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国家自然科学基金(30901749)

作品数:6 被引量:18H指数:3
相关作者:叶飞雷霆万锋郭东生吴俊更多>>
相关机构:华中科技大学更多>>
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相关领域:医药卫生生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生
  • 2篇生物学
  • 1篇农业科学

主题

  • 5篇细胞
  • 3篇胶质
  • 3篇胶质瘤
  • 3篇CHK2
  • 3篇CHK1
  • 2篇周期
  • 2篇细胞周期
  • 2篇细胞周期检测...
  • 2篇细胞周期检测...
  • 2篇慢病毒
  • 2篇激酶
  • 2篇干细胞
  • 2篇CD133
  • 1篇凋亡
  • 1篇短发夹RNA
  • 1篇神经干
  • 1篇神经干细胞
  • 1篇神经干细胞迁...
  • 1篇顺铂
  • 1篇顺铂诱导

机构

  • 5篇华中科技大学

作者

  • 5篇叶飞
  • 4篇雷霆
  • 2篇郭东生
  • 2篇赖国政
  • 2篇万锋
  • 2篇吴俊
  • 1篇张所军
  • 1篇韩林
  • 1篇胡峰
  • 1篇谢蕊繁
  • 1篇曾令成
  • 1篇王宝峰
  • 1篇谢大兴

传媒

  • 2篇中华实验外科...
  • 1篇中华肿瘤杂志
  • 1篇中国临床神经...
  • 1篇Chines...
  • 1篇临床神经外科...

年份

  • 3篇2012
  • 2篇2011
  • 1篇2009
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
特异性shRNA干扰人慢病毒载体抑制U251细胞株Chk1、Chk2基因的表达被引量:2
2012年
目的构建针对细胞周期检测点激酶1和2(Chk1和Chk2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,包装成慢病毒,建立稳定转染的细胞株,为探讨抑制Chk1和Chk2基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的Chk1和Chk2基因核苷酸序列,选择设计2条能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,命名为Chk1-shRNA和Chk2-shRNA,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为blank-shRNA。并与pLKO.1-TRC质粒载体连接,转化感受态大肠杆菌,挑取阳性克隆,抽取重组质粒,使用限制性内切酶EcoRⅠ、NcoⅠ酶切电泳,DNA测序鉴定,包装慢病毒。3组重组表达慢病毒载体转染胶质瘤细胞系U251,用嘌呤霉素筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。逆转录酶-聚合酶连反应(RT-PCR)和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测Chk1和Chk2的表达。结果重组质粒成功转化感受态大肠杆菌,经酶切琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明寡核苷酸成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全正确。嘌呤霉素对U251细胞的筛选浓度为4ug/ml,筛选出稳定转染三种质粒的U251细胞,Chk1-shRNA和Chk2-shRNA组细胞各自Chk1和Chk2的mRNA和蛋白表达水平明显低于blank-shRNA组。结论成功构建了针对Chk1和Chk2基因的shRNA慢病毒表达载体,转染后可抑制ChK1和Chk2基因的表达,为进一步研究Chk1和Chk2基因在脑胶质瘤细胞中的作用奠定了基础。
吴俊赖国政叶飞雷霆
关键词:CHK1CHK2短发夹RNA
胶质瘤干细胞趋化神经干细胞迁移及其机制研究被引量:6
2011年
目的观察神经干细胞(NSC)向胶质瘤干细胞(GSC)及其分化细胞的迁移能力,探讨其趋化机制。方法干细胞条件培养U251和3例原代胶质瘤干细胞,以流式细胞术和Westernblot对其鉴定;Transwell小室法检测GSC和其分化细胞条件培养液(CM)对NSC迁移的趋化能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测CM中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的分泌水平,并以表皮生长因子(EGF)、bFGF为对照分析CM对NSC的化学趋化作用;进一步以Dio和Dil分别标记NSC和GSC,体外混合培养观察NSC向GSC的迁移、以及对肿瘤干细胞球生长的影响。结果干细胞培养条件下的胶质瘤干细胞球,高表达干细胞标志物Nestin和/或CD133(11.02%-33.55%);分化后干细胞标志物表达下降,分化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达增加(P〈0.05);GSC与其分化细胞比较,分泌高水平的趋化因子VEGF和bFGF(P〈0.05),并对NSC有高度趋化能力;体外混合接触培养也显示NSC向肿瘤干细胞球的迁移和包绕,并且能够显著抑制肿瘤干细胞球的生长(P〈0.05)。结论GSC体外可趋化NSC向其迁移,其趋化作用较分化的肿瘤细胞更为显著,并且与其分泌高水平的生长因子有关;向肿瘤干细胞球迁移的NSC可抑制其体外生长。
张所军胡峰谢蕊繁王宝峰叶飞万锋郭东生雷霆
关键词:神经干细胞胶质瘤干细胞迁移趋化因子
灭活细胞周期检测点激酶基因对顺铂诱导肺癌细胞凋亡的影响被引量:1
2009年
目的观察顺铂(DDP)作用下肺癌A549细胞系的细胞周期和凋亡的动力学特点,以及灭活细胞周期检测点激酶1(Chk1)和细胞周期检测点激酶2(Chk2)基因对DDP诱导的肺癌细胞凋亡的影响。方法优化转染条件后,将肺癌A549细胞分为8组进行转染,分别为正常组(未经任何处理的A549细胞)、对照组(A549细胞接受10μmol/L的DDP作用12h)、转染Chk1正义寡核苷酸链(sODN)组、转染Chk1反义寡核苷酸链(AsODN)组、转染Chk2sODN组、转染Chk2AsODN组、联合转染Chk1和Chk2sODN组以及联合转染Chk1和Chk2AsODN组,其中后6组转染24h后再以10μmol/L的DDP处理12h。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,检测转染Chk1或Chk2sODN、AsODN后,A549细胞中Chk1或Chk2mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞仪Annexin V-FITC法和Sub-G1法,检测转染Chk1和(或)Chk2 sODN、AsODN后,DDP作用下A549细胞的细胞周期和凋亡变化。结果10μmol/L的DDP作用12h后,非同步化处理的A549细胞出现了明显的S期阻滞现象。转染24h后,Chk1或Chk2AsODN可明显抑制A549细胞中Chk1mRNA和蛋白或Chk2 mRNA和蛋白的表达。与单独转染Chk1或Chk2sODN组相比,单独转染Chk1或Chk2 AsODN组DDP诱导下A549细胞的凋亡率约提高了1—2倍(P〈0.05);但联合转染Chk1和Chk2 AsODN组与单独转染Chk1 AsODN或Chk2 AsODN组相比,A549细胞凋亡率的差异无统计学意义(P=0.521和P=0.339)。结论灭活Chk1和Chk2基因引起化疗增敏的机制可能是通过解除S期阻滞这种肿瘤细胞的自我保护机制实现的,Chk1和Chk2基因可作为肺癌化疗药物增敏治疗的有效靶点。
叶飞谢大兴卢运萍高庆蕾
关键词:化学疗法CHK1CHK2细胞周期凋亡
慢病毒干扰Chk1、Chk2表达对脑胶质瘤系U87细胞的放射治疗敏感性的影响被引量:1
2012年
目的探讨慢病毒干扰细胞周期检测点激酶1、2(Chk1、Chk2)基因表达对脑胶质瘤细胞放射治疗敏感性的影响。方法根据基因库数据提供的Chk1及Chk2基因核苷酸序列,各选择设计一条适合转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,构建慢病毒并转染胶质瘤细胞系U87细胞进行传代扩增。用实时PCR和免疫印迹法分别在mRNA和蛋白水平上测定Chk1及Chk2的表达。转染后U87胶质瘤细胞经X线照射48h后,进行细胞周期和凋亡的检测。结果成功包装慢病毒后转染U87细胞,实时PCR检测Chk1和Chk2的干扰效应,其抑制率分别为73.74%和85.12%。细胞周期检测显示照射组和照射干扰Chk2组的细胞大部分阻滞在G2/M期;照射干扰Chk1组细胞放射治疗后的凋亡率较对照组和干扰Chk2组细胞明显增高(P<0.05)。结论慢病毒转染细胞可以有效的将干扰Chk1和干扰Chk2基因带到U87细胞并发挥作用,干扰Chk1和Chk2可以增加U87细胞对放射治疗的敏感性,为胶质瘤的治疗提供了新的治疗途径。
吴俊赖国政叶飞雷霆
关键词:胶质瘤U87细胞细胞周期检测点激酶
Comparative study on the stem cell phenotypes of C6 cells under different culture conditions被引量:3
2011年
Background Glioma stem cell (GSC) hypothesis posits that a subpopulation of cells within gliomas have true clonogenic and tumorigenic potential. Significantly, a more controversial correlate to GSC is that cells in different culture conditions might display distinct stem cell properties. Considering these possibilities, we applied an approach comparing stem cell characteristics of C6 glioma cells under different culture conditions.Methods C6 cells were cultured under three different growth conditions, i.e., adherent growth in conventional 10% serum medium, non-adherent spheres growth in serum-free medium, as well as adherent growth on laminin-coated flask in serum-free medium. Growth characteristics were detected contrastively through neurosphere formation assay and cell cycle analysis. Markers were determined by immunofluorescence, relative-quantitative reverse transcription (RT)-PCR,Western blotting and flow cytometry. Side population cells were analyzed via flow cytometry. Tumor models were detected by magnetic resonance imaging and hematoxylin & eosin staining. Data analyses were performed with SPSS software (17.0).Results C6 cells (C6-Adh, C6-SC-Sph and C6-SC-Adh) showed distinctive growth patterns and proliferation capacity.Compared to suspending C6-SC-Sph, adherent C6-Adh and C6-SC-Adh displayed higher growth ratio. C6-SC-Sph and C6-SC-Adh showed enhanced capability of neurosphere formation and self-renewal. High side population ratio was detected in C6-SC-Sph and C6-SC-Adh. CD133 was not detected in all three kinds of cells. Conversely, Nestin and β-Ⅲ-tubulin were demonstrated positive, nonetheless with no statistical significance (P 〉0.05). Interestingly, lower expression of glial fibrillary acidic protein was demonstrated in C6-SC-Sph and C6-SC-Adh. C6-Adh, C6-SC-Sph and C6-SC-Adh were all displayed in situ oncogenicity, while statistical difference of survival time was not confirmed.Conclusions C6 glioma cell line is endowed with some GSC phenotypes that can be moderately enr
ZHANG Suo-jun YE Fei XIE Rui-fan HU Feng WANG Bao-feng WAN Feng GUO Dong-sheng LEI Ting
关键词:NEUROSPHERECD133LAMININ
体外培养脑胶质瘤细胞株中CD133表达的研究被引量:6
2012年
目的探讨与脑胶质瘤干细胞相关的CD133表型。方法将无血清培养中的胶质瘤干细胞与含血清贴壁培养的胶质瘤细胞中CD133的表达进行对比。逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR检测信使RNA(mRNA)水平的表达,流式细胞术及免疫荧光染色法检测蛋白水平的表达,激光共聚焦扫描成像进行CDl33蛋白的亚细胞定位。结果所有胶质瘤细胞中均存在CD133mRNA及蛋白的表达。AC133抗体所识别的糖基化CD133-AC133分子仅分布于无血清培养中的胶质瘤干细胞,阳性细胞比例为31.8%~99.9%,且定位于此类细胞膜表面。AC133阴性的胶质瘤干细胞及含血清贴壁培养胶质瘤细胞中CD133蛋白的表达位于细胞内,阳性细胞比例约为22.2%~88.6%,其亚细胞定位为内质网和/或高尔基体。结论细胞表面AC133分子,而非CD133mRNA及细胞内CD133蛋白标记了一类胶质瘤干细胞亚群,但无血清培养环境下也存在AC133呈阴性表达的胶质瘤干细胞亚群。
曾令成万锋叶飞韩林郭东生雷霆
关键词:CD133AC133胶质瘤脑肿瘤干细胞
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