转基因生物新品种培育专项(2009ZX08012-001B) 作品数:8 被引量:19 H指数:3 相关作者: 邵碧英 江树勋 康林 陈文炳 凌杏园 更多>> 相关机构: 中国检验检疫科学研究院 深圳出入境检验检疫局 福建出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 转基因生物新品种培育专项 深圳出入境检验检疫局科研项目 福建出入境检验检疫局科技计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 轻工技术与工程 更多>>
用于MLPA技术的单链长探针制备方法研究 2012年 依据多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)的单链探针设计要求,将检测各基因位点的MPLA探针对的上游探针设计为短探针,采用化学法加以合成;将下游探针作为长探针,以不对称PCR方法制备。本文应用该技术制备了检测12个转基因玉米品系的MLPA下游探针;并用其中的2个长探针进行转基因玉米品系检测,结果表明制备探针完全符合转基因检测要求。该技术操作简单,成本低,应用价值高。 陈菲 陈枝楠 康林 潘广 叶奕优 肖启明 凌杏园关键词:MLPA 探针 PUC18 限制性内切酶 超声波处理对水稻种子转基因成分荧光PCR检测的影响 2016年 以转基因水稻科丰6号含量0.1%(m/m)与0.01%(m/m)的水稻种子为样品,对影响检测结果的DNA提取过程中样品CTAB裂解缓冲液常规温育与超声波温育处理进行比较分析。结果表明,在不同样品颗粒细度的样品中,无论温育时间10 min、30 min还是1 h,CTAB缓冲液超声波温育处理与常规温育处理比较,获得的DNA质量浓度有明显提高,转基因成分NOS、Cry1Ab、Kf6(Ub-C)的荧光PCR检测Ct值差异达到极显著,超声波温育处理30 min、1 h可基本达到常规温育处理4 h或8 h的样品荧光PCR检测效果,使得水稻种子转基因成分荧光PCR检测时间至少节省3-7 h,大幅度提高了检测效率。 缪婷玉 邵碧英 彭娟 江树勋 陈文炳关键词:超声波处理 水稻种子 转基因成分 实时PCR 转基因玉米EPSPS蛋白适体的筛选与结构分析 被引量:5 2010年 通过体外合成长度为70个碱基的随机ssDNA文库,采用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以转基因玉米EPSPS蛋白为靶目标进行16轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、测序,初步获得与转基因玉米EPSPS蛋白特异性结合的适体。并用Macaw2.05和DNAMAN软件对每个适体的保守序列和二级结构进行分析。结果表明:一级结构分析序列同源性可分为四大群,其中A群有11条序列含有67个保守碱基;二级结构分析结果表明,茎环状和口袋状等结构可能是适体与转基因玉米EPSPS蛋白结合的结构基础。利用SELEX技术获得与转基因玉米EPSPS蛋白特异结合的适体群,其一级和二级结构与亲和力密切相关。 江树勋 黄新 邵碧英 陈敏 陈洪俊 Jun Sheng Lin 陈文炳 吴亚君 潘大仁关键词:转基因玉米 SELEX 适体 进口转基因玉米品系特异性检测 被引量:5 2011年 从文献、网站和数据库中收集了14个转基因玉米品系特异性定量检测方法,将这些方法应用于从美国进口的近60万t转基因玉米的检测,检出了国家批准的11个转基因品系,还在全国首次从大宗原粮中检出国家未批准转基因玉米品系MON89034。这为转基因玉米品系特异性检测标准的制定打下了基础。 凌杏园 章桂明 潘广 向才玉 康林 余道坚 郑耘关键词:转基因玉米 实时荧光PCR 超声波温育处理提取水稻种子DNA方法探讨 被引量:2 2015年 为了节省水稻种子DNA提取时间,在超声波环境中进行CTAB温育前处理,并与常规环境温育处理的结果进行比较.结果表明,3种水稻样品颗粒细度与8种CTAB温育处理的24个组合中,超声波温育处理30与60 min对提取的DNA产量和水稻内源基因(GOS)的实时荧光PCR检测Ct值的影响,与相应同时间的常规温育处理比较,都达到差异显著水准,并达到常规温育8 h的效果,在确保检测结果准确的前提下,大幅度节省DNA提取时间,至少可节省7 h. 王志纯关键词:水稻种子 DNA提取 实时荧光PCR 转人乳铁蛋白基因奶牛多重PCR检测方法的研究 被引量:1 2011年 本研究旨在建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品出入境检测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据牛物种特异性基因(mtDNA)设计奶牛内源基因引物,根据外源基因人乳铁蛋白基因(human lactoferrin,hLF)和新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。本方法敏感、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。 朱振营 李风翠 林祥梅 吴绍强 仇松寅 李宁 王建武 薛振华 刘建 张书霞关键词:转基因奶牛 多重PCR 影响米粉干转基因成分荧光PCR检测的若干因素分析 被引量:3 2014年 为提高米制品中转基因成分实时荧光PCR检测的灵敏度与检出率,以及优化样品中转基因成分的检出效果,以添加不同转基因含量的米制品(米粉干)为模拟转基因样品,对影响检测效果的因素包括样品颗粒细度、DNA提取过程中样品在CTAB裂解缓冲液中温育时间等因素进行分析。结果显示,当样品颗粒细度>100目、CTAB温育时间达到8h条件下,样品DNA提取及荧光PCR检测结果最好;在最优化的条件组合下,样品转基因成分的检出限可达到0.001%转基因含量,是通常认为的荧光PCR检出限0.01%的10倍。 江树勋 张冰 邵碧英 缪婷玉 彭娟 陈文炳关键词:转基因成分 实时荧光PCR 检出限 应用MLPA技术进行转基因多重检测研究 被引量:3 2011年 多重连接探针扩增技术已广泛应用于医学基因点突变、基因缺失和基因甲基化等基因检测,具有高通量、特异性高和经济的特点。本文首次将这一技术应用于转基因检测,实现了高通量转基因检测的目的,提高了检测效率。 凌杏园 向才玉 章桂明 康林 陈洪俊 陈枝楠关键词:转基因生物