国家自然科学基金(30471703)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：大连医科大学附属第一医院更多>>
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- COX-2启动子在胰腺癌细胞中活性的检测
- 2009年
- 目的通过基因转染检测COX-2启动子在胰腺癌细胞中的活性。方法利用已构建的包含COX-2启动子和报告基因SSTR2的E1剔出重组腺病毒AdCOX-2-SSTR2转染胰腺癌细胞BxPC-3，包含CAG启动子的AdCAG—SSTR2作为阳性对照。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western印迹法分析检测SSTR2在细胞中的表达。RealTimePCR检测bax、VEGF的表达。结果AdCAG—SSTR2转染胰腺癌细胞后检测到SSTR2mRNA的表达，是内参β-actin的24％，在55KDa处检测到SSTR2蛋白条带，bax的表达量明显升高，VEGF的表达量明显下降，分别是对照组的3．18倍和0．23倍；AdCOX-2-SSTR2转染胰腺癌细胞则未检测到SSTR2mRNA和蛋白明显的表达，bax、VEGF的表达也无明显变化，分别是对照组的1．23倍、1．12倍。结论在胰腺癌细胞株BxPC-3中COX-2启动子驱动SSTR2表达未显示出肿瘤特异性启动子的优势。
- 金实王忠裕巩鹏
- 关键词：胰腺癌基因治疗
- 胰腺癌特异性受体基因载体的构建及环氧合酶2L启动子的作用被引量：1
- 2006年
- 目的构建环氧合酶-2L启动子(Cox-2L)及2型生长抑素受体(SSTR2)基因重组腺病毒载体,以研究SSTR2重新表达及腺病毒感染对胰腺癌细胞的影响。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从人正常胰腺组织中调取SSTR2基因,以HL60细胞基因组DNA为模板,以PCR法调取Cox-2L基因,以SSTR2及Cox-2L基因片段为模板,以PCR法扩增Cox-2L-SSTR2融合基因并连入TaKaRa公司pAxcwit腺病毒载体中,以电穿孔法转化E．Coli后挑选阳性克隆进行PCR及酶切鉴定。以pAxcwit-Cox-2L-SSTR2转染HEK293细胞获得重组腺病毒颗粒,进行PCR、酶切鉴定。结果调取并连接后的基因片段经测序证实为Cox-2L、SSTR2及Cox-2L-SSTR2融合基因,Cox-2L-SSTR2基因片段及PolyA克隆入T载体,经酶切并测序证实PMDl8-T-Cox-2L- SSTR2-PolyA构建成功。pAxcwit-Cox-2L-SSTR2-PolyA经酶切及PCR鉴定,Cox-2L-SSTR2-PolyA融合基因正确连入腺病毒载体。结论成功构建了Cox-2L-SSTR2基因重组腺病毒载体,为进一步研究SSTR2在胰腺癌细胞中的表达及作用奠定了基础。
- 王东巩鹏王忠裕
- 关键词：启动子生长抑素受体胰腺癌
- 转染SSTR2对胰腺癌细胞的促凋亡作用
- 2009年
- 目的通过包含SSTR2基因的重组腺病毒（AdCAG—SSTR2）转染人胰腺癌细胞，观察对胰腺癌细胞肿瘤特性的影响。方法分别应用空载体、AdCAG—SSTR2转染SSTR2阴性的人胰腺癌细胞株BxPC-3。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot法分析检测SSTR2在细胞中的表达。非转染细胞、转染空载体细胞和转染AdCAG—SSTR2细胞直接计数测定细胞生长速度。采用膜联蛋白V／碘化丙锭（Annexin V／PI）标记法检测细胞凋亡。RT—PCR检测PCNA、bax和bel-xl的表达。结果AdCAG—SSTR2转染胰腺癌细胞后可以检测到SSTR2mRNA和蛋白的稳定表达，转染AdCAG．SSTR2后细胞生长受到抑制，与对照组差异有统计学意义（P〈0．01）；细胞凋亡率较对照组明显升高（P〈0．01）；PCNA的表达无明显变化，是对照组的1．04倍；bax的表达明显升高，是对照组的3．18倍；bel-xl的表达明显降低，是对照组的0．34倍。结论SSTR2通过诱导胰腺癌细胞凋亡发挥抗肿瘤增殖的作用，其机制与上调bax的表达，下调bcl-xl的表达有关。
- 金实王忠裕巩鹏董擂牟国煜
- 关键词：胰腺癌生长抑素受体脱噬作用
