国家重点基础研究发展计划(2006cb500706)
- 作品数：15 被引量：91H指数：6
- 相关作者：陈生弟杨红旗丁健青王刚陆国强更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院上海交通大学健康科学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 阿尔茨海默病早期诊断的血液生物标记物研究进展被引量：4
- 2012年
- 目前研究发现:①在认知功能损害前10年,阿尔茨海默病(AD)的病理生理进程已经开始,该部分人群称之为临床前AD;②在轻度认知功能障碍(MCI)患者随访中发现,部分患者可进展为AD,对这些人群进行早期诊断和干预,可能有效遏制或延缓其进展为AD。目前,AD早期诊断的研究主要聚焦在颅脑影像学及体液生物标记两方面,其中血液生物标记因标本获取简便,与AD病理过程联系较紧密,诊断敏感度及特异度较高而倍受关注,本文就早期诊断AD潜能的血液生物标记物研究进展进行综述。
- 徐旭华汤荟冬陈生弟
- 关键词：阿尔茨海默病生物学标记血液
- 内向整流钾通道6.2亚基对鱼藤酮诱导PC12细胞毒性的调节作用及其相关信号通路的实验研究
- 2012年
- 目的:探讨ATP敏感性钾离子通道亚基内向整流钾通道(Kir)6.2过表达对鱼藤酮诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞毒性作用的调节作用及其相关信号通路。方法:转染Kir6.2质粒于PC12细胞48 h后,分别采用细胞免疫荧光和Western blot方法观察Kir6.2的表达,然后用水溶性四氮唑盐(WST-1)法检测3组细胞(正常对照组、转染组、空载体组)在500 nmol/L鱼藤酮处理24 h后的细胞活力;Western blot检测胞内蛋白激酶C(PKC)及磷酸化PKC(p-PKC)的变化。结果:细胞免疫荧光及Western blot结果显示转染组Kir6.2在细胞中表达较正常组和空载体组明显增高,WST-1检测发现转染组细胞活力较其他2组增高(P<0.05);Western blot结果显示鱼藤酮处理后p-PKC较处理前表达量增加,且转染组p-PKC表达量较其他2组均增高(P<0.05)。在Kir6.2过表达的PC12细胞中,p-PKC的活性上调,且不被PKC抑制剂所抑制。结论:Kir6.2过表达可拮抗鱼藤酮诱导的PC12细胞毒性,且这一神经保护作用与PKC信号通路相关,尤其是p-PKC。
- 刘小坤王刚田立鹏张煜盛呈雨陈生弟
- 关键词：ATP敏感钾通道鱼藤酮
- 氯化锂抑制β-淀粉样蛋白诱导细胞Tau蛋白磷酸化被引量：5
- 2008年
- 目的探讨GSK-3β抑制剂氯化锂(LiCl)在β-淀粉样蛋白25～35片断(Aβ25-35)诱导的细胞Tau蛋白磷酸化中的作用及机制。方法MTT法观察不同浓度的LiCl(1、5、10、20mmol.L-1)单独作用24h,对SH-SY5Y细胞存活率的影响;20μmol.L-1的凝聚态Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞不同时间点,蛋白免疫印迹法研究Tau蛋白磷酸化位点(Ser199、Ser396及Tau1)水平的变化;LiCl(20mmol.L-1)预处理细胞1h后,观察Aβ的作用有无变化及可能的作用机制。结果不同浓度的LiCl作用24h后,MTT法示细胞存活率无明显变化(P>0.05);20μmol.L-1Aβ25-35作用不同时间点后,Tau蛋白在Ser396、Ser199位点的磷酸化水平在3h逐渐增加,6h达到最高峰,12h后又逐渐下降,在这3个时间点的增加量均具有统计学意义(P<0.05),而对非磷酸化Tau1没有影响(P>0.05);LiCl预处理可抑制Aβ25-35的作用(P<0.05),并可诱导失活形式的GSK-3β在Ser9位点的磷酸化(p-GSK-3βSer9)表达增高。结论GSK-3β参与了Aβ25-35诱导细胞Tau蛋白磷酸化的作用,LiCl可通过诱导失活形式的p-GSK-3βSer9表达增高而抑制GSK-3β的活性,进而抑制Aβ诱导的细胞Tau蛋白磷酸化。该实验为研究AD的发病机制及探索有效治疗药物提供了重要的理论基础。
- 孙治坤杨红旗陆国强丁健青陈生弟
- 关键词：Β-淀粉样蛋白氯化锂阿尔采末病GSK-3Β
- 尼古丁对Aβ25-35诱导学习记忆障碍小鼠的治疗作用被引量：5
- 2009年
- 目的探讨nAChR激动剂尼古丁对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的学习记忆障碍小鼠模型的治疗作用以及可能的作用机制。方法小鼠侧脑室注入凝聚态Aβ25-354.5μl。次日,用药组给予尼古丁0.2和2 mg.kg-1(ip,bid×7d),对照组及模型组ip生理盐水。给药结束4 d后(造模成功后11 d),进行各组行为学及皮层、海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)活性指标的检测。结果定位航行实验发现,训练d 4,模型组小鼠的上台潜伏期和游泳距离明显高于对照组和0.2、2 mg.kg-1尼古丁治疗组(P<0.01);空间搜索实验发现,实验d 5撤除平台,模型组在平台所在象限(第Ⅱ象限)中游泳的时间百分比明显低于对照组(P<0.01)和0.2及2 mg.kg-1尼古丁治疗组(P<0.05);模型组在平台所在象限(第Ⅱ象限)中游泳的距离百分比明显低于对照组(P<0.01),但与0.2及2 mg.kg-1尼古丁治疗组无差别(P>0.05)。酶活性检测发现尼古丁治疗组的AChE及ChAT的活性较对照组明显升高(P<0.01);尼古丁治疗组(2 mg.kg-1)MDA的活性较模型组明显降低(P<0.01),尼古丁治疗组(0.2 mg.kg-1)的活性较模型组无改变(P>0.05);尼古丁治疗组的GSH活性较模型组明显升高(P<0.01)。结论尼古丁能够改善Aβ25-35诱导痴呆小鼠的学习记忆功能障碍,该作用与其增强ChAT的活性以及抗氧化应激有关。
- 任汝静王刚潘静朱亮张施孙小康陈红专陈生弟
- 关键词：尼古丁学习记忆
- 姜黄素对帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用被引量：13
- 2007年
- 目的研究姜黄素对由MPTP诱发的帕金森病小鼠模型的脑保护作用及其可能机制。方法应用免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法(Western blotting)分别观察姜黄素干预前后帕金森病小鼠中脑黑质-纹状体系统中酪氨酸羟化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性神经元数目的变化,以及酪氨酸羟化酶、诱导型一氧化氮合酶和胶质纤维酸性蛋白表达水平的变化。结果MPTP组小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性神经元数目明显减少,与正常对照组及治疗组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。经不同剂量(5mg/kg、50mg/kg和150mg/kg)的姜黄素干预治疗后,小鼠中脑纹状体中的酪氨酸羟化酶蛋白表达水平(相对灰度值)明显升高,而黑质中诱导型一氧化氮合酶和胶质纤维酸性蛋白表达水平明显降低,与MPTP组比较差异均有统计学意义(P<0.05);MPTP组与溶剂对照组(MPTP+DMSO)之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素可以有效地拮抗MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元的丢失,其机制可能与姜黄素降低黑质多巴胺能神经元活性氧含量以及抑制炎症反应等作用有关。
- 潘静丁健青陈生弟
- 关键词：姜黄素帕金森病酪氨酸单氧化酶神经胶质原纤维酸性蛋白质
- 垂体腺苷酸环化酶激活肽27治疗帕金森病小鼠的实验研究
- 2007年
- 目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽27(PACAP27)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠是否具有治疗作用。方法静脉给予神经肽 PACAF27对 MPTP诱导的 PD 小鼠模型进行治疗,采用免疫组织化学及蛋白印迹分析方法对 PD 标志物酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运体(DAT)、囊泡单胺转运体2(VMAT2)进行检测,并用高效液相色谱(HPLC)检测纹状体单胺类递质。结果神经肽 PACAP 可明显减少黑质 TH 阳性细胞的损失,以 PACAP(0.02μg/d)治疗组最为明显(93.33±4.87,F=85.58,P<0.01)。生理盐水(NS)治疗组较正常对照组纹状体 TH、DAT、VMAT 的表达明显降低,而 PACAP 治疗组较 NS 治疗组 TH 表达明显增多,以PACAP 治疗组(0.02μg/d)增高最为明显(136.34±8.45,F=113.88,P<0.01);而 DAT 和 VMAT2在 PACAP 治疗组中则呈现了多种变化趋势。HPLC 检测发现 PACAP 治疗组(0.02μg/d)多巴胺(DA)代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)含量较 NS 治疗组明显升高(1590.7±473.3,F=375.71,P<0.01),与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论静脉注射 PACAP27可对 MPTP 诱导的PD 小鼠模型产生明显的治疗作用,而这种治疗作用可能与单胺类递质转运体 DAT、VMAT2的表达高低无明显直接关系。
- 王刚谭玉燕孙小康任汝静周海燕陈生弟
- 关键词：帕金森病垂体腺苷酸环化酶激活肽6-四氢吡啶
- 二氮嗪抑制Aβ_(1～42)对U251细胞存活率、线粒体膜电位和细胞内活性氧水平的影响被引量：3
- 2006年
- 目的探讨线粒体膜上ATP敏感的钾离子通道开放药物二氮嗪防治Aβ1～42细胞毒性作用及其分子学机制。方法采用不同浓度Aβ1～42和二氮嗪同时处理神经胶质细胞瘤U251细胞24h,以四唑盐比色法测定细胞存活率;四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)检测线粒体膜电位;2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧水平;膜联蛋白荧光素荧光染色检测U251细胞凋亡。结果(1)二氮嗪组神经胶质细胞瘤U251细胞在不同浓度Aβ1～42作用下,细胞存活率明显高于单纯Aβ1～42组(P<0.05)。(2)半定量分析显示,单纯Aβ1～42组(5μmol/L)U251细胞线粒体膜红/绿荧光强度比值(590/527nm)明显低于正常对照组(P<0.01);而二氮嗪组U251细胞红/绿荧光强度比值(590/527nm)明显高于单纯Aβ1～42组(P<0.01)。(3)流式细胞术检测显示,单纯Aβ1～42组(5μmol/L)U251细胞内的活性氧水平明显增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);经二氮嗪(1mmol/L)预处理后U251细胞内的活性氧水平下降,与单纯Aβ1～42组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(4)流式细胞荧光强度分析显示,无论Aβ1～42或Aβ42～1均不能引起U251细胞发生早期或晚期凋亡或坏死。结论Aβ1～42的细胞毒性作用明显早于其致细胞凋亡作用。提示尽早应用二氮嗪保护细胞线粒体功能状态,可预防长时间暴露于Aβ1～42导致细胞凋亡所引起的神经细胞数量的减少。
- 马国诏陈生弟杜芸兰王刚任汝静杨红旗周海燕仇海燕陆国强
- 关键词：二氮嗪线粒体膜电位
- 聚集素蛋白在聚集体形成中的参与机制
- 2007年
- 目的探讨聚集素蛋白在聚集体形成中的参与机制。方法本实验分为处理组、对照组和未处理组,处理组用100nmol/L鱼藤酮,对照组用0.01%的二甲基亚砜处理多巴胺能SK-N-SH细胞。然后用Trypan Blue法检测细胞存活率,Western blot检测细胞内聚集素蛋白表达的变化。在处理组和对照组中,用HE法检测聚集体的形成,免疫荧光双标检测聚集素蛋白与细胞内聚集体的关系,免疫共沉淀检测α-突触核蛋白与聚集素蛋白的相互作用情况。结果鱼藤酮损伤多巴胺能SK-N-SH细胞,并形成类似Lewy体的聚集体结构,其中聚集素蛋白和α-突触核蛋白、波形蛋白和泛素共存在聚集体中。100nmol/L鱼藤酮在6h后,引起聚集素蛋白的表达升高,与α-突触核蛋白的相互作用无变化;24h时,聚集素蛋白的表达降低,与α-突触核蛋白的相互作用也减弱。结论聚集素蛋白确实存在于聚集体中,可能是通过与α-突触核蛋白蛋白相互作用而沉积于聚集体中。
- 马建芳陈生弟
- 关键词：聚集体Α-突触核蛋白鱼藤酮多巴胺
- 红景天甙促进帕金森病模型小鼠表达内源性胶质细胞源性神经营养因子蛋白保护多巴胺能神经元被引量：22
- 2006年
- 目的研究中药单体成分红景天甙(salidroside)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发的帕金森病(Parkinson disease,PD)小鼠模型的脑保护作用及其可能机制。方法80只C57BL雄性小鼠,分为正常对照组、MPTP模型组、MPTP+红景天甙组(即干预组,分别用3 mg/kg、50 mg／kg和150 mg／kg)及红景天甙对照组(分别用3 mg／kg、50 mg/kg和150 mg／kg),每组10只。应用免疫组化法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目变化,蛋白印迹法(Western blot)检测TH、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在纹状体中表达水平的变化。结果在小鼠黑质部位,MPTP组TH阳性神经元数目明显少于正常对照组及干预组(P<0．05)。Western blot结果显示,不同剂量干预组小鼠纹状体中的TH蛋白表达(相对灰度值)(0．8326±0．0930．0．9007±0．0104和1．1114±0．2013)较MPTP组的TH蛋白表达(0．5738±0．01真4)明显增加(P< 0．05);干预组的GDNF蛋白表达(1．3503±0．0573)较MPFP组的蛋白表达(0．1485±0．0118)显著增加(P<0．05);干预组的GFAP蛋白表达(2．4788±0．2093)与MPTP组(1．8431±0．1559)之间差异无统计学意义(P>0．05),但是干预组较正常对照组(1．3695±0.1174)明显增加(P<0．05)。结论红景天甙可以拮抗MPTP诱导的PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的丢失,其神经保护作用可能与促进内源性GDNF分泌增加有关。
- 张宇红陈生弟李江林杨红旗郑汭周海燕王刚陆国强
- 关键词：红景天帕金森病酪氨酸单氧化酶神经生长因子类
- β淀粉样前体蛋白羧基端肽对小鼠神经母细胞瘤细胞的毒性作用被引量：2
- 2010年
- 目的体外探讨B淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein，APP）羧基端肽（APPC31）对小鼠神经母细胞瘤（Neuro2a）细胞的毒性作用及在Aβ42致毒性中的作用。方法分别将空载体质粒和过表达APPC31质粒通过脂质体转染法瞬时转染Neuro2a细胞，48h后四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞活力，同时利用4’，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）核染色观察细胞形态，与空载体转染细胞组对照，观察APPC31对细胞有无毒性作用；然后通过相同方法，在Neur02a细胞中，分别将过表达的空载体质粒、野生型APP695质粒、APP（D664A）质粒、APP氨基端长肽（APPAC31）质粒和APPC31质粒瞬时转染Neuro2a细胞，24h后加Aβ42（10μmol／L）共孵育24h，MTT法检测细胞活力及DAPI核染色观察细胞形态，与空载体转染细胞组对照，观察Aβ42处理条件下APPC31的毒性作用；质粒转染细胞后通过免疫荧光检测目的基因表达情况。结果在无Aβ42共孵育时，空载体质粒转染组和APPC31质粒转染组细胞活力分别为：0．81±0．10、0．88±0．12，两组之间比较差异无统计学意义（t=-0．78，P=0．48），细胞核形态亦无明显凋亡或死亡改变；Aβ42（10μmol／L）共孵育条件下，无转染组、空载体质粒组、野生型APP695质粒组、APP（D664A）质粒组和APPC31质粒组细胞活力分别为：0．82±0．01、0．78±0．03、0．55±0．04、0．81±0．04、0．78±0．02、0．54±0．02，且与空载体质粒组相比，野生型APP695质粒组及APPC31质粒组细胞活力明显下降（F=47．53，P〈0．05），细胞核呈明显浓缩、染色加深改变。结论体外Neuro2a细胞单独过表达一定水平的APPC31并不能致细胞死亡；但此短肽可增强Aβ42的细胞毒性作用，为进一步明确阿尔茨海默病发病机制提供了一定的实验依据。
- 樊彩妮丁健青陈生弟汤荟冬
- 关键词：淀粉样Β蛋白前体毒理学细胞系
