国家自然科学基金(81101071)
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- 基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系制备
- 2013年
- 目的构建含早期生长应答因子1(Egr1)辐射敏感启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)基因重组杆状病毒,为进一步延长核素在细胞中的滞留时间,提高hNIS介导的恶性肿瘤放射性核素基因靶向治疗疗效提供理论基础。方法空载体pFB取自质粒pFB-CMV-EGFP,Egr1启动子取自质粒PGL3-Egr1-luc,hNIS取自质粒pcDNA3.1-CMV-hNIS,构建重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-Hnis;同时构建含CMV启动子的质粒pFB-CMV-hNIS作为阳性对照,并将杆状病毒空载体质粒pFB-0作为阴性对照。随后制备各组杆状病毒,扩增收集重组杆状病毒并进行滴度测定。为进一步鉴定病毒功能,一方面通过体外感染U87脑胶质瘤细胞并采用131I刺激,通过免疫荧光检测131I刺激后的hNIS蛋白表达;另一方面通过摄碘实验进一步验证所表达的hNIS蛋白的摄碘功能和特性。结果成功构建重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-hNIS和pFB-CMV-hNIS;转座成功并提取了重组Bacmid;重组Bacmid转染Sf 9细胞后扩增收集的重组杆状病毒滴度可以达到1×1010pfu/mL。体外感染U87细胞后,免疫荧光检测表明131I刺激后可增加hNIS的表达,感染细胞表达的hNIS蛋白位于细胞膜上,且具有摄碘的功能。结论成功构建了重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-hNIS及pFB-CMV-hNIS,获得高滴度的重组杆状病毒Bac-Egr1-hNIS、Bac-CMV-hNIS和Bac-0并得到验证;建立了基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系,为进一步提高核素靶向治疗疗效奠定了重要的理论基础。
- 郭睿李彪
- 关键词：重组杆状病毒正反馈
