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重组钩端螺旋体多抗原位点同源合成基因的表达及其抗原性鉴定: 2012年; 目的:构建重组钩端螺旋体(钩体)优势抗原表位原核表达系统,以期获得高纯度的钩体优势抗原表位重组融合蛋白,为进一步研究钩体快速检测方法奠定基础。方法:利用基因重组的方法构建表达质粒pET-rLP。经IPTG诱导后,获得高效表达带组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,包涵体蛋白经尿素变性溶解,采用镍离子亲和纯化,利用SDS-PAGE、Western blotting和间接ELISA法鉴定。结果:在相对分子质量为20 000处有1条特异性蛋白条带,为重组钩体优势抗原表位融合蛋白;ELISA结果显示其可与钩体阳性血清特异性结合,而与其他血清无交叉反应。结论:成功构建重组钩体优势抗原表位原核表达系统,并获得高纯度的重组钩体优势抗原表位融合蛋白。; 张士尧浦昀徐坤李金华原野鞠文李娟; 关键词：钩端螺旋体原核表达融合蛋白活性鉴定

重组鼠疫汉坦钩端多抗原位点同源合成基因的表达及活性鉴定被引量：5: 2011年; 将人工合成的含鼠疫耶尔森氏菌的2个抗原位点、汉坦病毒的5个抗原位点和钩端螺旋体的5个抗原位点的串联基因片段克隆到原核表达载体pET-20b中,构建重组表达质粒pET-rYHL.转化E.coliBL21(DE3)后获得表达菌株.表达菌株经IPTG诱导后,可高效表达带组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白.包涵体蛋白经尿素变性溶解、His Trap HP Kit柱纯化、SDS-PAGE及Western Blot分析研究,结果表明,在分子量40000处有一特异性蛋白条带,获得纯度达98%以上的蛋白.进一步ELISA试验表明,该蛋白与鼠疫、流行性出血热及钩端螺旋体病阳性血清均能较好地结合,而与其它鼠传疾病血清无交叉反应.; 浦昀齐燕飞徐国良徐卉张士尧孟日增宋秀玲杨怀宁李娟; 关键词：鼠疫汉坦病毒钩端螺旋体合成基因活性鉴定

吉林口岸地区主要蜱类及蜱媒病原检测分析被引量：7: 2009年; 本研究对吉林省口岸地区主要蜱类进行监测，并采用分子生物学方法对新发蜱媒病进行检测。结果共采集蜱类1620只，分属1科3属4种，其中，集安口岸为日本血蜱Haemaphysalis japonica和嗜群血蜱Haemaphysalis concinna2种，以嗜群血蜱H．concinna为主；延边口岸为森林革蜱Dermacentor silvarum、日本血蜱H．japonica和嗜群血蜱H．concinna3种，以嗜群血蜱H．concinna为主；长白口岸为森林革蜱D．silvarum和全沟硬蜱lxodes persulcatus2种，以全沟硬蜱I．persulcotus为主。蜱携带病原体检测结果显示，集安口岸嗜群血蜱幼蜱中检测到伽氏疏螺旋体B．garinii和Q热贝氏斯柯氏体C．burnetii2种病原体，最小感染率（MIR）为0．25％；若蜱和成蜱中检测到伽氏疏螺旋体B．garinii、艾氏疏螺旋体B．afzelii和Q热贝氏斯柯氏体C．burnetii3种病原体，阳性感染率分别为2．08％、0．35％、0．69％。延边日岸嗜群血蜱中检测到伽氏疏螺旋体B．garinii、艾氏疏螺旋体B．afielii和Q热贝氏斯柯氏体C．burnetii3种病原体，阳性感染率分别为4．88％、1．63％和1．86％；日本血蜱中，检测到伽氏疏螺旋体B．garinii、Q热贝氏斯柯氏体C．bureaii和北亚斑点热群立克次体R．sibirica3种病原体，阳性感染率均为1．85％。长白口岸森林革蜱检测到伽氏疏螺旋体B．garinii、人单核细胞埃立克体E．chaffensis、O热贝氏斯柯氏体C．burnetii、北亚斑点热群立克次体R．sibirica、黑龙江立克次体R．heilongfiangensis5种病原体，阳性感染率分别为2．56％、5．13％、2．56％、20．51％、7．69％，其中从1只森林革蜱中同时检测出北亚斑点热群立克次体R．sibirica和伽氏疏螺旋体B．garinii的复合感染；在全沟硬蜱中，检测到伽氏疏螺旋体B．garinii、艾氏疏螺旋体B．afielii、人单核细胞埃立克体E．chaffensis、嗜吞噬无形体A．phagocytophilum、微小巴贝西原虫B．mi; 浦昀李娟宋秀环李宝贵马承祯李冰心杨怀宁; 关键词：全沟硬蜱

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国家质检总局科技计划项目(2009IK214)

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