四川省科技支撑计划(2012NZ0001)
- 作品数：34 被引量：194H指数：8
- 相关作者：徐志文朱玲周远成郭万柱蔡雨函更多>>
- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室中江县畜牧局更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”四川省青年科技基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生经济管理更多>>
- 犬细小病毒四川株的分离鉴定与一步生长曲线的测定被引量：6
- 2014年
- 为研究犬细小病毒（CPV）生长规律，利用F81细胞从四川地区疑似CPV感染的病犬血样粪便中分离得到1株CPV，对该株病毒进行理化试验、微量中和试验、PCR鉴定以及分子生物学系统鉴定后，证实该分离株是CPV，命名为SC—C。以SC—C分离株感染F81细胞，感染后不同时间收取上清，利用CPV荧光定量PCR检测方法对不同样品中病毒DNA进行定量分析，绘制CPV一步生长曲线。结果显示，感染后，0～8h细胞内病毒DNA含量较低，感染8h后，细胞内病毒DNA含量逐渐增长，12～60h细胞内病毒DNA含量迅速增长，60h后细胞内病毒DNA含量变化不大。CPV感染F81细胞，感染后O～12h为潜伏期，病毒DNA含量维持在较低水平；12～60h为突破期，病毒DNA含量呈对数增长；感染60h后增长速度减缓，病毒含量维持在较高水平逐步进入稳定期，病毒DNA含量呈“S型”曲线增长。
- 韩燕朱玲周远成廖春燕徐志文郭万柱
- 关键词：犬细小病毒荧光定量PCR
- 四川省部分地区公猪精液中蓝耳病分子流行病学调查被引量：2
- 2013年
- 试验采集四川省7个市多个猪场67头公猪的精液和血清,调查该地区公猪蓝耳病病毒的感染情况。RT-PCR检测结果显示,猪场蓝耳病病毒(PRRSV)抗原阳性率从0到16.7%不等,共检出7份PRRSV阳性精液,检出率为10.45%,其中2份为经典株、5份为高致病株。血清学检测结果显示,猪场蓝耳病抗体阳性率平均为85.1%,最低62.5%,最高100%;抗体S/P值变异系数健康猪场最低为17.5%,疑似蓝耳病症状猪场最低为59.0%、最高81.2%,从抗体水平上验证了抗原的检测结果。结果表明,四川部分地区公猪精液中不仅存在蓝耳病病毒经典株和高致病株,且存在混合感染和隐性感染。
- 王雪李海全徐志文
- 关键词：蓝耳病精液分子流行病学
- 猪乙型脑炎病毒SC-YA株部分生物学性状的研究被引量：1
- 2013年
- 为猪乙型脑炎疫苗的生产和保存提供指导和依据,本试验对乙型脑炎病毒(JEV)SC-YA株的理化特性、细胞培养特性进行了研究。理化鉴定结果表明,JEV SC-YA株是具有囊膜的RNA病毒;胰蛋白酶、酸性、高温等均可使其失去活性。该株病毒的最佳培养条件为培养液用量为6mL,接种剂量为10-4TCID50/0.1mL时,接种后第48小时病毒滴度达到最大值。结果表明,JEV SC-YA株能被用于疫苗生产。
- 廖珊刘骁朱玲郭万柱
- 关键词：乙型脑炎病毒理化性质
- 猪博卡病毒双重PCR检测方法的建立及其应用被引量：14
- 2013年
- 为了建立快速检测猪博卡病毒(PBoV)所有基因型的诊断方法,根据GenBank中公布的PBoV的不同基因型序列,对其进行同源性分析,分别设计出扩增PBoV1/PBoV2及PBoV3/PBoV4/PBoV5的引物,在分别建立单一PCR检测方法的基础上,通过对两组引物的比例、退火温度等条件的优化,首次建立了同时检测PBoV1/PBoV2和PBoV3/PBoV4/PBoV5的双重PCR方法。使用该方法对来自四川省部分猪场的18份腹泻仔猪病料进行检测。结果显示,建立的双重PCR特异性强,敏感性高,重复性好;四川省存在猪博卡病毒感染,样品中有10份为猪博卡病毒阳性,其中7份为猪博卡病毒3/4/5型,2份为猪博卡病毒1/2型,1份为猪博卡病毒1/2型及3/4/5型共感染。结果表明,建立的双重PCR能成功检测出猪博卡病毒所有基因型,并能区分PBoV1/PBoV2和PBoV3/PBoV4/PBoV5,为猪博卡病毒的诊断和预防提供了技术支持。
- 蔡雨函朱玲周远成杨文宇徐志文
- 猪环曲病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3
- 2014年
- 根据GenBank中猪环曲病毒N基因设计合成2对特异性扩增引物,成功建立了猪环曲病毒的套式RT-PCR快速检测方法。为验证本方法的特异性,以猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪嵴病毒、沙门菌及大肠杆菌作为阴性对照,结果显示只有在猪环曲病毒的核酸作为模板时才能扩增出预期的258bp和198bp 2条片段。敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸含量为1pg。结果表明,建立的RT-PCR方法特异性强、灵敏度高,可用于猪环曲病毒的临床检测和流行病学调查。利用本方法对采集自四川省部分地区的50份临床样品进行检测,猪环曲病毒阳性率为30%。
- 王赟周璐周远成蔡雨函朱玲徐志文郭万柱
- 关键词：套式RT-PCR
- 维生素D3通过自噬途径缓解轮状病毒对猪肠细胞的损伤
- 本研究旨在考察维生素D能否通过调节自噬路径缓解轮状病毒感染。试验一采用2×2因子试验设计,两个主效应分别为轮状病毒应激条件(灌服病毒和不灌服病毒)和日粮维生素岛添加水平(200 IU和5000 IU),24头DLY生长猪...
- 梁小芳陈代文虞洁何军田刚毛湘冰郑萍王曲圆黄志清罗均秋余冰
- 关键词：维生素D3肠道自噬
- 乙型脑炎病毒NS3蛋白对其体外复制能力的影响被引量：5
- 2013年
- 为研究乙型脑炎病毒(JEV)NS3蛋白对其体外增殖能力的影响,为JEV疫苗的大量生产提供一定的理论基础,构建真核重组质粒pCI-neo-NS3并转染至BHK-21细胞内,接种JEV后于不同时间点采集细胞内以及细胞外病毒,采用荧光定量RT-PCR法检测各时间点细胞内和细胞外病毒含量,同时设立不同质量浓度NS3原核表达蛋白对JEV复制影响对照组。用SPSS 21.0统计分析软件分析,比较病毒增殖情况。分析结果显示转染含NS3基因的真核载体组细胞内和上清中病毒含量都极显著高于对照组(P<0.01),加入NS3原核表达蛋白组上清中病毒含量极显著低于对照组(P<0.01)。
- 廖珊刘骁朱玲徐志文郭万柱
- 关键词：乙型脑炎病毒NS3蛋白荧光定量
- 猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及增殖规律被引量：18
- 2013年
- 为了研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）的生长规律，利用Vero细胞从四川腹泻仔猪小肠内容物中分离得到1株病毒，经RT—PCR检测、序列比对、病毒理化试验与微量中和试验证实该分离株为猪流行性腹泻病毒，命名为SC—P，以该毒株经口接种28日龄仔猪，5d后出现明显临床症状。以SC—P分离株感染Vero细胞，收集不同时间的细胞上清，利用建立的PEDV荧光定量检测方法对不同时间点样品中病毒RNA进行定量分析，绘制PEDV的一步生长曲线。结果显示，细胞外的病毒RNA含量呈S形曲线增长，感染后第2～6小时，病毒RNA含量的增长较慢，第6～24小时呈对数增长，第24～72小时增长速度减缓，维持在较高水平，进入稳定期。表明PEDV感染Vero细胞，病毒在细胞内增殖到达一定数量以后，便逐步向胞外释出。
- 付梦瑾朱玲吴云飞唐蕊涵徐志文郭万柱
- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 猪嵴病毒RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：9
- 2013年
- 根据GenBank中猪嵴病毒(porcine kobuvirus)3D-RNA聚合酶基因序列设计并合成了1对特异性引物,建立了一种猪嵴病毒RT-PCR检测方法。反应产物测序结果与GenBank中猪嵴病毒SH-W-CHN/2010/China株比较,基因序列同源性为93%。利用该方法对猪蓝耳病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、链球菌、猪巴氏杆菌和大肠杆菌等病原核酸进行扩增,均无条带出现,表明该方法具有较高的特异性;敏感性试验表明,该方法最低能检测到的病毒核酸含量为1pg。利用所建立的RT-PCR方法检测采集自我国四川地区123份临床样品,结果阳性率为59.3%,表明猪嵴病毒在四川地区猪群中流行率较高。
- 李淞朱玲周远成吴云飞陈蕾徐志文郭万柱
- 关键词：RT-PCR
- 壳寡糖对脂多糖应激仔猪生产性能和免疫功能的影响
- 本试验旨在探讨壳寡糖对脂多糖应激仔猪生产性能和免疫功能的影响。试验采用2×2因子设计,主效应分别为COS(0和300 mg/kg寡糖素,寡糖素中COS有效含量10%,中泰和(北京)科技发展有限公司惠赠),应激状态(正常-...
- 张玲陈代文郑萍毛湘冰虞洁田刚何军王曲圆黄志清罗均秋余冰
- 关键词：壳寡糖脂多糖仔猪
- 文献传递
