国家高技术研究发展计划(2001AA215431)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：姜小丹李卓娅尹丙姣王晶冯玮更多>>
- 相关机构：华中科技大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TNFR1BP/IgGFc融合蛋白载体的构建、表达及其生物学活性研究
- 2008年
- 目的构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)封闭肽与IgGFc融合蛋白的真核表达载体,检测其表达和生物学活性。方法将合成的TNFR1封闭肽(TNFR1BP)基因片段插入质粒pIG/3C,构建真核表达载体pIG/3C-TNFR1BP;脂质体法将重组载体转染COS-7细胞;ELISA和Western blot法检测转染细胞的培养上清中TNFR1BP/IgGFc融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验、细胞毒抑制实验检测融合蛋白对TNFR1的封闭作用。结果经PCR和核苷酸序列测定证实TNFR1BP基因正确插入质粒pIG/3C。ELISA检测证实,在转染细胞培养上清中有融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验和细胞毒抑制实验证实融合蛋白能结合L929细胞表面的TNFR1,并能抑制分泌型肿瘤坏死因子α(sTNF-α)介导的细胞毒作用。结论成功构建并实现TNFR1BP/IgGFc融合蛋白真核表达;体外实验证实此融合蛋白可通过与细胞表面TNFR1结合,从而拮抗sTNF-α介导的生物学效应。
- 黄丽霞尹丙姣王晶梁慧芳曾庆岭姜小丹李卓娅
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α真核表达
- TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白和TNFR Ⅰ封闭肽对TNF-α介导的生物学效应的封闭作用被引量：3
- 2008年
- 目的:研究比较TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白(TNFR1BP/hIgGFc)和TNFR Ⅰ封闭肽(TNFR1BP)生物学特性及功能,为开发治疗TNF-α相关疾病的肽类药物奠定基础。方法:通过流式细胞术和细胞毒抑制实验检测TNFR1BP/hIgGFc和人工合成TNFR1BP对TNFRⅠ的封闭作用;通过RT-PCR、激光共聚焦显微镜技术检测融合蛋白和封闭肽对TNF-α介导的生物学效应的封闭作用。结果:流式细胞术证实TNFR Ⅰ封闭肽-hIgGFc融合蛋白和人工合成TNFR Ⅰ封闭肽二者均能抑制TNF-α与细胞膜表面TNFR1的结合;RT-PCR结果显示二者均可明显抑制TNF-α诱导的IL-1β及IL-8等促炎细胞因子的mRNA表达;激光共聚焦显微镜显示二者均可明显拮抗TNF-α诱导的人单核细胞NF-κB核转位的发生。结论:TNFR1BP/hIgGFc和TNFR1BP均可与细胞表面TNFR Ⅰ结合,拮抗TNF-α介导的生物学效应。
- 黄丽霞尹丙姣王晶梁慧芳曾庆岭姜小丹李卓娅
- 关键词：TNFRTNFRTNF-Α
- 氨基酸置换增强肿瘤坏死因子受体封闭肽的生物学效应
- 2005年
- 目的增强肿瘤坏死因子受体(TNFR)封闭肽的生物学效应。方法通过计算机模建,模拟并推测提高TNFR封闭肽生物学效应需置换的位点和氨基酸;合成原封闭肽和突变肽;受体竞争抑制结合实验比较原肽与突变肽对绿色荧光蛋白-肿瘤坏死因子融合蛋白(GFP-TNF)结合TNFR的竞争抑制效应;细胞毒作用抑制实验比较原肽与突变肽对TNFR的封闭效应。结果受体竞争抑制结合实验结果显示:两种肽均可与GFP-TNF竞争结合U937细胞表面的TNFR。原肽的半数抑制浓度(IC50)为140μg/ml,而突变肽为100μg/ml,提示突变肽的竞争抑制效应高于原肽;细胞毒抑制实验显示:突变肽对于TNF-α杀伤U937细胞的细胞毒作用的抑制率为57%,高于原肽的40%(P<0.01)。结论突变肽的生物学效应强于原肽。
- 张磊冯健男王晶熊霞辉姜小丹冯玮李卓娅
- TNF受体封闭肽对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响被引量：7
- 2003年
- 目的 :观察TNF受体封闭肽在体外对大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法 :用NBT的方法检测呼吸爆发 ;用RT PCR检测大鼠腹腔巨噬细胞IL 1βmRNA和TNF αmRNA水平 ;用Westernblot检测大鼠腹腔巨噬细胞NF κBp6 5核转位。 结果 :TNF受体封闭肽可完全拮抗TNF α诱导大鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发 ,明显抑制TNF α诱导的IL 1βmRNA和TNF αmRNA的转录 ,使腹腔巨噬细胞TNF α诱导的NF κBp6 5核转位明显减少。结论 :TNF受体封闭肽在体外能有效抑制TNF α诱导的大鼠腹腔巨噬细胞功能。
- 何亚萍尹丙姣李卓娅徐勇姜小丹冯玮熊平
