相应空白对照组相比,相对表达量无统计学差异(P>0.05);同时Western blotting结果显示,实验组与空白对照组相比,TUSC2与LATS2蛋白相对表达量分别上调约10倍与5倍(P<0.05)。其他各组之间相比统计学无显著差异(P>0.05)。结论盐酸吉西他滨能有效上调乳腺癌小鼠体内Tusc2、Lats2基因的表达。
- 李业霞曹进能祁丽花董静霞迟晓春徐健
- 关键词：盐酸吉西他滨乳腺癌免疫印迹法小鼠
- 人卵巢颗粒细胞的体外培养方法探讨被引量：5
- 2011年
- 目的建立人卵巢颗粒细胞分离纯化、体外培养的有效方法。方法收集体外受精—胚胎移植(IVF-ET)穿卵时的卵泡液,用胰蛋白酶消化法及密度梯度离心法分离纯化颗粒细胞并用不同培养基进行培养。结果用体积分数为50%的Percoll细胞分离液分离,DMEM/F12或McCoy’5a液体培养基进行培养,细胞纯度高,存活率高,后续生长良好。结论建立了人卵巢颗粒细胞体外培养的稳定模型,为颗粒细胞的体外研究奠定良好的基础。
- 刘玉霞董静霞金玉洁申春艳徐健
- 关键词：卵巢颗粒细胞细胞培养
- Survivin在正常睾丸中的表达和定位
- 2012年
- Survivin是1997年由耶鲁大学的Ambrosini等利用效应细胞蛋白酶受体-1（effectorcellproteasereceptor-1，EPR-1）的cDNA在人类基因组库中筛选克隆的一种凋亡抑制基因。Survivin蛋白属于凋亡抑制蛋白（1AP）家族成员，在大多数肿瘤中高表达，在成体已分化的正常组织细胞中几乎检测不到。然而，Survivin不仅仅是一个肿瘤特异性蛋白，有实验证明在鼠胚胎处于分化状态的组织中可以检测到Survivin的表达，而且在成体造血系统中也可表达Survivin。本研究采用免疫组织化学显色方法检测了不同年龄段人的正常睾丸组织中Survivin蛋白的表达定位，以探讨其在正常生精过程中的作用。
- 申春艳董静霞徐健
- 关键词：SURVIVIN蛋白睾丸组织凋亡抑制基因凋亡抑制蛋白人类基因组特异性蛋白
