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腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子对人骨关节炎软骨细胞的作用被引量：3: 2010年; 目的:探讨腺病毒介导的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人骨关节炎(OA)软骨细胞的转染及其作用。方法:人OA软骨细胞分为3组:OA对照组、绿色荧光蛋白(EGFP)对照组及bFGF转染组。采用含bFGF的腺病毒载体转染人OA软骨细胞,48 h后通过流式细胞术分析腺病毒转染软骨细胞的效率,绘制转染效率曲线。6 d后检测培养基中bFGF的浓度及软骨细胞增殖;观察软骨细胞蛋白多糖及Ⅱ型胶原的表达。结果:腺病毒介导的bFGF可高效转染人OA软骨细胞并在细胞外表达。与OA对照组相比,bFGF转染后可明显促进软骨细胞的增殖(P<0.05);同时增加了软骨细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原的生物合成(P<0.05)。结论:腺病毒介导的bFGF可促进OA软骨细增殖,增强细胞基质的合成,对软骨细胞表型的维持具有重要作用。; 陈彪秦俊汪晖陈廖斌; 关键词：骨关节炎软骨细胞腺病毒碱性成纤维细胞生长因子

复合基质细胞衍生因子-1β、转化生长因子-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶的制备及其缓释性能被引量：5: 2010年; 目的观察新型温敏性壳聚糖水凝胶的温敏性及缓释性能.方法分别用0.005%～0.100%京尼平0.5 ml与2%壳聚糖5 ml交联10 min,然后滴加56%甘油磷酸钠0.55 ml,制备新型温敏性壳聚糖水凝胶并研究其温敏性,用该水凝胶负载基质细胞衍生因子-1β（SDF-1β）、转化生长因子-β1（TGF-β1）并研究最大负载量及缓释特性.结果具有最佳温敏性能水凝胶的配比为2%壳聚糖5 ml、0.03%京尼平0.5 ml、56%甘油磷酸钠0.55 ml,其负载400μg/LSDF-1β、200μg/L TGF-β1的最大负载量为0.5 ml,并获得了体外释放曲线.结论通过京尼平的交联可得到在37℃下快速凝胶化的壳聚糖水凝胶,该凝胶具有温敏性,形成的凝胶能缓慢释放SDF-1β、TGF-β1.; 张弩陈廖斌; 关键词：温敏性水凝胶京尼平药物控释

复合基质细胞衍生因子-1β、转化生长因子-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶修复兔关节软骨缺损被引量：3: 2010年; 目的探讨复合基质细胞衍生因子（SDF）-1β、转化生长因子（TGF）-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶结合软骨下骨钻孔修复兔关节软骨缺损的可行性.方法依照软骨缺损处理方法的不同将48侧股骨髁随机均分为3组：（1）凝胶组：软骨下骨钻孔＋复合SDF-1β、TGF-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶充填软骨缺损（2）钻孔组：单纯软骨下骨钻孔（3）对照组：不作处理.术后4、8、12周取材观察其大体、光镜、透射电镜、免疫组织化学情况.结果除对照组仅有纤维组织修复外,其余2组均有不同程度的软骨修复,但结合组的修复在组织细胞形态、超微结构、Ⅱ型胶原含量等方面均明显优于钻孔组,组织学评分两组间差异有统计学意义（P＜0.05）.结论复合SDF-1β、TGF-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶结合软骨下骨钻孔能有效修复兔膝关节软骨的全层缺损.; 张弩陈廖斌; 关键词：关节软骨缺损温敏性水凝胶转化生长因子-Β1

碱性成纤维细胞生长因子及相关细胞因子转染对人骨关节炎软骨细胞的作用被引量：1: 2010年; 目的探讨腺病毒介导的人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）单独及与白细胞介素-1受体拮抗蛋白（IL-1Ra）和（或）胰岛素样生长因子（IGF）-1同转染人骨关节炎（OA）软骨细胞后对软骨细胞的影响。方法采用单独编码人bFGF的重组腺病毒载体或多重组合的重组腺病毒载体转染单层培养的人OA软骨细胞。6d后分别检测培养上清液中目的基因表达和糖胺聚糖（GAG）含量。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法及流式细胞术分析软骨细胞的增殖及凋亡。甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察软骨细胞基质的合成。免疫印迹法检测Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶（MMP）-3及其抑制剂-1（TIMP-1）的表达。采用单因素方差分析，并进行组间两两比较。结果各基因转染后，细胞上清液目的基因表达与OA对照组相比明显增高（P〈0．05）。bFGF单独转染可促进软骨细胞增殖，增加Ⅱ型胶原和蛋白多糖的合成（P〈0．05）。与bFGF单独转染相比，联合IL-1Ra和（或）IGF-1共同转染后，可降低软骨细胞的凋亡率[分别为：（26．1±1．6）％、（19．4±1．0）％、（18．4±1．1）％、（13．9±1．8）％，P〈0．05]，进一步增加了软骨基质的生物合成（P〈0．05）。同时，抑制了MMP-3的表达，增加了TIMP-1的表达。结论腺病毒介导的bFGF转染人OA软骨细胞可促进细胞增殖，增加基质的合成。与IL—IRa和IGF-1共转染后可发挥协同作用，进一步增加基质合成；同时，抑制了基质的降解。; 陈彪陈廖斌秦俊Jaques Magdalou汪晖; 关键词：骨关节炎软骨细胞成纤维细胞生长因子2 细胞因子类

人骨关节炎软骨细胞的体外培养被引量：12: 2007年; 目的:对人骨关节炎软骨细胞的分离、消化和培养进行初步研究,并就其生物学活性同人正常软骨细胞进行比较和评价。方法:以含血清培养液配制的0.05%和0.2%Ⅱ型胶原酶顺序消化关节软骨分离细胞,检测细胞存活率;体外传代培养观察细胞形态、生长、增殖和Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚集体等的变化,以及用流式细胞仪检测有或无IL-1β诱导的细胞凋亡和周期变化。结果:①消化后骨关节炎组原代细胞活力平均为82%,少于正常组的95%(P<0.01)。②MTT检测骨关节炎组细胞增殖低于正常组(P<0.01),Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝O异染反应均较弱,传至第4代软骨细胞生物学特性基本消失。③骨关节炎组细胞凋亡率为6.9%,而正常组为0.5%,IL-1β诱导后凋亡率增加了27.4%,正常组只有12.7%。结论:酶二步消化法具有较高细胞存活率、低污染率和操作简便等特点,分离培养的骨关节炎软骨细胞符合人患骨关节炎时软骨细胞退变的表现,能很好的为骨关节炎细胞水平的研究提供最佳实验对象。; 秦俊陈廖斌汪晖Magdalou Jaques; 关键词：骨关节炎软骨细胞细胞分离细胞培养

黄芪多糖对体外培养大鼠软骨细胞内糖胺多糖合成的影响及其机制被引量：5: 2008年; 目的:研究黄芪多糖对大鼠退变软骨细胞糖胺多糖(GAG)合成的影响。方法:分离大鼠关节软骨细胞传代培养并加入IL-1β造模,分别将100,10,1,0.1 mg/L的黄芪多糖作用于该软骨细胞,以4.5 mg/L的硫酸氨基葡萄糖作为阳性对照。其后检测细胞增殖、细胞内GAG含量、细胞内葡萄糖醛酸转移酶Ⅰ(GlcAT-1)mRNA含量和透射电镜观察细胞形态学改变。结果:各浓度的黄芪多糖均对大鼠软骨细胞增殖率无影响。100 mg/L的黄芪多糖可以增加软骨细胞内GAG的合成(P<0.01);1,10,100 mg/L的黄芪多糖能够增加GlcAT-1 mRNA的表达。结论:黄芪多糖能逆转IL-1β对体外培养的大鼠软骨细胞GAG合成的抑制作用,其主要机制可能与促进GlcAT-1的表达有关。; 谭杨陈廖斌汪晖胡爱心谷锐; 关键词：黄芪多糖软骨细胞糖胺多糖

黄芪多糖对大鼠骨关节炎的影响被引量：27: 2008年; 目的:探讨黄芪多糖对大鼠骨关节炎(OA)的影响。方法:4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,1周后50只大鼠分成5组:正常组、模型组、0.10,0.25,0.50 g/L的黄芪多糖治疗组,分组后即开始用不同浓度的黄芪多糖关节腔注射治疗,每3 d 1次,每次双膝各注射0.2 ml,对照组注射生理盐水。6周后处死动物,抽取血液、取关节滑膜检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),切取关节,进行大体及组织学观察,用免疫组织化学方法检测基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)在关节软骨中的表达。结果:黄芪多糖在高浓度可明显修复关节软骨的退变(P<0.01),降低关节滑膜、血清的MDA水平(均P<0.01),增加SOD活性(P<0.01);在低浓度时对关节软骨的修复作用并不明显(P>0.05),也不能显著降低关节滑膜、血清的MDA水平(均P>0.05)和增加SOD活性(P>0.05)。黄芪多糖可以抑制MMP-3在关节软骨中的表达(P<0.01),黄芪多糖在高浓度时可明显增加关节软骨中葡糖氨基聚糖(GAG)含量(P<0.01)。结论:黄芪多糖关节腔注射治疗大鼠OA可促进退变软骨的修复。; 胡爱心陈廖斌汪晖谷锐谭杨; 关键词：骨关节炎黄芪多糖

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国家自然科学基金(30672141)

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