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重庆市自然科学基金(2011BA1002)

作品数:28 被引量:98H指数:7
相关作者:宋明汤青林王志敏许俊强孙梓健更多>>
相关机构:西南大学更多>>
发文基金:重庆市自然科学基金国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 28篇中文期刊文章

领域

  • 22篇农业科学
  • 6篇生物学

主题

  • 11篇SVP
  • 10篇甘蓝
  • 9篇酵母
  • 9篇酵母双杂交
  • 9篇FLC
  • 8篇蛋白
  • 8篇芥菜
  • 7篇结球
  • 7篇结球甘蓝
  • 7篇开花
  • 5篇花粉
  • 4篇整合子
  • 4篇基因
  • 3篇转录
  • 3篇转录因子
  • 3篇相互作用
  • 3篇FL
  • 2篇体外
  • 2篇拟南芥
  • 2篇克隆

机构

  • 26篇西南大学

作者

  • 26篇汤青林
  • 26篇宋明
  • 25篇王志敏
  • 8篇许俊强
  • 7篇刘智宇
  • 7篇孙梓健
  • 6篇江为
  • 5篇杨朴丽
  • 5篇王小佳
  • 5篇谷慧英
  • 4篇杨修勤
  • 3篇李念祖
  • 3篇丁宁
  • 2篇韦静宜
  • 2篇任雪松
  • 2篇张丹华
  • 2篇陈竹睿
  • 2篇谢婷
  • 2篇陈娇
  • 1篇丁泽琴

传媒

  • 13篇园艺学报
  • 6篇中国蔬菜
  • 3篇生物技术通报
  • 2篇作物学报
  • 2篇植物生理学报
  • 1篇Journa...
  • 1篇Hortic...

年份

  • 3篇2015
  • 6篇2014
  • 11篇2013
  • 7篇2012
  • 1篇2011
28 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
结球甘蓝花粉类钙调素蛋白基因BoCML49的克隆及表达分析被引量:12
2012年
以结球甘蓝E1为材料,提取花粉萌发前和萌发后的混合花粉总蛋白,总蛋白双向电泳后通过MALDI-TOF-MS鉴定分析差异点,根据差异点分析结果,利用同源克隆得到甘蓝BoCML49基因707bp的cDNA片段。通过对BoCML49基因的qPCR分析表明其表达量在花粉萌发前约为萌发后的2.73倍,表明BoCML49基因在花粉萌发后表达下调。通过5-Race和3-Race分别得到550bp和721bp大小cDNA片段,最终得到结球甘蓝BoCML49全长cDNA序列,开放阅读框位于125~1078bp处,加尾信号(AATAAA)位于第1222bp处。通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoCML49编码317个氨基酸残基,预测分子量为33.51kD,pI为6.93,经Smart-embl预测其含2个重要的EF-hand结构,分别位于序列第150~178和第216~244位氨基酸残基处,预测结果显示其含有7个α-螺旋和10个β-折叠结构。系统发育树表明结球甘蓝BoCML49与拟南芥AtCML49和AtCML50的亲缘关系较近。BoCML49基因的原核表达得到37.55kD的融合蛋白。
宋明许俊强孙梓健汤青林王志敏王小佳
关键词:结球甘蓝花粉
芥菜开花信号整合子的两个核心转录因子FLC和SVP相互作用的体外检测被引量:21
2011年
为了深入研究调控芥菜开花信号整合子的两个核心转录因子Flowering Locus C(FLC)和SHOTR VEGETATIVE PHASE(SVP)的作用机理和进行人工调控,以芥菜‘QJ’为材料,采用RT-PCR技术分别扩增FLC和SVP的编码序列,构建原核表达质粒pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP,转化宿主菌大肠杆菌BL21,通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。利用免疫共沉淀原理及pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP融合蛋白序列中的6×His标签能与Ni+结合的特点,对芥菜FLC与SVP的相互作用进行SDS-PAGE检测。结果表明:FLC与SVP能在体外相互作用并形成复合体,为深入分析FLC与SVP间的作用机理以及探讨其与下游开花信号整合子元件的相互作用提供了理论和技术基础。
汤青林许俊强宋明王志敏
关键词:芥菜FLCSVP相互作用
芥菜开花整合子SOC1启动子的克隆及其与FLC、SVP蛋白互作的研究被引量:3
2015年
为了深入研究芥菜开花整合子SOC1基因的表达调控机制,利用染色体步移法从芥菜‘QJ’中克隆了SOC1编码区上游782 bp的启动子,并构建SOC1基因启动子的酵母表达载体p Ab Ai-SOC1,与蛋白表达载体p GADT7-FLC、p GADT7-SVP共转化酵母Y1HGold菌株。酵母单杂交表明:芥菜FLC和SVP蛋白均能与SOC1的启动子相互作用。进一步分析发现:SOC1启动子含3个CAr G-box表达调控基序。分别亚克隆这3个基因片段(SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3),并再次构建酵母重组质粒p Ab Ai-SOC1-1、pA b Ai-SOC1-2和p Ab Ai-SOC1-3,与p GADT7-FLC、p GADT7-SVP分别融合到Y1HGold菌株。融合菌株均能在相应SD/-Leu/Ab A培养基上生长,说明SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3都能被芥菜FLC、SVP蛋白识别并结合。再次构建SOC1-1、SOC1-2、SOC1-3的CAr G-box删除突变体及A-T互换突变体,则均不能与FLC、SVP蛋白互作。由此说明:SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3的3个CAr G-box基序确实能特异性识别FLC、SVP,发生DNA—蛋白相互作用。这为利用启动子调控SOC1基因的转录表达等深入研究奠定了理论基础。
陈娇赵夏云鲜登宇马关鹏谢婷王志敏宋明汤青林
关键词:芥菜FLCSVP
结球甘蓝花粉蛋白延伸因子基因的克隆及其序列分析被引量:2
2013年
以结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)E1花粉为试材,对萌发前后的花粉总蛋白进行双向电泳及差异蛋白质谱分析,发现延伸因子BoEF-Tu蛋白在花粉萌发后较萌发前表达上调。利用同源克隆得到甘蓝BoEF-Tu基因的全长cDNA序列,其长度为1 728 bp,具有一个完整开放阅读框(ORF),位于112~1 473 bp处,编码453个氨基酸残基,预测分子量为49.17 kD,等电点为6.52。生物信息学分析表明:BoEF-Tu蛋白含有9个α–螺旋结构,18个β–折叠结构,不含信号肽和跨膜区,在106~121位氨基酸残基处有1个GTP结合区域(DKAPEEKKRGITIATA)。氨基酸同源性分析表明,BoEF-Tu与拟南芥EF-TuM同源性较高,达到93%;系统进化分析表明,BoEF-Tu与拟南芥EF-Tu的亲缘关系最近。
王志敏牛义许俊强孙梓健丁泽琴杨修勤汤青林宋明
关键词:结球甘蓝花粉
甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用研究被引量:6
2013年
为研究甘蓝花粉管钙感应蛋白CaM与SRK相互作用的分子机理及其可能相互作用的区域,从自交不亲和甘蓝材料‘E1’中分别克隆得到CaM12基因450 bp及S位点受体激酶(SRK7)基因全长序列2 118 bp,并亚克隆得到SRK胞外域(eSRK)和胞内激酶域(iSRK),构建原核表达载体pGEX-CaM12、pCold-eSRK和pCold-iSRK,转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达,表达产物纯化后进行体外相互作用,结果表明CaM12能够与SRK7进行相互作用,但作用区域是iSRK7而不是eSRK7。为进一步验证其相互作用,本研究利用酵母双杂交系统,构建pGBKT7-CaM12、pGADT7-eSRK7、pGADT7-iSRK7和pGADT7-SRK7酵母表达载体,转化相应酵母Y2HGold和Y187感受态细胞后未出现自激活和毒性现象,相互作用结果与原核表达检测一致。同时将CaM12的3个EF-hands结构域突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-与iSRK7分别构建酵母表达载体pGADT7-CAM12-2-、pGADT7-CAM12-23-、pGADT7-CAM12-234-,检测其相互作用。结果表明CaM12 EF-hands突变体CaM12-2-、CaM12-23-和CaM12-234-在酵母双杂交系统中均不能与iSRK7片段发生相互作用,说明CaM12的EF-hands结构域突变后失去结合Ca2+能力而不能与iSRK7相互作用。该研究可为自交不亲和机理提供新的参考依据。
许俊强孙梓健宋明汤青林王志敏王小佳
关键词:结球甘蓝酵母双杂交
Site-Specifc Gene Targeting Using Transcription Activator-Like Effector(TALE)-Based Nuclease in Brassica oleracea被引量:3
2013年
Site-specific recognition modules with DNA nuclease have tremendous potential as molecular tools for genome targeting. The type III transcription activator-like effectors (TALEs) contain a DNA binding domain consisting of tandem repeats that can be engineered to bind user-defined specific DNA sequences. We demonstrated that customized TALE-based nucleases (TALENs), constructed using a method called "unit assembly", specifically target the endogenous FRIGIDA gene in Brassica oleracea L. var. capitata L. The results indicate that the TALENs bound to the target site and cleaved double-strand DNA in vitro and in vivo, whereas the effector binding elements have a 23 bp spacer. The T7 endonuclease I assay and sequencing data show that TALENs made double-strand breaks, which were repaired by a non- homologous end-joining pathway within the target sequence. These data show the feasibility of applying customized TALENs to target and modify the genome with deletions in those organisms that are still in lacking gene target methods to provide germplasms in breeding improvement.
Zijian SunNianzu LiGuodong HuangJunqiang XuYu PanZhimin WangQinglin TangMing SongXiaojia Wang
关键词:FRIGIDA
开花负调因子芥菜BjSVP与甘蓝BoFLC的异源互作研究
2013年
为阐明开花负调因子BjSVP(源于种子春化型作物芥菜)与BoFLC(源于绿体春化作物甘蓝)异源聚合后在开花调控路径中的互作机制,从芥菜酵母重组质粒pGADT7.SjSVP分别亚克隆含MI、MIK、K、IKC、KC、IK、IKlLlK2L2、IKlLlK2、IKlLl、IKl、I结构域的11个SVP截短体(sjsve,al~BjSVPAll),构建猎物质粒pGADT7—13jSVPAl~pGADT7一BjSVPAll并转化酵母Y187菌;从甘蓝中克隆了BoFLC和BoFLCzq基因,构建诱饵质粒pGBKT7.BoFLC、pGBKT7.BoFLCzq并转化酵母Y2HGold菌。酵母双杂交表明:芥菜BjSVP能与甘蓝BoFLC相互作用,在QDO/X/A培养基上长出蓝色菌落,激活酵母报告基因AURl-C、HIS3、ADE2、MELl。截短体BjSVPA2~BjSVPA5也能与BoFLC相互作用,而BjSVPA7~BiSVPAll不能与BoFLC互作。由此表明BjSVP完整的K域(BjSVP3)可独立作用于BoFLC,但K域亚域(K1、K2、K3)或者连接区(L1、L2)缺失突变后不能介导该作用。作用强度分析表明:BjSVP的I域能增强该蛋白互作,但M域和C域可能会干扰该作用;芥菜BiFLC被甘蓝BoFLC或BoFLCzq替换后,可明显增加作用强度;甘蓝FLC的I域第20位、K域第65位和C域第32位氨基酸的变异很可能与作用强度相关。
汤青林刘智宇杨朴丽宋明王志敏
关键词:芥菜甘蓝FLCSVP酵母双杂交
结球甘蓝花粉膜联蛋白基因的克隆及其表达分析被引量:2
2012年
对结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)花粉总蛋白双向电泳及差异蛋白质谱分析,发现膜联蛋白在花粉萌发后较萌发前表达下调。通过同源扩增和RACE等方法首次在结球甘蓝花粉中扩增得到BoAnnexin2基因的cDNA序列,该基因cDNA全长1157bp,开放阅读框为951bp,编码316个氨基酸残基,预测分子量为36.02kD,等电点6.33。BoAnnexin2编码蛋白C端有4个膜联蛋白重复序列,共2个Ⅱ型钙结合区域,在第4个钙结合区位点包含GXXXGXS(T)/DXXG基序。实时荧光定量试验表明,BoAnnexin2在甘蓝成熟未萌发花粉中的表达量是萌发45min后表达量的8倍,表明BoAnnexin2在甘蓝花粉萌发起始阶段起到重要调控作用。
孙梓健许俊强宋明韦静宜汤青林王志敏王小佳
关键词:结球甘蓝花粉膜联蛋白
芥菜开花调控蛋白SVP与FLC酵母表达载体的构建及其相互作用研究被引量:14
2012年
为深入研究芥菜开花信号整合子的两个核心调节因子SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP)与FLOWERING LOCUS C(FLC)相互作用的分子机理,通过PCR扩增,从芥菜材料‘QJ’中分别克隆含EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切位点的SVP和FLC编码区全长,并利用酵母双杂交体系,将FLC与GAL4报告基因DNA激活域融合(pGADT7FLC),SVP与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SVP)。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活和毒性现象。融合的二倍体酵母(pGADT7FLC×pGBKT7SVP)能在选择性固体培养基QDO/X/A(SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色。将诱饵质粒(pGBKT7SVP)与猎物质粒(pGADT7FLC)载体互换(pGADT7SVP、pGBKT7FLC),再次转化酵母后仍能融合成二倍体酵母(pGADT7SVP×pGBKT7FLC),并同时激活报告基因AUR1-C、HIS3、ADE2、MEL1,由此表明SVP与FLC蛋白能够相互结合。
汤青林李念祖丁宁陈竹睿宋明王志敏
关键词:芥菜SVPFLC酵母双杂交
甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP体外表达及相互作用被引量:7
2013年
甘蓝抽薹开花抑制因子FLC与SVP可能存在相互作用,从而调节开花时间。为进一步的验证该相互作用,以甘蓝‘ZQ’为材料,扩增了594 bp的FLC cDNA和726 bp的SVP cDNA序列,它们分别编码197和241个氨基酸,且均属MIKC型蛋白。NCBI比对发现FLC与BoFLC3同源性高达98%,SVP与BoSVP-a同源性高达99%。将甘蓝FLC和SVP分别与原核表达载体pET43.1a融合,构建重组质粒pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP,并转化宿主菌大肠杆菌BL21,均能够在体外表达目的蛋白。利用免疫共沉淀的原理及pET43.1a-FLC、pET43.1a-SVP融合蛋白序列中的6×His标签能与Ni+结合的特点,结合SDSPAGE,检测到体外表达蛋白FLC与SVP能相互作用并形成复合体,这为深入研究FLC与SVP互作机理及探讨其与抽薹开花因子的相互作用提供了理论依据和技术基础。
杨朴丽张丹华刘智宇许俊强王志敏汤青林宋明
关键词:甘蓝FLCSVP体外表达蛋白质相互作用
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