湖南省科技计划项目(06FJ3167)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：肖煜东张斌杨卉周顺科秦燕更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅二医院更多>>
- 发文基金：湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人转铁蛋白受体基因载体的构建与鉴定及在Hela细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的运用人转铁蛋白受体(hTfR)作为MR报告基因,制作包含hTfR蛋白编码区的表达质粒,并对其进行检测鉴定,为下一步体外、体内MR分子影像研究打下基础。方法通过脂质体介导的基因转染构建过量表达hTfR的Hela细胞系,以pCDNA3.1(+)-hTfR为实验组,转染空白质粒pCDNA3.1(+)为对照组,运用PCR及Westen-Blot的方法在基因水平和蛋白水平检测hTfR在转染前后的表达水平,鉴定转染效果。结果以pOTB7-TFRC质粒为模板,运用RT-PCR的方法进行hTfR基因编码区的扩展,成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR高表达质粒,测序鉴定正确;通过脂质体转染Hela细胞,瞬时转染效率约70%;RT-PCR显示转染pCDNA3.1(+)-hTfR质粒组较对照组生成的hTfR mRNA明显增高(1.179±0.047 vs.0.260,t=16.8,P>0.05);Western-Bolt显示转染组较对照组编码的TfR蛋白明显增高(0.648±0.025 vs.0.333,t=10.8,P<0.05)。结论成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR表达质粒;质粒转染Hela细胞后表达的hTfR mRNA及hTfR蛋白均明显增高;为下一步分子影像学的实验奠定了基础。
- 张斌杨卉肖煜东秦燕周顺科
- 关键词：HELA细胞质粒逆转录聚合酶链反应分子影像学
