中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(XDJK2012C082)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
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- 尼罗罗非鱼IgT重链基因的克隆与表达分析被引量：1
- 2016年
- 目的进一步了解尼罗罗非鱼免疫球蛋白的结构和功能。方法通过RACE技术得到Ig T c DNA全长,从m RNA水平检测其在不同发育时期和不同组织中的表达情况,并通过q PCR检测在嗜水气单胞菌刺激情况下Ig T和Ig M的免疫应答规律,构建重组表达载体体外表达部分恒定区序列并制备单克隆抗体。结果克隆得到全长为1 759 bp的c DNA序列,编码506个氨基酸,表达重组蛋白,纯化得到目标蛋白,并获得CH3的单克隆抗体。RT-PCR结果显示,Ig T在受精后的第8天即可检测到,Ig T在4月龄鱼头肾和脾脏中表达,在6月龄鱼中,除在以上2个组织中表达之外,在皮肤、肠、鳃、卵巢和精巢中也可检测到。嗜水气单胞菌刺激后,q PCR结果显示:Ig T和Ig M在头肾、肾、脾脏、肠、鳃和皮肤中均有不同程度的上调。结论克隆得到尼罗罗非鱼Ig T重链c DNA序列并成功制备了单克隆抗体,为免疫球蛋白及其免疫系统的研究奠定了基础。
- 李焕张武凤张小萍
- 关键词：尼罗罗非鱼IG蛋白表达嗜水气单胞菌
- 尼罗罗非鱼IgM重链基因的克隆及其抗血清的制备被引量：3
- 2015年
- 目的进一步认识尼罗罗非鱼免疫球蛋白的结构与功能。方法采用RACE-PCR技术克隆免疫球蛋白M重链c DNA全长,并将其CH2-4与PSUMO构建重组表达载体,诱导表达、纯化后,免疫小鼠获得抗血清,用ELISA及免疫印迹检测抗体的特性。结果经分析该序列含1919nt,编码514个氨基酸。纯化蛋白经SDS-PAGE电泳显示得到了相对分子质量为36 200的目的蛋白。ELISA及免疫印迹检测表明抗血清能特异识别尼罗罗非鱼血清中IgM。结论成功获得的尼罗罗非鱼IgM cDNA序列及其抗体制备,为其免疫系统的研究及相关免疫检测奠定了基础。
- 张武凤张小萍王亚凤魏静
- 关键词：尼罗罗非鱼IGM抗血清
- 胭脂鱼IgM重链基因克隆与表达分析被引量：1
- 2016年
- 目的认识胭脂鱼IgM的结构与功能,研究其免疫应答规律。方法通过同源克隆和RACE技术构建胭脂鱼IgMμcDNA全长,重组表达恒定区序列并制备抗血清,分别从mRNA水平和蛋白水平检测胭脂鱼IgM各组织及发育早期的表达情况;利用抗血清探究经灭活嗜水气单胞菌免疫后胭脂鱼IgM免疫应答规律。结果获得胭脂鱼IgμcDNA全序列,长2028 bp,编码580 aa,重组表达IgMμCH_(1-4)区,获得相对分子质量约45 000的重组蛋白,成功制备rIgM多抗,免疫印迹分析可见,anti-rIgM抗血清能够特异性识别rIgM和胭脂鱼血清IgM;各组织RT-PCR结果表明,被检测组织除肌肉、皮肤和心脏外均有IgM表达;发育各时期RT-PCR结果显示,胭脂鱼卵中含有IgM转录本,出膜第30天可明显检测到IgM表达。Western blot检测结果表明,免疫相关组织IgM含量均较高,心脏、皮肤未检测到IgM转录本,却含有大量的IgM蛋白,脑和肌肉始终未检测到IgM蛋白。灭活嗜水气单胞菌免疫实验表明,胭脂鱼在初次免疫第21天菌特异性IgM滴度有明显变化,加强免疫后迅速升高,并在最高滴度维持2个月后缓慢降低。结论成功获得濒危物种胭脂鱼IgMμcDNA全序列及anti-IgM多克隆抗体,为胭脂鱼免疫球蛋白结构分析、免疫监测及抗原诊断提供有力工具。
- 王亚凤张小萍李焕王志坚
- 关键词：胭脂鱼IGM抗血清嗜水气单胞菌
- 尼罗罗非鱼血清免疫球蛋白单克隆抗体制备及鉴定被引量：9
- 2013年
- 目的制备抗尼罗罗非鱼血清免疫球蛋白的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定,运用它们监测嗜水气单胞菌免疫尼罗罗非鱼血清抗体水平。方法采用重组蛋白A亲和层析法纯化尼罗罗非鱼血清免疫球蛋白,纯化蛋白经SDS-PAGE检测后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合;用ELISA法对杂交瘤进行筛选以及测定单抗的特性和效价,Western blot和叠加ELISA分析单抗的抗原结合表位;灭活嗜水气单胞菌免疫尼罗罗非鱼,用单抗建立ELISA检测体系监测血清特异性抗体水平。结果 SDS-PAGE电泳条件下血清免疫球蛋白重链和轻链的相对分子质量分别约为77 000和27 000;共获得4株抗罗非鱼血清Ig的单抗,分别命名为3D9、9D4、8G3和7B7,它们的细胞上清ELISA效价为1∶3 200～1∶6 400,抗体Ig亚类均为IgG1;4株单抗都能特异识别罗非鱼免疫球蛋白,而与鲫、草鱼、南方鲇、斑点叉尾鮰、鲈鱼血清无任何交叉反应。3D9识别变性条件下的尼罗罗非鱼Ig重链,9D4、8G3和7B7为轻链特异性。初次免疫后1～15 d尼罗罗非鱼血清中嗜水气单胞菌特异性抗体水平显著上升,第3次免疫后3周抗体水平达到峰值。结论成功制备抗尼罗罗非鱼血清免疫球蛋白单克隆抗体,为尼罗罗非鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等研究提供有力工具。
- 张小萍梁筱燕张庆璜张武凤魏静
- 关键词：尼罗罗非鱼免疫球蛋白单克隆抗体
