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国家自然科学基金(31230070): 作品数：16 被引量：77H指数：5; 相关作者：焦新安潘志明焦红梅陶静蔡银强更多>>; 相关机构：扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

鸡白痢沙门菌研究进展被引量：17: 2014年; 本文就鸡白痢沙门菌的基因组学、与鸡伤寒沙门菌的鉴别方法、感染与致病机制、防治措施等方面的研究进展进行总结,以期为相关研究提供参考。; 耿士忠郭荣显焦新安潘志明; 关键词：鸡白痢沙门菌基因组学致病机制

利用SCOTS技术筛选鸡白痢沙门菌感染巨噬细胞的转录序列被引量：1: 2014年; 沙门菌在巨噬细胞内的存活是其在宿主内长期定植的主要因素之一,研究利用选择性捕获转录技术(SCOTS)筛选鸡白痢沙门菌S06004株在感染鸡巨噬细胞系HD-11过程中细菌表达的基因。结果显示:鸡白痢沙门菌以MOI值为100∶1感染HD-11细胞1 h后,感染率达11.75%;选取感染1 h时间点作为研究对象,利用SCOTS技术获得了12个鸡白痢沙门菌的转录序列,包括与沙门菌感染相关的毒力基因调控因子inv F;构建了inv F、teh B和tol C基因插入突变株。突变株侵入HD-11的能力明显低于野生株,反映了SCOTS筛选获得的基因在鸡白痢沙门菌感染巨噬细胞时发挥重要的作用,为深入揭示鸡白痢沙门菌的感染机制提供了基础。; 李求春方丽君陈静谢晓蕾陶明新王晓春吴颖斐焦新安; 关键词：鸡白痢沙门菌巨噬细胞

鸡白痢沙门菌S06004株致病岛-2缺失株的构建及其生物学特性被引量：4: 2015年; 【目的】了解致病岛-2(Salmonella Pathogenicity Island 2,SPI-2)对鸡白痢沙门菌致病性的影响,初步探讨研制安全有效的鸡白痢沙门菌减毒株的可行性。【方法】采用λ-red同源重组系统构建鸡白痢沙门菌S06004株的SPI-2(约40 kb)缺失株S06004ΔSPI2。并与野生型相比较,对该缺失株的生长特性、生化特性、遗传稳定性和致病性等基本生物学特性进行鉴定。【结果】成功构建SPI-2缺失株S06004ΔSPI2,SPI-2的缺失不影响鸡白痢沙门菌的生长特性和生化特性,且该缺失株具有良好的遗传稳定性,其对2日龄雏鸡的LD50是野生株的252倍。【结论】SPI-2的缺失引起鸡白痢沙门菌毒力的明显下降,这为进一步研究鸡白痢沙门菌SPI-2的功能及制备减毒疫苗奠定了基础。; 殷俊磊吴颖斐蔺志杰王晓春胡亚辰李求春耿士忠焦新安; 关键词：鸡白痢沙门菌生物学特性

鸡白痢沙门菌S06004ΔspiC突变株的构建与鉴定被引量：13: 2014年; 为了研究spiC基因对鸡白痢沙门菌致病性的影响,采用同源重组方法构建该基因缺失株。以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增spiC基因上、下游DNA片段作为等位基因;将上游片段、卡那霉素抗性基因(KmR)及下游片段依次连接并克隆到pGMB151自杀性质粒上,构建重组自杀质粒pGMB151-ΔspiC/KmR,通过大肠杆菌χ7213与鸡白痢沙门菌S06004固相杂交,将质粒转入S06004中,运用反向筛选法获得含KmR基因的spiC基因缺失株(ΔspiC/KmR);再使用编码FLP重组酶的温度敏感型质粒pCP20敲除KmR,获得无抗性ΔspiC。PCR鉴定和测序结果显示,spiC基因被成功缺失。血清型、生化特性、生长特性、耐药性等鉴定表明,S06004ΔspiC未发生理化特性改变。本研究成功构建了spiC基因缺失株S06004ΔspiC,为进一步研究鸡白痢沙门菌致病性变化及spiC基因的功能奠定了重要基础。; 耿士忠刘男男焦新安刘欢郭荣显钱珊珊李昱辰潘志明; 关键词：鸡白痢沙门菌基因敲除

鸡白痢沙门菌spiC基因克隆与生物信息学分析被引量：1: 2016年; 为了研究鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的功能,以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板PCR扩增spiC基因,进行克隆测序和生物信息学分析,并调查该基因在255株不同年代鸡白痢沙门菌分离株中的分布与进化情况。结果显示,鸡白痢沙门菌spiC基因全长384bp,编码127个氨基酸,在不同年代分离株中稳定存在。推导SpiC蛋白无跨膜区、信号肽和卷曲螺旋结构,有1处酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,2处N-豆蔻酰化位点,预测线性抗原表位主要分布在15-20、29-35、52-53、70-72、83-85、89-94aa。利用SWISS MODEL在线程序建模,得到SpiC三维结构模型。同源性及进化分析显示spiC基因仅存在于沙门菌中且比较保守,鸡白痢沙门菌SpiC蛋白与沙门菌肠道亚种亲缘关系最近。; 安树敏郭荣显薛颖潘志明耿士忠焦新安; 关键词：鸡白痢沙门菌生物信息学分析

沙门菌CRISPR的结构与功能研究进展被引量：5: 2015年; 近年发现沙门菌中恒定地存在两个CRISPR位点,沙门菌利用它们不仅能抵御外源质粒和噬菌体的入侵,还能介导自身短期的表型变化及长期亚类的进化。同时由于其结构的多样性,使之广泛应用于沙门菌分型和进化的研究。论文简要综述了沙门菌CRISPR系统的基本结构、作用机制和功能及其在沙门菌分型和进化应用方面的研究进展。; 蔡银强李求春陶静蒋道军潘志明焦新安; 关键词：沙门菌

鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用被引量：4: 2015年; 目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,纯化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品。结果通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-Spi C。重组蛋白GST-Spi C免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-Spi C,表明体外表达的重组蛋白His-Spi C有良好的免疫反应原性。所建立的以重组蛋白His-Spi C介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spi C基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染。结论重组蛋白His-Spi C呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-Spi C建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法。; 耿士忠刘欢焦新安潘志明钱珊珊郭荣显安树敏薛颖; 关键词：鸡白痢沙门菌来杭鸡原核表达

模式识别受体介导的病原免疫逃逸被引量：1: 2014年; 天然免疫通过细胞模式识别受体识别病原相关分子模式来清除感染。但是,在长期的进化过程中,许多病原体已经形成了自身的保护机制,从而逃逸天然免疫的杀伤。综述了模式识别受体介导的病原体的主要逃逸机制,以期为疾病的控制和预防提供新认识。; 胡茂志潘志明焦新安; 关键词：病原体模式识别受体免疫逃逸

雏沙门菌S06004株毒力岛1缺失株的构建及其基本生物学特性的测定被引量：1: 2015年; 为了解毒力岛1(SPI1)对雏沙门菌致病性的影响,初步探索研制安全有效的雏沙门菌减毒株,采用λ-red同源重组系统成功构建了雏沙门菌S06004株的SPI1(约40kb)缺失株S06004ΔSPI1。进一步的生物学特性研究显示,SPI1的缺失不影响雏沙门菌的生化特性和生长特性,且该缺失株具有良好的遗传稳定性,它对3日龄雏鸡的LD50是野生株的21倍。结果表明,SPI1的缺失则引起雏沙门菌毒力明显下降,这为进一步研究雏沙门菌SPI1的功能及制备减毒活疫苗奠定了一定的基础。; 殷俊磊程瞾夏静谢晓蕾陶明新李求春耿士忠焦新安; 关键词：生物学特性

聚乙烯亚胺作为核酸疫苗佐剂的研究进展被引量：2: 2019年; 疫苗是防控病原感染的最有效方式之一,通常需要添加佐剂才能确保其高效的免疫应答。聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)是一种被广泛研究的阳离子聚合物,其传统用途是作为核酸转染试剂或DNA疫苗运载工具。近年来越来越多的研究表明PEI也能作为一种佐剂。本文回顾了PEI的理化性质及其在不同领域的应用,阐述了PEI具有免疫活化功能的细胞和分子机制。另外,本文总结了PEI作为疫苗佐剂在体内和临床试验中的应用,并讨论了其在未来应用中的前景和挑战。; 宋丽熊丹焦新安潘志明; 关键词：聚乙烯亚胺疫苗佐剂细胞摄取抗原递呈免疫激活

国家自然科学基金(31230070)

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