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建立果蝇心脏发育候选基因CG3295的基因敲除系: 2009年; 果蝇CG3295基因是哺乳动物基因RMND5在果蝇中的同源物,其功能未知.利用P转座子敲除技术进行果蝇CG3295基因的敲除研究,将果蝇14234系的P转座子与Δ2-3系中的转座酶基因组合到同一个体,使P转座子在体内敲掉目的基因.从后代挑选不含P转座子和转座酶基因的500头雄蝇分别与缺失了CG3295基因的测交系交配,从后代筛选获得20个CG3295基因敲除候选系.进一步利用Hand-GFP系使候选系的心脏表达绿色荧光蛋白,在荧光显微镜下根据候选系是否表现心脏突变表型鉴定敲除系,最后获得了12个表现心脏突变表型的CG3295基因敲除系.; 夏琼邓云邓志伟廖丹戴悦万永奇莫小阳李永清王跃群袁婺州; 关键词：果蝇

利用Tol2转座子构建斑马鱼心脏组织特异表达转基因载体及其表达分析被引量：10: 2010年; 为了制备用于在斑马鱼心脏中特异表达目的基因的转基因载体,通过分子克隆的方法对能够在斑马鱼心脏中特异表达EGFP报告基因的Tol2载体进行了改造,在原有的CMLC2启动子与EGFP编码区之间插入带有多克隆位点的IRES序列,获得pTol2-CMLC2-IRES-EGFP转基因表达载体,该载体可以实现在同一个启动子CMLC2的驱动下分别同时表达目的基因和EGFP;为了验证该表达载体的有效性,进一步在CMLC2启动子与IRES序列之间插入DsRed-Monome编码区,利用得到的pTol2-CMLC2-RED-IRES-EGFP转基因载体显微注射到斑马鱼单细胞期胚胎中进行表达分析,结果表明外源目的基因DsRed-Monome和报告基因EGFP均能以相同的表达模式在斑马鱼心脏组织中特异表达。pTol2-CMLC2-IRES-EGFP转基因表达载体的成功构建对于建立心脏发育候选基因的斑马鱼转基因实验模型具有重要意义。; 陈婷芳罗娜谢华平吴秀山邓云; 关键词：斑马鱼转基因

人类心脏特异表达基因pygo1的克隆与功能研究: 2008年; 心血管疾病已经成为危害人类健康和生命的头号杀手．研究发现，各种心血管疾病与心脏心律失常和心力衰竭有关．wg信号途径直接调控心脏前体细胞的形成和特化过程．pygo基因是近几年在果蝇市新鉴定的一个参与wg信号途径的基因，但pygo是否参与心力衰竭发生的过程尚不得而知．利用RT-PCR的方法，克隆出人类pygo1基因的全长．该基因位于15q21．1，蛋白342～396区域包含一个PHD结构域．亚细胞定位分析表明，pygo1蛋白分布在细胞核中．利用心力衰竭果蝇模型，通过电场对正常和突变基因的成蝇瞬间中断其心脏功能，记录果蝇心衰率的表现，研究pygo的功能．结果表明，果蝇pygo基因突变杂合子的心脏停止跳动和心脏纤维性颤动的比例达32．3％，比对照的高15．6％，表明pygo与心力衰竭的发生有关．; 戴悦; 关键词：心率失常心力衰竭果蝇

斑马鱼HAS2基因的克隆、抗体制备及分析被引量：2: 2010年; HAS2是斑马鱼心脏发育的一个标志基因,为了利用斑马鱼动物模型进一步研究HAS2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼HAS2基因的片段.将所得的片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-HAS2)转化大肠杆菌(E.coli)BL21,IPTG诱导表达GST-HAS2融合蛋白;通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blot检测抗体活性.生物信息学分析结果表明:斑马鱼HAS2基因的开放阅读框含有1 658 bp,编码552个氨基酸;SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为4.5×104;Western blotting分析表明,制备的抗体具有良好的特异性.; 杨建华杨青吴秀山袁婺洲王跃群李永青莫小阳万永奇; 关键词：斑马鱼原核表达多克隆抗体

斑马鱼hand2基因的克隆、抗体制备及分析被引量：6: 2010年; 为利用斑马鱼动物模型进一步研究bHLH转录因子家庭重要成员hand2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼hand2基因.将所得片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并通过IPTG诱导表达出GST-Hand2融合蛋白,经GST亲和层析法纯化后,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,利用western b lotting和免疫组化的方法对抗体进行分析.分析表明:斑马鱼hand2基因成熟肽编码区含有627 bp,编码208个氨基酸,与人Hand2蛋白的同源性达到83%;IPTG诱导表达后,表达的融合蛋白占菌体总蛋白的71%,经GST纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.融合蛋白相对分子质量约为49 000.分析表明,制备的抗体具有很好的特异性.; 朱婷黄文王跃群李永青袁婺洲莫小阳万永奇吴秀山邓云; 关键词：斑马鱼原核表达多克隆抗体

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国家自然科学基金(30671137)