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共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究被引量：3: 2014年; 构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3同源重组。重组腺病毒质粒转染HEK-293A细胞,得到重组腺病毒rAd5VP1-2A-Po IL-2。MTT法检测重组IL-2的生物活性。用rAd5VP1-2A-poIL-2免疫接种小鼠,同时设免疫单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1和空腺病毒的对照组。通过检测淋巴细胞增殖功能,特异性抗体分泌,IL-4和IFN-γ的表达水平衡量rAd5VP1-2A-poIL-2对小鼠特异性免疫应答的影响。结果显示,成功获得了rAd5VP1-2A-poIL-2,MTT法检测重组IL-2具有生物学活性。小鼠免疫试验结果显示,与rAd5VP1免疫组相比,rAd5VP1-2ApoIL-2免疫既能增强重组病毒诱导小鼠淋巴细胞增殖的能力,又能提高重组病毒诱导小鼠特异性抗体的水平。细胞因子检测结果显示,串联IL-2能促进重组病毒诱导Th1和Th2的分化。研究结果说明,rAd5VP1-2A-poIL-2可望成为口蹄疫的候选疫苗。; 苏春霞段相国郑洁林源郭琳陈溥言; 关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒白细胞介素2

重组干扰素-α增强口蹄疫重组疫苗诱导滤泡辅助性T细胞的研究被引量：1: 2014年; 目的通过观察重组干扰素-α(IFN-α)佐剂在口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)重组疫苗免疫应答中对滤泡辅助性T细胞(follicular T helper cells,Tfh细胞)的免疫调节作用,为IFN-α佐剂免疫调节的新机制提供实验依据。方法 6周龄雌性Balb/c小鼠分为3组,实验组联合免疫表达猪IFN-α的重组腺病毒(r Ad5po IFN-α)和表达FMDV VP1的重组腺病毒(r Ad5VP1),另设2对照组,分别注射r Ad5VP1和空载体腺病毒(Advirus)。免疫后7 d,应用流式细胞术检测脾脏淋巴细胞中Tfh细胞(CD4+CXCR5+PD-1+)和生发中心(germinal center,GC)B细胞(B220+GL-7+)的增殖分化;real-time PCR技术检测Tfh细胞转录因子Bcl-6m RNA的表达水平;ELISA方法检测血清中细胞因子IL-21蛋白的表达水平。结果与单独免疫r Ad5VP1组相比,联合免疫r Ad5po IFN-α和r Ad5VP1能明显促进FMD重组腺病毒疫苗诱导小鼠Tfh细胞和GC B细胞的增殖分化;重组IFN-α能明显促进FMD重组腺病毒疫苗诱导小鼠Bcl-6 m RNA的表达,提高小鼠血清中IL-21蛋白的分泌水平。结论重组IFN-α能有效增强FMD疫苗诱导小鼠Tfh细胞免疫,为IFN-α佐剂免疫调节作用的新机制提供了理论依据。; 苏春霞段相国徐广贤郑洁; 关键词：滤泡辅助性T细胞干扰素-Α 口蹄疫疫苗重组腺病毒

重组猪IL-2对口蹄疫重组腺病毒免疫增强效果的研究被引量：3: 2014年; 目的构建表达猪白细胞介素-2(poIL-2)的重组腺病毒,研究其作为佐剂对口蹄疫重组腺病毒免疫效果的影响。方法将poIL-2基因克隆到腺病毒的穿梭载体中,与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态细胞,获得的重组病毒质粒通过脂质体转染HEK-293A细胞,获得表达poIL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)。以rAd5poIL-2作为佐剂与表达PMDV VP基因的重组腺病毒(rAd5VP1)联合免疫小鼠,以单独免疫rAd5VP1的小鼠作为对照。通过测定淋巴细胞增殖指数、特异性抗体、IL-4和IFN-γ的水平来衡量rAd5poIL-2对rAd5VP1的免疫增强效果。结果经PCR鉴定,成功构建了rAd5poIL-2。MTT与抗体检测结果显示,rAd5poIL-2既能增强rAd5VP1诱导小鼠淋巴细胞增殖,又能促进rAd5VP1诱导小鼠特异性抗体的产生,细胞因子检测结果显示,rAd5poIL-2能促进rAd5VP1诱导Th1和Th2的分化。结论 rAd5poIL-2可望成为口蹄疫疫苗的候选佐剂。; 苏春霞段相国曹瑞兵郑洁黄菱郭琳陈溥言; 关键词：猪白细胞介素2 重组腺病毒口蹄疫

串联表达FMDV多表位基因重组腺病毒免疫小鼠的效应研究被引量：3: 2012年; 目的检测口蹄疫重组腺病毒多表位疫苗(rAd5EGS)对小鼠特异性免疫的影响。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为三组,每组15只;rAd5EGS和rAd5VP1以腹膜内接种的方式免疫小鼠,对照组小鼠注射PBS。通过MTT法检测小鼠T淋巴细胞增殖功能、ELISA法检测小鼠血清中IgG水平及IgG亚型(IgG1和IgG2a),定量ELISA法检测小鼠血清中IL-4和IFN-γ的表达水平。结果 rAd5EGS既能诱导小鼠T淋巴细胞增殖又能诱导小鼠特异性抗体的产生,其诱导小鼠淋巴细胞增殖能力明显高于rAd5VP1免疫组(P<0.05);IgG亚型和细胞因子检测结果显示,rAd5EGS免疫组小鼠血清中IgG2a的分泌水平高于rAd5VP1免疫组(P<0.05),rAd5EGS免疫组小鼠血清中IFN-γ的表达水平高于rAd5VP1免疫组(P<0.05)。结论rAd5EGS具有良好的免疫原性,且诱导Th1分化的能力高于rAd5VP1,为口蹄疫表位疫苗的研究奠定基础。; 王锋段相国赵瑞郑洁梁丽俊苏春霞; 关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒表位疫苗

活体荧光成像监测HCV NS3/4A蛋白在小鼠体内的瞬时表达被引量：1: 2013年; 目的建立HCV NS3/4A蛋白酶在小鼠体内可视化表达模型。方法利用水动力转染技术将融合基因NS3/4A-Fluc转染至小鼠肝脏,建立目的基因的瞬时表达模型,通过RT-PCR方法检测目的基因Fluc及NS3/4A的RNA表达水平,以及通过Western blot方法检测目的基因NS3/4A-Fluc的蛋白表达水平。结果建立了通过报告基因Fluc反映HCV NS3/4A蛋白酶的瞬时表达可视化小鼠模型。结论成功建立了可用于评价NS3/4A蛋白酶的可视化小鼠模型。; 段相国付秋霞苏春霞阎少多詹林盛丁剑冰; 关键词：丙型肝炎病毒 NS3 小鼠模型

表达口蹄疫病毒VP1的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响被引量：4: 2010年; 目的检测表达FMDV VP1基因的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只,将重组腺病毒rAd5VP1以腹膜内接种的方式免疫小鼠,对照组小鼠分别腹膜内接种等量的PBS和口蹄疫病毒灭活疫苗。通过测定IgGI、gG1I、gG2a、淋巴细胞增殖功能I、L-4和IFN-γ的水平来衡量重组病毒的免疫效果。结果重组腺病毒免疫小鼠既能刺激小鼠淋巴细胞增殖又能诱导小鼠特异性抗体的产生,证明重组病毒具有良好的免疫原性。免疫原性略低于灭活疫苗免疫组,但明显高于PBS组。结论重组病毒刺激小鼠淋巴细胞增殖和抗体分泌的能力略低于灭活疫苗,但重组病毒诱导Th1分化的能力强于灭活疫苗。; 苏春霞段相国黄菱陈溥言; 关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒 VP1基因

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国家自然科学基金(31001064)