国家自然科学基金(20977019) 作品数:6 被引量:15 H指数:3 相关作者: 吴庆 周志俊 梁继仁 李翠珍 张杰 更多>> 相关机构: 复旦大学 云南医学高等专科学校 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市公共卫生重点学科建设项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
苯并(a)芘对大鼠睾丸支持细胞连接蛋白基因表达的影响 被引量:3 2013年 [目的]探讨苯并(a)芘(BaP)对大鼠原代培养睾丸支持细胞的连接蛋白(connexin 43、occludin、ZO-1、N-cadherin)基因mRNA表达的影响及可能机制。[方法]取出生21d SD大鼠睾丸组织,分离支持细胞,细胞分离后,均按照1.5×106个/mL浓度接种于细胞培养板中。培养48h后,以0、1、10、50、100μmol/L浓度的BaP同时染毒于原代培养的大鼠支持细胞12h,每个剂量设置6个平行孔。检测支持细胞活力、凋亡蛋白caspase-3活性,以及连接蛋白基因的mRNA表达。[结果]在BaP 50μmol/L时,支持细胞活力降低(和对照组相比,P<0.01);在BaP 10μmol/L时caspase-3活性升高,连接蛋白connexin 43、occludin、和ZO-1基因的mRNA表达降低(和对照组相比,P<0.05)。在BaP 100μmol/L时连接蛋白N-cadherin基因的mRNA表达降低(和对照组相比,P<0.05)。加入caspase-3抑制剂后,BaP所诱导的连接蛋白基因表达下降,且随caspase-3活性变化而发生改变。[结论]BaP能诱导大鼠支持细胞连接蛋白mRNA表达下降,BaP诱导的caspase-3活性上升是调节连接蛋白mRNA表达下降的可能机制。 李翠珍 霍倩 张晨 周志俊 吴庆关键词:苯并(A)芘 睾丸支持细胞 CASPASE-3 连接蛋白 大鼠新生期苯并芘暴露对睾丸抗氧化酶活性和精子生成量的影响 被引量:4 2012年 [目的]探讨SD大鼠新生期苯并芘暴露对抗氧化酶活性和精子生成量的影响。[方法]自大鼠出生后第1天起连续7d给予0、5、10和25mg/kg 3,4-苯并芘灌胃,在出生后第8、35和90天解剖大鼠,脏器称重并计算脏器系数和每日精子生成量。测定睾丸中(出生后第8、35和90天)CYP1A1基因表达和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及过氧化氢酶(catalase,CAT)活性。[结果]连续染毒7d,在出生后第8天,睾丸中细胞色素P450氧化酶基因(CYP1A1基因)表达随暴露剂量升高而上升,且10和25mg/kg暴露组基因表达量与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);在出生后第35和90天时,各组睾丸中CYP1A1基因几乎没有表达。SOD、CAT活性测定显示:在出生后第8天,与对照组比,25mg/kg组的SOD活性上升(P<0.05),虽然各暴露组CAT活性与对照组相比差异无统计学意义,但是随着剂量的增大,CAT活性呈上升趋势;出生后第35天时,与对照组相比,各剂量组SOD、CAT活性均明显下降(P<0.05);在出生后第90天,SOD、CAT活性变化与对照组比较,差异无统计学意义。出生后第90天时,苯并芘10和25mg/kg暴露组每日精子生成量较对照组下降(P<0.05)。[结论]SD大鼠新生期暴露苯并芘可导致成年期睾丸每日精子生成量下降,影响睾丸抗氧化酶SOD和CAT的活性。 梁继仁 朱鸿雁 李翠珍 周志俊 吴庆关键词:精子计数 超氧化物歧化酶 过氧化氢酶 六氯联苯诱导新生雄性大鼠睾丸细胞凋亡的体内体外研究 2011年 [目的]观察2,2′,4,4′,5,5′-六氯联苯(PCB153)对新生SD大鼠睾丸细胞凋亡的影响。[方法]体内实验:将出生3d(postnatal day 3,PND 3)的SD大鼠随机分组,每组24只,经口给予溶剂对照(玉米油)和PCB153(0.025、0.250、2.500mg/kg),连续暴露5d。最后一次暴露24h后解剖每组一半的动物,取睾丸组织做成切片,原位末端凋亡法(TUNEL法)检测睾丸细胞凋亡水平并电镜观察细胞形态;剩余动物在无暴露条件下继续喂养至12周龄(成鼠)解剖,进行精子计数。体外实验:新生大鼠(postnatal day 5,PND5)睾丸组织分离精原-支持细胞共培养48h后,用0、1、10、50μmol/L的PCB153染毒24h,染色观察细胞核凋亡,流式细胞仪测定细胞早期凋亡率和晚期凋亡率。[结果]新生期大鼠不同剂量PCB153暴露后,与对照组相比,0.250mg/kg和2.500mg/kg剂量组12周龄睾丸每日精子生成量明显下降(P<0.05)。PND8时,TUNEL法检测发现PCB153染毒组大鼠睾丸中凋亡细胞各组间差异无统计学意义。电镜下观察曲细精管,可见染毒组支持细胞线粒体肿胀,生殖细胞核固缩凝结。体外共培养细胞染毒24h后,流式细胞仪检测发现,与对照组比较,50μmol/L组早期细胞凋亡率明显升高(P<0.05);但晚期凋亡率各组差异无统计学意义。荧光显微镜下观察,从PCB153染毒浓度10μmol/L起可见明显的凋亡细胞核形态特征。[结论]新生期大鼠暴露PCB153可直接诱导睾丸细胞凋亡,引起雄性大鼠生殖功能的远期损害。 张杰 李克勇 朱红雁 梁继仁 李翠珍 周志俊 吴庆关键词:细胞凋亡 精子发生 苯并[a]芘对小鼠睾丸支持细胞缝隙连接蛋白表达及细胞增殖的影响 被引量:3 2015年 [目的]探讨苯并[a]芘(Ba P)在不引起小鼠睾丸支持细胞凋亡的情况下,对缝隙连接蛋白43(CX43)表达及细胞增殖的作用。[方法]取小鼠睾丸支持细胞系——TM4细胞,以二甲基亚砜为对照,0.5、10.0μmol/L浓度的Ba P同时染毒培养的TM4细胞,并于染毒的4 h、72 h后收集细胞,检测细胞的活力、增殖、凋亡情况,以及CX43的m RNA和蛋白的表达量。[结果]与对照组相比:Ba P染毒4 h时,两个染毒组细胞存活率、增殖、凋亡和CX43蛋白表达没有明显变化(P>0.05),而CX43 m RNA的表达升高(P<0.05);72 h时,两个染毒组细胞凋亡无明显变化,而细胞存活率和增殖均下降(P<0.05),CX43 m RNA和蛋白表达出现上升(P<0.05)。[结论]0.5、10.0μmol/L浓度的Ba P染毒小鼠睾丸支持细胞,可抑制细胞增殖,引起CX43 m RNA和蛋白表达升高。 于茂辉 刁海鹏 冀晓丽 刘庆平 周志俊 吴庆关键词:苯并[A]芘 睾丸支持细胞 缝隙连接蛋白43 镉致大鼠前体精原干细胞-支持细胞共培养系损伤的形态变化 被引量:1 2010年 [目的]通过对大鼠前体精原干细胞-支持细胞共培养系进行镉染毒,探讨镉对前体精原干细胞和支持细胞共培养系早期效应的形态学变化。[方法]从3天龄的SD大鼠睾丸中分离前体精原干细胞和支持细胞并进行24h共培养后,再分别给予0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L的氯化镉(CdCl2)染毒12h,然后用碱性磷酸酶和油红O染色分别鉴定前体精原干细胞和支持细胞,观察不同细胞的形态,并用原位末端标识法(TUNEL方法)进行细胞凋亡的原位检测。[结果]2.5μmol/LCdCl2染毒未显著改变共培养中精原干细胞和支持细胞的形态。5.0μmol/L以上浓度CdCl2染毒可致支持细胞(由油红O染色确认)的结构呈现明显变化,具有浓度依赖趋势,用TUNEL法检测发现前体精原干细胞和支持细胞均发生凋亡,和对照组相比差别有统计学意义。[结论]CdCl2染毒12h可诱导支持细胞的形态改变,以及前体精原干细胞和支持细胞的凋亡。 赖纯米 张杰 吴庆 李克勇 周志俊 常秀丽关键词:支持细胞 共培养 镉 大鼠新生期暴露2,2',4,4',5,5'-六氯联苯对精子发生的影响 被引量:4 2010年 目的 探讨新生期SD大鼠暴露持续性有机污染物2,2',4,4',5,5'-六氯联苯(PCB153)对大鼠精子发生的远期效应.方法 大鼠出生当天(postnatal day O,PNDO),将所有雄性大鼠混合后,重新分为12只,窝.在出生1 d(PND1),按窝别随机分成对照组和处理组,每组24只雄性大鼠.自PND1开始连续7 d经口给予PCB153 0.025、0.250、2.500 mg/kg和等量溶剂对照玉米油.在PND8,每组随机选择16只大鼠称重和测肛殖距离后,经乙醚麻醉并处死,分离和称重睾丸后作组织学检查.剩余大鼠在PND21断奶并饲养至PND90,称重和测肛殖距离后经质量分数为10%的水合氯醛麻醉后解剖,分离并称重睾丸和附睾,其中睾丸用作组织学检查和精子头计数,附睾尾作精子计数.结果 从PND3至PND8,2.500 mg/kg剂量组体重与对照组相比明显下降,差异有统计学意义(P〈0.05);在光学显微镜和电子显微镜下观察显示,PND8睾丸组织曲精小管结构疏松,精原细胞体积增大、变性并与管内结构相脱离.随着染毒剂量的增加,PND90睾丸每日精子生成量和附睾尾精子计数与染毒剂量呈剂量-反应关系(r值分别为-0.97和-0.99,P〈0.05).0.250和2.500mg/kg剂量组的每日精子生成量分别为30x106/g睾丸和18×106/g睾丸,与对照组(36×106/g睾丸)相比,差异有统计学意义(P〈0.05);0.250和2.500 mg/kg剂量组附睾尾精子计数分别为42×107/g附睾尾和18x107/g附睾尾,明显低于对照组(51×107/g附睾尾),差异均有统计学意义(P〈0.05).结论 SD大鼠新生期暴露PCB153,可引起成年期睾丸生精功能障碍,导致每日精子生成量和附睾尾精子计数下降.新生期化学物暴露可能引起雄性大鼠生殖功能的远期损害. 肖武生 李克勇 张杰 朱鸿雁 梁继仁 常秀丽 周志俊 吴庆关键词:精子发生