国家科技支撑计划(2006BAD06A06)
- 作品数：34 被引量：111H指数：6
- 相关作者：王永录张永光杜进鑫张昱潘丽更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 口蹄疫病毒株AF/72结构蛋白VP1克隆及其T细胞表位预测被引量：6
- 2010年
- 以AF/72RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-T easy体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRI酶切法鉴定。应用BIMAS生物学软件对AF/72株结构蛋白VP1的H-2Dd、H-2Kd、H-2Ld、A20限制性T细胞表位进行预测,并对不同限制性的T细胞表位进行对比。结果表明,口蹄疫AF/72株结构蛋白VP1长639bp,编码213个氨基酸。不同限制性的T细胞表位虽然不尽相同,但与已鉴定的T细胞表位相比较,它们之间也有一些类似的、并且可能是通用型的T细胞表位。本试验通过生物信息学方法预测AF/72结构蛋白VP1的T细胞表位,为进一步试验确定T细胞表位和口蹄疫病毒T细胞表位的研究提供了一种有效的方法。同时为口蹄疫病毒表位疫苗的设计提供有效地理论基础。
- 刘新生王永录
- 关键词：口蹄疫病毒T细胞表位VP1蛋白
- 口蹄疫病毒株AF72 VP3的结构模拟与分析被引量：3
- 2009年
- 以口蹄疫病毒株AF72RNA为模板，反转录并扩增目的基因，PCR纯化产物与pGEMT—Easy载体连接并转化JM109菌株，用凝胶电泳、PCR和SpeI／SphI双酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72VP3的核苷酸序列，利用同源建模的方法建立AF72VP3结构蛋白的3D结构，在此基础上，综合亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数预测AF72VP3结构蛋白的B细胞抗原表位。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的（P〉0．05）；而它们在氨基酸水平上的变异率差异显著（P〈0．05）。该毒株与20株源于GenBank中的VP3氨基酸序列比对发现其保守区主要位于第1～24、24～35、36～42、45～56、65～122、124～172、177～210、211～219位。AF72VP3结构蛋白三维空间结构可分为A、B和c3个结构区域，蛋白呈现较规则的空间构象，其中18～23、30～44、60～75、113～124、130～142、193～220氨基酸区段是AF72VP3结构蛋白可能的B细胞抗原表位区域，该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供更有价值的参考信息。
- 陈启伟王永录张永光潘丽方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺张昱张淑刚杜进鑫李正丰王刚
- 关键词：口蹄疫病毒B细胞表位
- 生物传感器及其在兽医临床检测中的应用被引量：2
- 2009年
- 张昱王永录
- 关键词：生物传感器兽医现代生物技术环境监测传感器技术
- 噬菌体展示技术及其在抗原表位筛选中的应用被引量：6
- 2009年
- 噬菌体展示技术(Phage display technology)是以噬菌体或噬菌粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体,此技术现已被广泛应用于生命科学的许多领域。本文主要介绍了噬菌体展示技术的原理,并就噬菌体表面展示系统的不同类别的表达载体分别做了描述,同时阐述了该展示技术在抗原表位研究中的应用。
- 陈启伟王永录
- 关键词：噬菌体展示技术抗原表位
- 口蹄疫病毒3D聚合酶B细胞表位的筛选鉴定被引量：2
- 2009年
- 以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增3D聚合酶基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对获得AF723D聚合酶的核苷酸序列和推导氨基酸序列,综合分析3D聚合酶的亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数,预测其潜在B细胞抗原表位并人工合成表位肽段,利用间接ELISA对潜在表位进行筛选鉴定,结果显示,表位3D2和3D4为病毒株AF72 3D聚合酶的优势B细胞表位,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究奠定基础。
- 张昱王永录张永光潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮张中旺张淑刚李正丰杜进鑫
- 关键词：口蹄疫病毒间接ELISAB细胞表位
- 口蹄疫A型病毒AF/72株特异性鉴定及其豚鼠标准血清的制备
- 2009年
- 用口蹄疫A型病毒AF/72株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为108.0/ml;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他7株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ng/ml,远大于22 ng/ml的国际标准。将此细胞毒与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离血清,经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经ELISA检测此血清的抗体滴度、原血清、强阳性血清和弱阳性血清的中和效价均远小于1∶45。参照标准的要求,确定强阳性血清为口蹄疫A型病毒株AF/72的参考血清。
- 杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽
- 关键词：FMD血清
- 口蹄疫疫苗研究新进展被引量：5
- 2009年
- 口蹄疫是世界性重大动物疫病之一。接种疫苗是预防该病的重要手段之一,而研制高质量、安全有效的疫苗,不但是决定疫苗免疫效果的关键,也是成功预防、控制直至最终消灭口蹄疫的先决条件。目前,除传统疫苗仍然在口蹄疫防控中扮演重要角色以外,国内外诸如亚单位疫苗、载体疫苗、核酸疫苗、基因缺失疫苗、合成肽疫苗、可饲疫苗和多表位疫苗等的研究和探索已全面展开,有望为口蹄疫的有效防控提供新的途径。
- 杜进鑫王永录
- 关键词：口蹄疫疫苗
- 保护剂及其在口蹄疫疫苗中的研究进展被引量：4
- 2009年
- 保护剂在动物疫苗中具有重要的作用,直接影响疫苗的质量。以保护剂为核心介绍了在疫苗保存前病毒抗原和保护剂的准备,保护剂的选用原则,分类、作用机理,着重讨论了保护剂在口蹄疫疫苗中的研究进展以及当前存在的问题,并对其应用前景提出展望。
- 李正丰王永录
- 关键词：保护剂口蹄疫疫苗
- 口蹄疫A型病毒AF/72株标准细胞毒株的研制被引量：1
- 2009年
- 用口蹄疫A型病毒AF/72株的第3代乳鼠组织毒,通过乳鼠继续适应3代后,转适BHK-21细胞,获得该毒株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为10-8.0/mL;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他6株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ng/mL,远大于22 ng/mL的国际标准。综合纯净性检验结果、特异性检验结果和146S含量,确定AF/72/MF6/BF12为口蹄疫A型病毒株AF/72的标准细胞毒。
- 杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽
- 关键词：FMD毒株
- 口蹄疫A型病毒AF/72株免疫原性分析被引量：2
- 2010年
- 用口蹄疫A型病毒AF/72株,经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他5株A型口蹄疫病毒株比对,同源性均大于90%。将此病毒灭活后与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离血清,经液相阻断ELISA和微量细胞中和试验检测此血清的抗体效价,其均值分别为2.093和1.227。用微量细胞中和试验分别测定了AF/72参考血清对5株A型口蹄疫病毒的中和抗体效价,各试验重复3次,其平均值为2.156。分别计算AF/72对5株不同病毒株的r值,结果为0.79~0.92,均值为0.85。按照OIE标准,AF/72具有较强的免疫原性,抗原谱广,可作为制造口蹄疫A型疫苗的备选毒株。
- 杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮
- 关键词：FMD免疫原性
