国家高技术研究发展计划(2004AA216080)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：许勇王铸钢项佑贵更多>>
- 相关机构：上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- hOPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型的建立被引量：3
- 2005年
- 目的:建立带有人类骨保护素OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型,为OPG体内转录水平的表达调控研究和药物筛选创造条件。方法:将克隆到的人类OPG基因5′端上游6.0kb非翻译序列作为启动子,大肠杆菌编码β半乳糖苷酶的LacZ基因作为报告基因,构建表达载体pCINeoOPGLacZ。经显微操作注射到受精卵原核中,经PCR以及Southern印迹杂交鉴定转基因阳性小鼠;用RTPCR分析LacZ在组织中的表达;利用邻硝基苯βD半乳吡喃糖苷(ONPG)作为底物反应后比色分析组织中的β半乳糖苷酶活性。结果:构建完成的表达载体pCINeoOPGLacZ质粒经酶切和测序鉴定序列正确,线性化后显微注射。PCR以及Southern印迹杂交鉴定获得了10只转基因小鼠(Founders),经交配繁育,建立了5个转基因小鼠系,RTPCR分析表明其中一个系小鼠组织中表达LacZ基因,与内源OPG表达模式一致,组织中可以广泛检测到相应的β半乳糖苷酶活性。结论:成功建立了人类OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠,为体内研究OPG转录水平的表达及药物筛选提供了理想的动物模型。
- 许勇项佑贵严兰珍王龙徐国江费俭傅继粱王铸钢
- 关键词：启动子报告基因转基因小鼠
