国家自然科学基金(81370541)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：于建武孙丽杰施宇光张晓宇赵勇华更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
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- 沉默信息调节因子1活性受抑导致肝细胞糖代谢紊乱促进丙型肝炎病毒复制被引量：10
- 2013年
- 目的利用携带HcV复制子的Huh7．5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1（SIRTl）表达和肝细胞葡萄糖代谢的影响。方法应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧（ROs）变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）＋／还原型NDA（NADH）比值变化，应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western印迹法检测SIRTl活性、mRNA和蛋白的表达，应用放射核素法和葡萄糖氧化酶法测定肝细胞葡萄糖摄取率和糖异生，RT-PCR检测SIRTl下游调节糖代谢基因mRNA水平。计量资料比较采用t检验。结果与Huh7．5细胞相比，复制子细胞ROS水平升高（3．8±0．5比1．0±0．2，t=12．736，P〈0．01），NAD＋／NADH比值下降（0．03±0．01比0．12±0．03，t=6．971，P〈0．01），SIRTl活性（0．3±0．1比1．0±0．2，t=7．668，P〈0．01）、mRNA（0．4±0．1比1．0±0．3，t=4．648，P〈0．01）和蛋白（0．3±0．1比0．8±0．2，t=5．941，P〈0．01）水平下降。SIRT1受抑后，不仅增加胰岛素受体底物-1（IRS-1）磷酸化（0．7±0．2比0．4±0．1，t=3．286，P〈0．01），降低蛋白激酶B（Akt）磷酸化（0．3±0．1比0．6±0．2，t=3．286，P〈0．01），下调葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）基因表达（0．4±0．1比1．0±0．2，t=6．573，P〈0．01），抑制葡萄糖摄取率（每分钟计数值：4600±500比21000±4600，t=8．682，P〈0．01）；而且降低叉头蛋白转录因子01（Fox01）磷酸化（0.2±0．1比0．5±0．1，t=5．196，P〈0．01），上调磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（2．8±0．6比1．0±0．3，t=6．573，P〈0．01）和葡萄糖-6-磷酸酶（2．6±0．5比1．0±0．2，t=7．278，P〈0．01）基因表达，增加糖异生（2．5±0．5比1．0±0．2，t=5．543，P〈0．01）。结论HCV复制降低NAD＋／NADH比值，下调SIRTl活性和表达，改变其下游调节糖代谢相关基因表达，降低葡萄糖摄取能力，增
- 孙丽杰赵勇华李树臣于建武康鹏刘伟
- 关键词：肝炎病毒属凋亡抑制蛋白质类葡萄糖代谢障碍病毒复制
- 胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化被引量：3
- 2014年
- 目的研究胰岛素抵抗(IR)的慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化。方法采用高效液相色谱-质谱联用技术检测CHC患者和CHC合并IR患者外周血内源性大麻素花生四烯酸乙醇胺(AEA)和花生四烯酰甘油(2-AG)水平,应用RT-PCR及Western印迹检测肝组织大麻素受体1(CB1R)及脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)的表达,数据行t检验。结果与CHC患者相比,CHC合并IR患者外周血AEA水平升高[(6.80±1.70)pmol/mL比(3.88±0.63)pmol/mL,t=8.053,P<0.01];肝组织CB1R mRNA水平(1.7±0.4比1.0±0.2,t=4.696,P<0.01)和CB1R蛋白水平(0.8±0.2比0.4±0.1,t=5.367,P<0.01)增加;FAAH mRNA水平(0.5±0.1比1.0±0.3,t=4.743,P<0.01)和FAAH蛋白水平(0.5±0.1比0.8±0.3,t=2.846,P<0.01)下降。与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)<4的患者相比,HOMA-IR指数≥4的患者AEA水平升高[(7.53±1.85)pmol/mL比(5.56±1.40)pmol/mL(t=2.986,P<0.05)];肝组织CB1 mRNA水平(2.3±0.65比1.4±0.35,t=2.986,P<0.05)和CB1R蛋白水平(1.2±0.3比0.9±0.2,t=2.038,P<0.05)升高,FAAH mRNA水平(0.3±0.08比0.6±0.15,t=4.076,P<0.01)和FAAH蛋白水平(0.2±0.05比0.4±0.1,t=3.464,P<0.05)下降。结论随着IR程度加重,CHC患者外周血AEA水平升高;肝组织CB1R表达增加而FAAH表达减少。
- 孙丽杰万琳张晓宇施宇光周洪波陈墨洋于建武
- 关键词：慢性丙型肝炎胰岛素抵抗内源性大麻素大麻素受体1
- 丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1导致肝窦内皮细胞功能障碍被引量：1
- 2017年
- 目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝窦内皮细胞(LSEC)沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及LSEC功能的影响。方法 HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与LSEC共培养。应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR(RT-PCR)、Western印迹检测LSEC SIRT1活性、mRNA和蛋白的表达,以及LSEC脂联素受体2(AdipoR2)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、第Ⅷ相关抗原(Von Willebrand factor,vWf)、分化抗原簇31(CD31)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和CD14蛋白的表达。应用流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,检测共培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂联素、一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的水平。计量资料采用t检验。结果与LSEC和HepG2细胞共培养组相比,LSEC和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组SIRT1活性(0.3±0.1比1.0±0.3,t=5.422,P<0.01)、mRNA(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P<0.01)和蛋白(0.3±0.08比1.0±0.3,t=5.613,P<0.01)水平下降;脂联素[(3.41±0.61)比(5.82±0.87)μg/mL,t=5.556,P<0.01]分泌减少且AdipoR2蛋白(0.3±0.1比0.8±0.2,t=5.477,P<0.01)表达下降;eNOS蛋白(0.4±0.1比0.9±0.3,t=3.873,P<0.01)表达下降;vWf蛋白(0.8±0.3比0.4±0.1,t=3.098,P<0.01)、CD31蛋白(0.9±0.2比0.3±0.1,t=6.573,P<0.01)、VEGF蛋白(0.9±0.3比0.5±0.1,t=3.873,P<0.01)表达增加;CD14蛋白(0.4±0.1比0.9±0.3,t=3.873,P<0.01)表达下降。共培养上清液中NO和SOD水平下降,ET-1和MDA水平升高。结论 HCV核心蛋白下调SIRT1活性及表达,下调脂联素及受体表达,引起LSEC收缩和肝窦毛细血管化,增加氧化应激反应,导致肝窦微循环障碍。
- 孙丽杰施宇光张晓宇舒梦妮陈墨洋于建武
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝窦内皮细胞
