国家自然科学基金(30170051) 作品数:9 被引量:27 H指数:2 相关作者: 徐顺清 李晓波 李媛媛 张红菱 孙纳 更多>> 相关机构: 华中科技大学 武汉工业学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 化学工程 一般工业技术 更多>>
壳聚糖GFP质粒纳米粒对肿瘤细胞的转染效率研究 被引量:2 2005年 用绿色荧光蛋白(GFP)基因做报告基因,制备壳聚糖GFP质粒纳米粒,体外转染人肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549,定性评价纳米粒的转染效率和细胞毒性。结果表明壳聚糖GFP质粒纳米粒能转染两种细胞并在表达GFP,但两种细胞的转染效率不同,且该纳米粒能抑制两种细胞生长。 张红菱 陈劲 李媛媛 孙纳 李晓波 徐顺清关键词:壳聚糖 质粒 纳米粒 转染 细胞活力 壳聚糖纳米载体提高抗乙肝免疫核糖核酸免疫活性的研究 被引量:9 2005年 目的:通过制备抗乙肝免疫核糖核酸(iRNA)的壳聚糖纳米载体,提高其免疫活性。方法:复凝聚方法制备壳聚糖免疫核糖核酸纳米粒,扫描电镜、原子力显微镜、Zeta电位/粒度分析仪观察测定壳聚糖免疫核糖核酸纳米粒形态、粒径和表面电位;核糖核酸酶(RNase)保护试验观察壳聚糖对包裹的iRNA的保护作用;白细胞黏附抑制(LAI)试验测定壳聚糖免疫核糖核酸纳米粒免疫活性。结果:壳聚糖与iRNA形成表面带正电荷的纳米粒,iRNA未被RNase的降解,白细胞黏附抑制率增高。结论:壳聚糖纳米载体提高了抗乙肝免疫核糖核酸的免疫活性。 张红菱 李媛媛 李晓波 孙纳 徐顺清关键词:壳聚糖 免疫核糖核酸 纳米粒 壳聚糖脱氧核糖核酸纳米球的制备及其相关特性研究 被引量:18 2005年 目的 制备壳聚糖脱氧核糖核酸 (DNA)纳米球并研究其理化性质和转染肝细胞系HepG2和L 0 2的活性。方法 用绿色荧光蛋白 (GFP)质粒做报告基因 ,GFP和壳聚糖通过复凝聚方法制备壳聚糖DNA纳米球 ,用扫描电镜观察其形态 ,激光粒度分析仪测定壳聚糖DNA纳米球粒度分布、表面电位 ,DNaseⅠ保护实验研究壳聚糖DNA纳米球对包裹基因的保护作用 ,用体外基因转染实验定性评价纳米球的转染活性 ,MTT试验研究壳聚糖DNA纳米球对HepG2和L 0 2的细胞毒作用。结果 壳聚糖形成表面带正电荷的纳米球 ,保护DNA免受DNaseⅠ的降解。壳聚糖DNA纳米球作为非病毒载体转染肝细胞系 ,基因能有效表达。结论 壳聚糖DNA纳米球作为非病毒载体转染肝细胞系有效 ,壳聚糖转染有细胞选择性。 孙纳 徐顺清 孙汉清 王小利关键词:转染 HEPG2 L-02 Inhibition of Inositol-1-phosphate Synthetase in Mycobacterium Tuberculosis by Chitosan-antisense Nanoparticles 2009年 Oligodeoxynucleotides (ODNs) were combined with the biodegradable polymer chitosan to form chitosan-ODN nanoparticles by complex coacervation, in order to improve the sta-bility and intracellular penetration. The diameter of the nanoparticles was light strength size and ranged between 60 and 219 nm with a mean value of 132 nm, while zeta potential was between +12 and +20 mV at pH 5.5. The chitosan-ODN nanoparticles could partially protect the encapsulated ODN from nuclease degradation. Moreover, chitosan-ODN nanoparticles were much more effective in inhibiting the proliferation of M.tuberculosis than free ODN. 李媛媛 徐顺清关键词:CHITOSAN ANTISENSE OLIGODEOXYNUCLEOTIDES TUBERCULOSIS 壳聚糖-DNA纳米粒对肿瘤细胞的转染效率(英文) 被引量:1 2005年 背景:非病毒载体具有低毒,低免疫反应,靶向性和易于组装等优点已成为目前研究基因转染的热点。目的:评价壳聚糖-DNA纳米粒对肿瘤细胞的转染效率和细胞毒性。设计:观察对比实验。单位:华中科技大学同济医学院环境医学研究所。材料:Zeta电位/粒度分析仪;荧光分光光度计;Hoechst33258;PLPS-3’EGFP质粒;肺癌细胞A549和人肝癌细胞HepG2。方法:实验于2004-12/2005-12在华中科技大学同济医学院环境医学研究所完成。用绿色荧光蛋白基因做报告基因,复凝聚方法制备壳聚糖绿色荧光蛋白质粒纳米粒。②采用扫描电镜观察制备的纳米粒形态;Zeta电位/粒度分析仪测量纳米粒的粒径和表面电位;酶保护试验检测纳米粒的抗DNA酶降解性能。③体外转染人肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549。分别在24,48和72h后在倒置荧光显微镜下观察细胞转染情况。④纳米粒细胞毒性分析采用四甲基偶氮唑盐试验。主要观察指标:①纳米粒的包封率与理化特征。②纳米粒的细胞转染效率。③纳米粒的细胞毒性。结果:①纳米粒的包封率与理化特征:壳聚糖纳米粒的核酸包封率为91.7%,纳米粒多呈球形,平均粒径149nm,表面电位+20.5mV。壳聚糖纳米粒能保护DNA不受DNA酶Ⅰ降解。②纳米粒的细胞转染效率:48h后转染率达到高峰,A549转染率为95%;而HepG2只有10%左右。③纳米粒的细胞毒性:纳米粒和壳聚糖溶液均能抑制HepG2和A549生长,壳聚糖溶液对细胞生长的抑制作用强于纳米粒。结论:壳聚糖质粒纳米粒能转染HepG2和A549两种肿瘤细胞,且对两种肿瘤细胞的生长有抑制作用,提示壳聚糖纳米粒能作为DNA的载体,用于肿瘤细胞的转染。 张红菱 李媛媛 李晓波 徐顺清关键词:壳多糖 质粒 转染 RNA壳聚糖纳米载体的制备及其酶降解保护作用 被引量:1 2005年 采用复凝聚法制备RNA壳聚糖纳米粒,采用扫描电镜、Zeta电位 /粒度分析仪测定纳米粒的形态、粒径和表面电位;核糖核酸酶(RNase)保护实验观察壳聚糖对包裹的RNA的保护作用。结果显示壳聚糖与RNA形成表面带正电荷的纳米粒,RNA被保护不受RNase的降解。 张红菱 李媛媛 李晓波 孙纳 徐顺清关键词:壳聚糖 RNA 纳米粒 应用包裹在纳米粒中的CpG脱氧寡核苷酸增强对乙肝疫苗的免疫应答 2007年 目的:探讨应用包裹在壳聚糖纳米粒中的胞嘧啶-鸟嘌呤的脱氧寡核苷酸(CpG ODN)增强小鼠对乙肝疫苗的免疫应答。方法:采用复凝聚方法制备CpG ODN壳聚糖纳米粒。乙肝疫苗单用或联合CpG ODN免疫小鼠,用ELISA法检测抗HBs水平,流式细胞仪检测外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群,MTT法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果:CpG ODN联合乙肝疫苗组抗HBs水平较单用乙肝疫苗组明显升高,且以CpG ODN壳聚糖纳米粒联合组产生的抗HBs水平最高;T淋巴细胞亚群分析显示,CpG ODN纳米粒联合组的CD4+T淋巴细胞百分比和CD4+/CD8+比值明显高于单用乙肝疫苗组;CpG ODN纳米粒联合组的脾淋巴细胞刺激指数明显高于其他组。结论:CpG ODN壳聚糖纳米粒联合乙肝疫苗不仅能诱导出高水平的抗HBs,且对细胞免疫也有调节作用。 向一 余青松 徐顺清 祁智 周漠炯关键词:乙肝表面抗原 壳聚糖纳米粒 特异性抗肿瘤免疫核糖核酸的提取 被引量:2 2006年 用H22细胞接种于小鼠腹腔,抽取癌性腹水,分离肿瘤细胞,用肿瘤细胞裂解物加弗氏完全佐剂充分乳化制备成免疫原,接种于小鼠,取小鼠的免疫器官提取核糖核酸,并进行相关性能检测。结果表明该方法制备提取免疫的核糖核酸携带供体肿瘤特异性免疫信息,能提高抗肿瘤的疗效。 张红菱 李媛媛 李晓波关键词:肿瘤细胞 特异性 免疫核糖核酸 壳聚糖纳米载体材料性能对抗乙肝免疫核糖核酸免疫活性的影响(英文) 2005年 背景:近年来抗乙肝免疫核糖核酸作为一种免疫治疗剂,对慢性肝炎的治疗作用备受重视,但临床应用效果不稳定,因此构建一个能有效保护免疫核糖核酸并能被组织更好吸收的免疫核糖核酸运载体系具有重要意义。壳聚糖作为一种新辅料取得了良好的效果。目的:制备抗乙肝免疫核糖核酸的壳聚糖纳米载体,观察其免疫活性。方法:实验于2003-12/04-12在华中科技大学同济医学院环境医学研究所完成。①制备壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒采用复凝聚方法。②壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒形态、粒径和表面电位测定采用扫描电镜、原子力显微镜、Zeta电位/粒度分析仪观察。③壳聚糖对包裹的免疫核糖核酸的保护作用观察采用核糖核酸酶保护试验。④壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒免疫活性采用白细胞黏附抑制试验测定。体内白细胞黏附抑制指数测定:取小白鼠30只,随机分4组,生理盐水组5只、壳聚糖组5只、壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒组10只和免疫核糖核酸组10只。腋下和腹股沟皮下分别多点注射生理盐水、壳聚糖、壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒和免疫核糖核酸溶液后,无菌取出小鼠脾脏,制成单细胞悬液,加入乙肝疫苗和小牛血清1640液及实验试剂,单纯脾细胞悬液作为对照,根据公式[(对照孔A值-实验孔A值)/对照孔]×100%计算黏附抑制指数。体外白细胞黏附抑制指数测定:取健康小鼠1只,制备脾细胞悬液,于培养孔板中加入健康小鼠脾细胞悬液、乙肝疫苗、壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒或免疫核糖核酸溶液或壳聚糖,对照孔不加乙肝疫苗,测定方法同上。结果:①壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒的物理特性:新鲜制备的壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒多呈球形,放置时间在48h以内形态较稳定,但粒径略有增大,放置时间超过72h以后肉眼可见液体中有絮状物析出。Zeta电位/粒度分析仪� 张红菱 李媛媛 李晓波 孙纳 徐顺清关键词:壳多糖 核糖核酸酶类