国家重点基础研究发展计划(G1999054304)
- 作品数：23 被引量：251H指数：9
- 相关作者：曹谊林刘伟崔磊刘德莉李卿更多>>
- 相关机构：上海第二医科大学附属第九人民医院上海交通大学医学院附属第九人民医院上海组织工程研究与开发中心更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 爱茜蓝法检测组织工程化软骨及软骨细胞中蛋白聚糖的含量被引量：14
- 2003年
- 李卿刘伟夏万尧崔磊曹谊林
- 关键词：组织工程化软骨软骨细胞蛋白聚糖
- 多孔β-TCP用于构建长骨组织的实验研究被引量：4
- 2004年
- 探索新型的多孔 β 磷酸三钙 (β TCP)作为组织工程骨支架材料的应用效果。分别应用单纯 β TCP(对照组 )和骨髓间质干细胞 (bonemarrowstemcells ,BMSCs)、β TCP复合物 (实验组 )修复狗尺骨 2cm的骨缺损 ,术后通过X光片、核素扫描、大体观察和组织学观察判断长骨骨缺损的修复效果。X片观察 :3月时 ,实验组尺骨缺损由内植物较好的桥接 ,内植物边缘模糊 ,管腔及内植物与缺损断端之间有新生骨形成 ;对照组尺骨缺损处的内植物明显变形 ,出现密度不均的裂解颗粒 ,其与缺损断端连接处有新生骨形成。 6月时 ,实验组尺骨缺损被伴有骨髓腔的新生骨连接 ,有皮质骨形成 ;对照组尺骨缺损被高密度影连接 ,没有骨髓腔和明显皮质骨形成 ,尺骨远端直径明显细于实验组。核素扫描的延迟相骨显像 :1月和 2月时两组之间有显著性差异 ,3月时两组之间无显著性差异。大体观察 :3月时可见 ,对照组尺骨直径明显小于实验组 ,实验组的骨缺损处新生物的体积明显大于对照组 ;对照组的内植物周围有纤维组织紧密包裹 ,难于分离。 6月时可见 ,实验组新生骨色泽红白相间 ,明显已被塑形 ;对照组新生骨体积、形状不完整。HE观察 :3月时 ,实验组 β TCP的孔隙中 ,可见新生骨在表面贴附生长 ;对照组 β TCP的孔隙中有类骨质形成 。
- 祝联袁捷王敏陈付国周广东崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：骨髓基质干细胞细胞培养
- 碱性成纤维细胞因子对猪弹性软骨细胞增殖和成软骨能力的影响被引量：11
- 2002年
- 目的 研究碱性成纤维细胞因子 (b FGF)对体外培养的弹性软骨细胞增殖和成软骨能力的影响 ,探讨b FGF对软骨组织工程的意义。方法 细胞取自猪耳软骨 ,用含 1 0、2 5、50 μg/L3种浓度b FGF的培养液 ,体外培养至第 3代 ,从细胞形态、数量和基质分泌等方面进行研究。结果 含b FGF组细胞贴壁呈类成纤维细胞样 ,撤去b FGF ,细胞形态可恢复正常 ;含b FGF各组在第 3代 ,细胞总数是无b FGF组的 60～ 70倍 (P <0 .0 1 ) ,但 3种不同浓度b FGF对细胞增殖差异无显著性 ;培养液氨基糖氨多糖 (GAG)含量测定各组差异无显著性 ;免疫组织化学和原位杂交示各组第 3代软骨细胞仍有Ⅱ型胶原表达。结论 应用b FGF能在 3周内从少量软骨组织获取大量软骨细胞 ,且未改变细胞表型和功能 ,对软骨组织工程有重要意义 ;在 1 0、2 5、50 μg/L 3种浓度中 ,1 0μg/L为b
- 丁小邦夏万尧陈兵崔磊刘伟商庆新曹谊林
- 关键词：碱性成纤维细胞因子细胞增殖
- 永生化软骨细胞的生物学特性
- 2003年
- 本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化软骨细胞系(TL1),在体外已连续培养10个月。RT-PCR和PCR-ELISA法测得其有高水平的端粒酶稳定表达。通过生长曲线、HE染色、流式细胞仪分析,以及裸鼠成瘤实验,表明它的细胞增殖能力增加,凋亡率下降并维持在体外培养早期细胞的水平,且细胞无恶变迹象。对软骨特异性分子的RT-PCR、Western杂交和免疫组化的结果分析,发现TL1中有SOX9的表达;无结构完整的aggrecan表达;有低水平的Ⅱ型胶原表达;Ⅰ型胶原的表达随细胞的表型改变而改变。综上所述,通过外源性hTERT的稳定表达,建立了永生化的猪耳软骨细胞系;但是它在单层培养的状态下,软骨细胞特异性的基因表达逐步发生改变,导致其部分丧失软骨细胞的正常表型。
- 李卿刘伟陈瑾君陆峻泓刘德莉曹谊林
- 关键词：软骨细胞永生化分化生物学特性
- 应用珊瑚及骨髓基质干细胞复合物修复股骨缺损的实验研究被引量：30
- 2003年
- 目的探索应用组织工程技术修复股骨缺损的效果。方法分离、定向诱导和扩增羊骨髓基质干细胞(BMSCs),采用VonKossa染色、检测Ⅰ型胶原表达、检测细胞培养液中碱性磷酸酶和骨钙蛋白含量等方法,研究体外培养、扩增后的BMSCs生物学特性和成骨能力。在动物模型中,分别使用单纯珊瑚和珊瑚、BMSCs复合物修复羊股骨中段25mm缺损。根据羊股骨的解剖特点,将珊瑚制成长25mm、内径10mm、外径16mm的圆桶状植入骨缺损的部位。术后摄X线片并进行组织学观察。结果BMSCs经诱导分化后,具有成骨细胞表型和功能。珊瑚、BMSCs复合物可再生新骨组织,并完好修复股骨缺损。珊瑚、BMSCs复合物修复股骨缺损能力优于单纯珊瑚,两组比较差异有非常显著性意义。结论组织工程化骨可再生骨组织,组织工程技术可用于修复股骨缺损。
- 祝联崔磊王敏王倬刘伟曹谊林
- 关键词：股骨缺损BMSC珊瑚骨髓基质干细胞细胞培养液
- 人软骨蛋白聚糖Northern杂交探针的构建及其应用被引量：1
- 2003年
- 目的 构建人软骨蛋白聚糖 (aggrecan)探针 ,应用于整复外科研究中Northern法对aggrecanmRNA表达水平的检测。 方法 取人软骨细胞 ,逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR )扩增ag grecan球间区域 (IGD)片段。将纯化的RT PCR产物构建入 pUCm T载体 ,酶切及测序鉴定。32 P标记aggrecan探针 ,Northern杂交法检测人软骨组织和培养软骨细胞 (各 3组 )以及人正常和瘢痕疙瘩成纤维细胞 (各 6组 )中aggrecanmRNA的表达。 结果 构建产物经鉴定 ,显示其包含了人ag grecanIGD的基因序列 ,与GeneBank已收录序列 (M 5 5 172 ) 10 0 %相同。Northern结果显示 ,该探针可用于aggrecanmRNA表达水平的定性和定量检测。对正常人软骨组织和体外培养人软骨细胞的aggrecan β actin的吸光度比值进行比较 ,发现其间 ( 0 .5 75 6± 0 .0 15 2 1.36 90± 0 .0 2 0 6 )差异具有显著性 (P <0 .0 1)。结论 Northern杂交法可以对整复外科研究中常见的软骨和瘢痕疙瘩成纤维细胞中aggrecanmRNA的表达水平进行检测 ,且具有较好的灵敏度和特异性。
- 陆峻泓李卿刘伟吴娟娟刘德莉曹谊林
- 关键词：基因表达整复外科
- DNA微阵矩分析人软骨细胞体外老化过程中基因表达水平的变化被引量：5
- 2004年
- 目的研究成人软骨细胞体外单层培养老化过程中基因表达水平的变化,初步探索人软骨细胞老化发生的可能机制。方法取体外培养的第1代(P1)至第4代(P4)人肋软骨细胞,观察细胞增殖率,阿利新兰(Alcianblue)法定量检测硫酸软骨素蛋白聚糖聚集体(aggrecan)中糖胺多糖(GAGs)含量,RT-PCR分析Ⅰ、Ⅱ型胶原及aggrecan基因表达量,以观察人软骨细胞体外老化过程。并采用DNA微阵矩技术对P1及P4软骨细胞表达差异的基因进行比较分析,P1及P4人肋软骨细胞基因表达水平差异≥2倍时,被认为差异具有显著性。结果P4软骨细胞从细胞增殖率,细胞中GAGs含量,Ⅱ型胶原及aggrecan基因表达量分析均明显低于P1软骨细胞(P<0.01)。在1000点的含有原癌基因、抑癌基因、细胞凋亡、应激反应蛋白基因和免疫相关基因的芯片分析中,P1及P4间存在差异的基因共36个,其中在P4中下调的基因11个,主要为细胞外基质、生长因子转录因子等,而在P4中上升的基因共25个主要为蛋白酶类、炎症因子及凋亡相关基因等。结论P4软骨细胞呈现老化特征。通过DNA微阵矩技术发现P4老化细胞中基质合成相关基因表达下降,而降解酶类基因表达上升,致细胞外基质减少;且细胞增殖有关基因表达的减少及凋亡因子的增加,老化细胞增殖率下降。
- 张艳柴岗刘伟崔磊曹谊林
- 关键词：软骨细胞体外基因表达水平肋软骨DNART-PCR分析
- 端粒酶与组织工程种子细胞衰老的研究被引量：1
- 2005年
- 种子细胞是组织工程基本要素之一,目前种子细胞主要来源是自体的同源细胞,存在容易衰老,不易大量扩增的缺陷。端粒及端粒酶在细胞的衰老过程中扮演着重要角色。通过回顾有关研究,探讨端粒酶在延缓组织工程种子细胞衰老中的作用。
- 沈干王彦丛笑倩刘伟曹谊林
- 关键词：种子细胞衰老端粒酶
- 新型β-磷酸三钙的制备与成骨能力的实验研究被引量：15
- 2006年
- 目的采用有机泡沫浸渍法制备多孔β-磷酸三钙(β-TCP)生物陶瓷,探讨其作为骨组织工程支架材料的可能性。方法有机泡沫浸渍法制备β-TCP支架材料,接种人骨髓基质干细胞,体外成骨诱导培养。相同条件下培养的单层细胞作为对照组。采用扫描电镜和噻唑蓝比色法观察细胞在材料上的增殖能力,同时测定碱性磷酸酶活性和骨钙蛋白含量来观察细胞在材料上的成骨分化能力。将体外培养7 d的细胞材料复合物和单纯材料回植裸鼠皮下,分别于术后4、8、12周取材观察异位成骨情况。结果扫描电镜观察显示实验组细胞在材料上增殖良好,MTT结果与对照组无明尼差异,但碱性磷酸酶活性和骨钙蛋白含量均高于单层培养的细胞。细胞材料复合物在裸鼠皮下4周已经成骨,并随时间延长骨量增多。单纯材料组在各时间点均未成骨。结论有机泡沫浸渍法制备的多孔β-TCP生物陶瓷具有良好的支持成骨能力,是一种较理想的骨组织工程支架材料。
- 刘广鹏赵莉刘波袁捷崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：Β-磷酸三钙骨髓基质干细胞成骨能力
- Cathepsin K基因慢病毒质粒载体的构建被引量：2
- 2005年
- 目的构建Cathepsin K(CTSK)基因慢病毒表达质粒,为进一步研究Cathepsin K在人软骨细胞体外老化过程中的作用奠定基础。方法采用RT-PCR技术扩增Cathepsin K基因的蛋白翻译区,通过连接、转化等分子生物学技术,将该基因克隆至慢病毒pLenti6-V5载体上,经BamH I、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序。结果从软骨细胞中成功地克隆出990bp的Cathepsin K基因,并经酶切分析得到6．964Kb和1．005Kb大小的两片断,测序结果显示接头两端序列正确。结论通过基因克隆方法成功构建了Cathepsin K基因表达质粒,可用于进一步的病毒包装,为深入研究该基因对软骨细胞老化的影响奠定了基础。
- 张艳柴岗刘伟崔磊曹谊林
- 关键词：慢病毒转基因
