目的:初步分析丝裂原活化蛋白激酶p38在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化过程中的作用。方法:利用BMP9重组腺病毒感染C3H10T1/2细胞,Western blot检测p38激酶总蛋白表达水平和磷酸化水平。p38的特异性抑制剂SB203580抑制p38活性或RNA干扰抑制p38表达后,分析ALP活性变化,利用茜素红S染色检测钙盐沉积,Real Time PCR检测Smad6和Smad7的mRNA表达水平,动物实验确认在RNA干扰p38蛋白激酶后,对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞异位成骨的影响。结果:BMP9不影响p38激酶的蛋白表达水平,但却可以促进p38激酶的磷酸化;p38抑制剂SB203580可剂量依赖性地抑制由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,RNA干扰导致p38基因沉默同样也可抑制BMP9诱导的ALP活性,但抑制效应不及SB203580;SB203580还能够抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的钙盐沉积;BMP9的靶基因Smad6和Smad7的mRNA表达也能被SB203580所抑制;干扰p38蛋白激酶可抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞在裸鼠皮下异位成骨。结论:p38蛋白激酶参与了BMP9诱导的C3H10T1/2成骨分化。
