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国家自然科学基金(20475013): 作品数：7 被引量：7H指数：2; 相关作者：刘德龙孙大业白娟郭慧芳王晓静更多>>; 相关机构：河北师范大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：理学生物学农业科学更多>>

钙调素与重金属Pb^(2+)结合反应的方波极谱与循环伏安法研究被引量：3: 2009年; 采用方波极谱法研究了重金属Pb2+与钙调素(CaM)的结合反应,直接检测到Pb2+-CaM配合物的存在,并进一步利用循环伏安法研究了Pb2+-CaM的电极反应.在pH=6.5时,用方波极谱法在Pb2+-CaM体系中检测出2个还原峰,峰电位分别为-0.44^-0.47 V和-0.73^-0.77 V,说明在Pb2+-CaM体系中铅有2种存在形式,-0.44^-0.47 V的还原峰对应于游离态Pb2+,电位更负的还原峰对应于配合物[Pb2+-CaM].2个还原峰的峰电流均随着cPb2+/cCaM比值增大而增大;至cPb2+/cCaM≥10后,配合物[Pb2+-CaM]的峰电流基本不再变化,而游离态Pb2+的峰电流则继续增大.利用极谱滴定曲线的拐点可判断出Pb2+在CaM中有10个结合位点.进一步的测量结果表明,循环伏安曲线出现游离态Pb2+的氧化峰和还原峰,而络合态的[Pb2+-CaM]只有其还原峰,反向电压扫描时不出现阳极波,即没有相对应的氧化峰出现.; 刘德龙吴彦环郭慧芳白娟孙大业; 关键词：钙调素结合位点方波极谱法循环伏安法

用绿色荧光蛋白为传能对的供体光漂白法测定FRET效率: ＜正＞生物分子通过组装成分子机器而在细胞中发挥功能。鉴定和表征蛋白质相互作用能够提供生命运动的分子水平直观图像。分子问FRET技术是实时探测蛋白质相互作用的有效方法。目前测量FRET的技术主要有:双通道比值法、三组滤光片...; 刘德龙周晓娟郭慧芳白娟孙大业; 文献传递

植物胞外钙调素与拮抗剂W7-Agarose结合作用的荧光光谱法研究: 2006年; W7-agarose是常用的细胞外CaM功能的拮抗剂，本实验采用荧光光谱法研究了水溶液中钙调素拮抗剂W7-agarose与植物胞外钙调素的相互结合反应。W7-agarose是一种将W7-共价连接到颗粒型agamse（琼脂糖）的粒子。W7-agarose颗粒较大且容易沉淀，静置5min后，溶液中的荧光强度完全由游离的CaM产生。在溶液中加入W7-agamse后，溶液中一部分CaM与其结合后沉降至荧光比色皿底部，导致溶液中CaM的荧光强度下降。由此可以确定溶液中游离CaM的浓度。根据公式lg{[Q]t（F0-F）／F0}=nlg{[Q]tF/F0}＋lgnK[B]t，从而计算出配位体系的结合常数和配比。研究表明：二者以摩尔比1：1结合，其平衡常数为4．9×10^5。由此进一步计算了W7-agarose对胞外钙调素的拮抗率，在拮抗剂W7-agarose浓度达到15～20μmol／L时，拮抗率可达到90％以上，与文献报道的生物学体内实验结果一致，从分子水平上解释了W7-agarose与CaM的结合作用。; 刘德龙王晓静白娟孙大业; 关键词：钙调素荧光

荧光蛋白MiCy、Citrine作为FRET传能对的研究: 2009年; 探索了2种新型荧光蛋白MiCy、Citrine作为荧光共振能量转移技术(FRET)传能对的可能性。首先通过基因工程方法表达纯化了这2种蛋白,并对其进行了光谱学研究,由于MiCy具有高的量子产率,且MiCy与Citrine的光谱重叠积分J较大,计算表明MiCy与Citrine的Frster距离为R0=5.81nm,比CFP-YFP的大(R0=5nm)。进一步以Ni2+-NTA-agarose为FRET模型,结果表明:无论在荧光分光光度计还是在激光共聚焦显微镜上,都可以明显地检测到MiCy与Citrine的能量转移。由于二者较文献报道的其它FRET对具有更大的Frster距离,而且更适合以激光作为激发光进行测量,因此该FRET对应有更加广泛的应用前景。; 刘德龙王晓静郭慧芳白娟孙大业; 关键词：绿色荧光蛋白荧光共振能量转移

植物钙调素与Ce^(3+)离子结合反应的荧光光谱法研究被引量：1: 2007年; 水合Ce3+离子发射强荧光,而用Ce3+滴定植物钙调素(CaM)时,Ce3+离子荧光被完全淬灭,据此建立了测定Ce3+离子与植物钙调素结合位点数及逐级结合常数的方法。实验表明,Ce3+离子与植物钙调素的荧光激发光谱及发射光谱形状与光谱强度都有显著差别,前者的荧光强度远大于后者,故CaM存在时可以测定游离Ce3+的浓度。Ce3+离子荧光淬灭法测定结果说明,在0.5 mol.L-1KCl溶液中,CaM有4个Ce3+离子结合位点。进一步通过Ce3+滴定植物钙调素的实验,并结合Excel规划求解法,计算出Ce3+与CaM的结合常数,K1=4.17×107,K2=1.26×107,K3=1.89×106,K4=2.04×106。; 刘德龙王惠娟白娟孙大业; 关键词：CAM 稀土

槲皮素与转铁蛋白相互作用的荧光光谱法研究被引量：1: 2010年; 采用荧光光谱法研究了槲皮素与转铁蛋白分子的结合反应及相互作用机理.实验发现槲皮素对转铁蛋白内源荧光有猝灭作用,探讨了该体系的猝灭类型,分别测定了293K与310K时槲皮素-转铁蛋白间的结合常数和结合位点数,求出了分子间的距离和能量转移效率,根据热力学参数ΔH,ΔG和ΔS确定了槲皮素-转铁蛋白间的相互作用力类型为氢键和范德华力,并采用同步荧光技术考察了槲皮素对转铁蛋白构象的影响.; 李青梁艳红孙娟刘德龙; 关键词：槲皮素转铁蛋白荧光光谱热力学参数

新荧光蛋白micy-mko作为FRET传能对的探讨: 随着后基因组时代的到来,蛋白质相互作用的重要性已越显突出。复制,转录,翻译,信号转导, 蛋白折叠及蛋白降解等过程均是通过蛋白质复合物或分子机器来完成的。鉴定和表征蛋白质相互作用及完整的相互作用网络(相互作用组,inter...; 刘德龙郭慧芳王晓静白娟孙大业; 文献传递

绿色荧光蛋白为传能对的供体光漂白法测定FRET效率的探讨被引量：2: 2008年; 探讨以两种新荧光蛋白MiCy,mKo为传能对并应用供体光漂白法测量荧光共振能量转移(FRET)效率。首先通过基因工程方法表达纯化了这两种蛋白,并测量了荧光光谱及光漂白性质,表明MiCy极易光漂白而mKo抗光漂白。进一步以Ni-NTA-agarose为FRET模型,在Confocal上对MiCy进行光漂白时间常数的测量,并计算了FRET效率。结果表明MiCy-mKo传能对适合用供体光漂白法测量FRET效率,此传能对将在蛋白质相互作用研究中有广泛应用。; 周晓娟郭慧芳刘德龙孙大业; 关键词：绿色荧光蛋白荧光共振能量转移

离子选择电极法研究钙调素与重金属铅的结合平衡: 2007年; 用Pb2+选择电极法首次测定了CaM与Pb2+的结合常数,结果说明:Pb2+在CaM中约有10个结合位点,与文献报道的一致。其中包括4个强结合位点,结合常数在107量级,对应于Pb2+在CaM中的4个主结合位点;而其余的位点则结合常数较低,对应于Pb2+在CaM中的约6个辅助结合位点。逐级结合常数分别为:K1=2.62×107,K2=3.75×107,K3=1.03×107,K4=1.85×107,K5=2.53×106,K6=8.07×105,K7=3.36×105,K8=2.76×105,K9=2.22×105,K10=3.96×104。由于Pb2+与CaM的4个主结合位点的稳定常数比相应Ca2+的强几十到几百倍,因此Pb2+对Ca2+与CaM的竞争结合作用能够调节CaM的功能。; 刘德龙耿丽娜白娟孙大业; 关键词：钙调素铅离子选择电极

国家自然科学基金(20475013)