陕西省自然科学基金(2010JQ4002)
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 相关作者：韩骅张振强冯蕾付伟梁英民更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学唐都医院解放军第323医院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠紧密连接蛋白ZO-2真核表达载体的构建和表达
- 2012年
- 目的:克隆小鼠紧密连接蛋白ZO-2(zonula occludens protein2)基因构建其真核表达载体,并验证其在293T细胞系中的表达,为进一步研究其功能奠定基础。方法:从小鼠淋巴结来源的cDNA中分三段分别扩增,通过基因克隆方法获得紧密连接蛋白ZO-2基因全长,连接至pMD-18T载体中,酶切测序正确后,插入pEGFP-C2载体中,构建真核表达载体pEGFP-C2-ZO2。酶切正确后,瞬时转染入293T细胞中,48h后荧光显微镜观察其绿色荧光GFP融合蛋白的表达,并用Western blot检测其在转染细胞中的蛋白水平表达。结果:通过酶切鉴定和测序结果证明成功克隆了ZO-2基因,western blot结果表明成功构建了真核表达载体pEGFP-C2-ZO2。结论:小鼠紧密连接蛋白ZO-2基因的获得和真核表达载体pEGFP-C2-ZO2的成功构建为下一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 朱冰柯秦鸿雁付伟梁世倩曹秀丽韩骅梁英民
- 关键词：293T细胞真核表达
- LIM结构域蛋白FHL1C抑制Notch信号途径的转录激活研究被引量：1
- 2011年
- 目的:克隆人表达FHL1C基因以及建立真核表达载体和慢病毒载体。方法:从人的骨骼肌细胞来源的cDNA中扩增并克隆人FHL1C基因的编码区,连接至pMD-18T载体酶切鉴定后测序。序列测定确认后,双酶切pMD18T-FHL1C回收片段,插入真核表达载体,构建真核表达载体pCMV-Myc-FHL1C酶切鉴定正确后,转染Hela细胞及Cos7细胞,用Western Blot检测其在转染细胞中的表达,用双荧光素报告基因系统检测其对Notch信号作用。构建FHL1C-IRES-GFP表达单元,建立慢病毒表达载体plen-ti6/V5-FHL1C-IRES-GFP,包装慢病毒后感染培养的细胞,用免疫荧光显微镜、Western Blot检测分析其在被感染的细胞中的表达。结果:通过PCR方法成功扩增了人FHL1C基因的编码区。通过转染Hela及Cos7细胞,使用Western Blot检测其蛋白水平表达,双荧光报告基因系统分析均能够下调激活的Notch信号。成功构建了FHL1C慢病毒表达载体pLenti6/V5-FHL1C-IRES-GFP,包装慢病毒,把获取的慢病毒感染细胞后通过荧光显微镜证实被感染的细胞绿色荧光蛋白正确表达,Western Blot检测证实其表达。结论:成功建立起FHL1C真核表达载体及慢病毒表达系统,为研究急性T淋巴细胞白血病与Notch信号转导通路之间的关系奠定了基础。
- 付伟秦鸿雁严学倩于恒超韩骅梁英民
- 关键词：急性T淋巴细胞白血病慢病毒NOTCH信号途径
- PMSG与hCG给予剂量及时间对小鼠超排卵效果的影响被引量：8
- 2010年
- 目的:探讨不同剂量及注射时间给予PMSG和hCG对小鼠超排卵效果的影响。方法:将42只F1小鼠分为6组,分别注射PMSG5IU,10IU,15IU;48小时后分别注射hCG5IU,10IU,15IU,然后与公鼠合笼;次日晨检查阴栓,阳性者当日10:30将受精卵冲出,计数受精卵数量。结果:在13:00注射5IUPMSG,48h后注射5IUhCG平均得到29.3个正常可用于显微注射的2细胞卵。结论:在13:00注射5IUPMSG,48h后注射5IUhCG是最佳的注射剂量和时间。
- 冯蕾吴发伟张振强韩骅
- 关键词：孕马血清人绒毛膜促性腺激素超排
- 显微操作针制作方法的探讨被引量：5
- 2010年
- 目的:探讨在制作转基因小鼠显微注射时所用移卵针,持卵针及注射针的最佳制作方案。方法:拉针仪运行不同的参数将薄壁硼硅玻璃管拉制成不同口径的显微注射针,分别用于移卵,持卵和注射。结果:用上述方法制作的移卵针,持卵针和注射针用于小鼠受精卵的显微注射,得到非常满意的效果。结论:显微操作针是转基因动物制作中关键的工具,其针尖口径的大小,针尖的长度,弯度等与显微注射的成功率密切相关。探讨了显微注射所用各种针的制作方法,并归纳了显微操作针制作过程中的注意事项和可能的影响因素。
- 冯蕾吴发伟张振强韩骅
- 关键词：转基因动物显微注射
