国家自然科学基金(30672338)
- 作品数：12 被引量：24H指数：3
- 相关作者：孙宏晨刘金钟苗雷英苏涛柯小亮更多>>
- 相关机构：吉林大学口腔医院湖州师范学院美国国立卫生研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金吉林省科技厅国际合作项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠颌下腺细胞培养方法建立及生物学特性研究被引量：4
- 2009年
- 目的:建立大鼠颌下腺细胞体外培养的方法,为涎腺细胞的体外扩增及基因治疗涎腺疾病奠定基础。方法:无菌条件下取1日龄Wistar大鼠颌下腺,经LB3、胰酶联合消化后原代细胞接种于含2%胎牛血清、表皮生长因子、胰岛素等的DMEM/F12培养液,相差显微镜观察原代及传代细胞的形态特征,免疫组织化学染色鉴定细胞来源,PAS染色观察体外培养第2代细胞合成、分泌多糖功能。结果:体外培养的大鼠颌下腺原代细胞为圆形、三角形、多边形。细胞传至第2代生长良好,形态未发生改变。体外培养的第2代细胞角蛋白、E-钙联蛋白免疫组织化学染色、PAS染色均为阳性,表明细胞为上皮来源且具有合成、分泌多糖类物质的功能。结论:酶联合消化法成功地分离、体外培养了大鼠颌下腺细胞,第2代细胞仍可保持腺细胞的生物学特征。
- 刘超苗雷英孙宏晨乔春燕刘金钟柯小亮
- 关键词：颌下腺细胞培养细胞增殖
- BrdU和EGFP标记大鼠骨髓间充质干细胞的对比研究被引量：1
- 2009年
- 目的:研究5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-21-deoxyuridine,BrdU)和腺病毒介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的最佳标记时间与剂量,并进行比较。方法:密度梯度离心分离大鼠骨髓MSCs并体外扩增。AdCMV-EGFP分为100、200、400及800 particles/cell四组进行转染;BrdU以终浓度5、10、15μmol/L进行标记。分别于实验第1、3、5、7 d检测两种方法对MSCs的标记率。通过MTT检测两种标记方法对细胞增殖活性的影响。结果:AdCMV-EGFP以100 par-ticles/cell转染未引起MSCs凋亡,转染3d时效率最高(44.4±3.5%);BrdU以10μmol/L、标记3 d的标记率为(75.1±3.1)%。两种方法均不影响细胞增殖。结论:AdCMV-EGFP和BrdU均可高效标记MSCs,根据研究需要不同均可作为高效的MSCs标记方法。
- 刘超苗雷英孙新华孙宏晨乔春燕
- 关键词：骨髓间充质干细胞增强型绿色荧光蛋白5-溴脱氧尿嘧啶核苷
- 绿荧光蛋白基因质粒表达载体对SACC-83的转染效率及瞬时表达特点被引量：1
- 2007年
- 目的:检测绿荧光蛋白基因(EGFP)质粒表达载体pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP对SACC-83的转染效率及瞬时表达,为应用这两种启动子诱导促凋亡基因转染SACC-83以发挥治疗作用提供依据。方法:实验于2004-07/2005-05在吉林大学口腔医学院口腔生物实验室完成。①在体外扩增并酶切鉴定pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP质粒。②以脂质体介导法转染pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP进入SACC-83细胞,根据质粒和脂质体比例不同分别转染6组,1组:1g/4L;2组:1g/8L;3组:1g/12L;4组:2g/4L;5组:2g/8L;6组:2g/12L。③应用荧光显微镜观察各组转染效率及瞬时表达情况,并进行统计学分析。结果:①质粒的检测及鉴定:质粒pACTERT-EGFP和pACCMV-EGFP经转化、酶切电泳证实,均出现约800bp的片段,与原作者提供的数据一致。②荧光显微镜观察:绿荧光蛋白在基因转染24h后开始表达,48～72h最高,1周后表达逐渐减弱。③荧光细胞数的统计学分析:对不同浓度质粒与脂质体转染72h的荧光细胞数进行方差分析,质粒与脂质体比例为1g/8L和2g/8L组荧光细胞数显著高于其余各组,其差异具有统计学意义,说明转染效率与脂质体和质粒的比例有关。结论:按照合适的质粒和脂质体比例,pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP转染SACC-83的效率可以达到30%,是转染SACC-83较为理想的瞬时表达载体。
- 苏涛
- 关键词：绿色荧光蛋白质类转染
- AdTERT-TRAIL对腺样囊性癌细胞株SACC-83靶向转基因作用的研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控TRAIL基因在端粒酶阳性的涎腺肿瘤细胞SACC-83中靶向表达的作用。方法通过同源重组构建腺病毒载体AdTERT-TRAIL,并转染SACC-83细胞和端粒酶阴性的HEL细胞,通过RT-PCR检测TRAIL基因表达,MTT法检测TRAIL基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果转染AdTERT-TRAIL后,TRAIL基因在SACC-83细胞中明显表达,对该肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,而且诱导细胞凋亡比率增加;而在HEL细胞中未能诱导TRAIL基因表达,对该细胞的增殖没有影响,也没有诱导明显的细胞凋亡。结论成功构建腺病毒载体AdTERT-TRAIL,对涎腺肿瘤细胞具有靶向转基因作用。
- 苏涛孙宏晨郑长玉张红卢东民
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子腺病毒涎腺肿瘤
- 血管内皮祖细胞在骨组织工程中的应用
- 2008年
- 在组织损伤、缺血或生长因子、药物刺激等因素作用下,骨髓中的血管内皮祖细胞(EPCs)会动员进入外周血,并趋化、分化,参与机体血管形成。由于骨组织形成(或改建)是一个以血管形成为基础,多种细胞、生长因子、细胞外基质参与的复杂过程,因此EPCs在骨形成中的作用近年来受到广大学者的关注。利用EPCs在新血管形成中的重要作用,将其作为骨组织工程的种子细胞,为利用血管化人工骨修复骨组织缺损提供广阔的应用前景。
- 刘超苗雷英孙宏晨孙新华
- 关键词：内皮血管干细胞血管形成
- 腺病毒介导的TRAIL基因诱导腺样囊性癌细胞凋亡研究被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨以凋亡基因TRAIL为靶基因,腺病毒(Ad)为载体的重组基因治疗载体AdCMV-TRAIL诱导腺样囊性癌细胞系ACC-2凋亡的功能。方法:用携带绿色荧光蛋白基因EGFP的AdCMV-EGFP检测腺病毒载体对ACC-2的转染效率;将携带TRAIL基因的AdCMV-TRAIL转染ACC-2;应用RT-PCR方法检测转染后TRAIL基因表达;应用倒置显微镜和荧光倒置显微镜观察细胞形态,MTT方法检测细胞存活率,应用流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡率。结果:AdCMV-EGFP在1000p/cell时转染效率为100%;RT-PCR在实验组检测到594bp的TRAIL基因;AdCMV-TRAIL组和AdCMV-EGFP组的细胞存活率随着时间逐渐下降,且转染AdCMV-TRAIL的肿瘤细胞比转染AdCMV-EGFP的肿瘤细胞下降快,统计学分析有显著差异(P<0.001)。AdCMV-TRAIL和AdCMV-EGFP均能促进腺样囊性癌细胞凋亡,且转染AdCMV-TRAIL引发细胞凋亡的程度明显较AdCMV-EGFP组大,统计学分析有非常显著的差异(P=0.0005)。结论:Ad-CMV-TRAIL在体外能明显抑制ACC-2细胞的活性,有效促使其凋亡;AdCMV-TRAIL可以成为腺样囊性癌转基因治疗的新策略。
- 臧光祥孙宏晨穆亚冰柯小亮刘超刘金钟苏涛
- 关键词：腺样囊性癌腺病毒基因治疗
- 腺病毒介导的TRAIL基因对舌鳞状细胞癌细胞株的影响被引量：4
- 2007年
- 目的探讨以凋亡基因TRAIL为靶基因,腺病毒(Ad)为载体,巨细胞病毒启动子(CMV)为启动子的重组基因治疗药物AdCMV-TRAIL诱导鳞状细胞癌细胞系TCa83凋亡的作用。方法用重组绿色荧光蛋白基因(EGFP)的腺病毒AdCMV-EGFP为对照组,转染TCa83细胞确定重组腺病毒的转染率。在细胞转染1、3、5、7 d时,应用荧光倒置显微镜观察细胞形态,应用MTT检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。以AdCMV-TRAIL为实验组转染TCa83细胞,采用RT-PCR方法检测细胞TRAIL的表达。结果AdCMV-EGFP在1 000 particles/cell时转染率为100%。细胞转染AdCMV-TRAIL和AdCMV-EGFP后,随时间延长细胞存活率逐渐下降,但AdCMV-TRAIL组较AdCMV-EGFP组下降更快(P<0.001)。AdCMV-TRAIL和AdCMV-EGFP均能诱导TCa83细胞凋亡,而AdCMV-TRAIL组引起细胞凋亡的程度明显比AdCMV-EGFP组大(P<0.000 1)。通过RT-PCR可检测到594 bp的TRAIL基因。结论AdCMV-TRAIL在体外能抑制TCa83细胞的活性,并能促进其凋亡。
- 臧光祥穆亚冰孙宏晨刘金钟张泽兵柯小亮苗雷英
- 关键词：鳞状细胞癌腺病毒凋亡基因
- 5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记实验性牙移动大鼠血管内皮祖细胞的研究被引量：3
- 2009年
- 目的探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记大鼠外周血血管内皮祖细胞(EPCs)的最佳标记时间与剂量。方法建立实验性牙移动大鼠模型,密度梯度离心分离大鼠外周血EPCs并体外培养;免疫细胞化学、荧光化学鉴定细胞表面抗原;终浓度分别为5、10、15μmol/L的BrdU标记EPCs,并于标记后12、24、48、72、96h检测各组BrdU的标记率,筛选BrdU的最佳标记计量和时间。结果所培养细胞CD34、CD133呈阳性表达,且DiI-ac-LDL、FITC-UEA-1呈双荧光阳性;终浓度为10μmol/L的BrdU标记细胞72h后标记率达(66.8±2.9)%,与5μmol/L组相比差异有统计学意义(P<0.05),与15μmol/L组相比无统计学意义(P>0.05)。各浓度BrdU对细胞均无毒性影响。结论成功分离、培养了实验性牙移动大鼠外周血EPCs;终浓度为10μmol/L的BrdU标记EPCs72h后可获得较高标记率。本实验可为研究EPCs的趋化、分化机制奠定基础。
- 刘超苗雷英孙新华刘金钟
- 关键词：5-溴脱氧尿嘧啶核苷血管内皮祖细胞外周血
- hTERT启动TRAIL基因的腺病毒载体对人舌鳞癌细胞影响被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨以凋亡基因TRAIL为靶基因,腺病毒(Ad)为载体,人端粒酶(TERT)启动子引导的重组基因治疗药物AdTERT-TRAIL诱导人鳞状细胞癌细胞(TCa8113)凋亡的作用。方法:含有绿色荧光蛋白基因(EGFP)的腺病毒载体(AdTERT-EGFP)转染TCa8113细胞,确定重组腺病毒载体转染效率;AdTERT-EGFP为对照组,AdTERT-TRAIL为实验组感染TCa8113细胞,采用RT-PCR方法检测TRAIL的表达。应用倒置显微镜观察细胞形态,应用MTT检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:AdTERT-EGFP在1000p/cell时转染效率为100%。RT-PCR可检测到594bp的TRAIL基因。细胞转染AdTERT-TRAIL和AdTERT-EGFP后,随时间细胞存活率逐渐下降,但AdTERT-TRAIL组较AdTERT-EGFP组下降更快,统计学分析有显著意义(P<0.001)。AdTERT-TRAIL和AdTERT-EGFP均能诱导TCa8113细胞凋亡,而AdTERT-TRAIL组引起细胞凋亡的程度明显比AdTERT-EGFP组大,统计学有显著差异(P<0.0001)。结论:AdTERT-TRAIL在体外能明显抑制TCa8113细胞的活性,并能促进其凋亡。
- 臧光祥孙宏晨穆亚冰张泽兵柯小亮刘金钟苏涛
- 关键词：腺病毒凋亡基因
- 腺病毒介导EGFP共转染p16基因对腺样囊性癌细胞的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨以抑癌基因p16为靶基因,腺病毒(Ad)为载体的重组基因治疗药物Ad5CMV-p16对人涎腺腺样囊性癌细胞系(SACC-83)的作用。方法含有增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的腺病毒载体(Ad5CMV-EGFP)转染SACC-83细胞,确定重组腺病毒载体转染效率。Ad5CMV-EGFP为对照组,Ad5CMV-p16和Ad5CMV-EGFP共转染为实验组分别感染SACC-83细胞,采用RT-PCR方法检测p16基因的表达。应用倒置显微镜观察细胞形态,MTT检测细胞的增殖率,软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果Ad5CMV-EGFP在1000 viral particles[vp]/cell时转染效率达95%以上。RT-PCR实验组可检测到p16基因表达,而对照组未见表达。细胞单纯转染Ad5CMV-EGFP或共同转染Ad5CMV-p16后,随时间增长细胞增殖率逐渐下降,共同转染组较单纯转染Ad5CMV-EGFP组比变化更明显。软琼脂克隆形成实验显示,共转染组较对照组有更强的抑制细胞克隆形成能力。流式细胞仪检测细胞周期变化显示Ad5CMV-EGFP和Ad5CMV-p16共转染组G0-G1期细胞比例比单独转染Ad5CMV-EGFP组大。结论Ad5CMV-p16在体外能明显抑制SACC-83细胞增殖能力和活性,有望成为一种有效的基因治疗药物。
- 柯小亮孙宏晨臧光祥刘金钟苗雷英乔春燕
- 关键词：腺样囊性癌腺病毒
