国家自然科学基金(30070555)
- 作品数：19 被引量：163H指数：9
- 相关作者：杨利国茆达干叶荣姜勋平周东蕊更多>>
- 相关机构：南京农业大学华中农业大学上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 不同激活方法对小鼠卵母细胞孤雌激活的实验观察被引量：9
- 2005年
- 目的 建立合适的小鼠卵母细胞孤雌激活方法。方法 取不同卵龄小鼠卵母细胞 ,运用不同浓度的氯化锶和不同强度的电脉冲对其进行活化 ,观察小鼠卵母细胞激活率和体外发育状况。结果 ① 14、16和 18h卵龄组卵母细胞经 10mmol LSrCl2 处理后 ,三组的激活率随卵龄的增长而提高 ,分别为 2 1 1%、4 1 8%和 73 7% ,组间差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;卵母细胞离体后在激活前体外培养 3h也能提高其激活率 ,但当卵龄达到一定时 (18h) ,体外培养激活率不再提高。② 5 0、10 0、15 0mmol L三种浓度的SrCl2 均能有效地激活小鼠卵母细胞 ,激活率分别为 5 8 5 %、6 8 95和 70 9% ,与对照组和 1 6mmol L组相比差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。③卵母细胞的激活率随处理时间的延长而提高 ,30、6 0、12 0、2 4 0minSrCl2 处理时间的激活率分别为 4 4 9%、5 6 1%、6 8 9%、77 0 % ,相隔两组之间差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。④ 1 5kV cm ,16 0 μs和 1 0kV cm ,32 0 μs脉冲刺激下的卵母细胞激活率显著高于 1 8kv cm ,90 μs脉冲刺激组 (5 8 5 %vs2 7 1%、6 9 1%vs2 7 1% ,P <0 0 5 ) ,前两组之间差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 小鼠卵母细胞孤雌激活率与卵龄和激活方案有关 ;氯化锶浓度。
- 叶荣陈学进杨利国
- 关键词：孤雌激活活率氯化锶体外培养卵母细胞
- 凋亡抑制基因免疫对小鼠生长的影响
- 2003年
- 小鼠经凋亡抑制基因免疫后 ,从 3周龄到 8周龄基因免疫组小鼠平均体重比对照组分别低 0 .4 8、1.18、1.16、1.35、0 .99、0 .85 g。基因免疫后的头 2周 ,小鼠生长速度明显低于对照组 ,且生长速度的差异随着免疫时间的增加而减小。这提示该基因与小鼠生长有关 ,如果用基因治疗方法增加凋亡抑制基因表达量 ,有可能增加小鼠生长速度。将凋亡抑制基因作为候选基因 ,研究它对家畜生长的遗传效应 。
- 姜勋平杨利国刘桂琼茆达干叶荣汪兴生曹少先
- 关键词：小鼠凋亡抑制基因基因免疫候选基因细胞寿命
- 外源bcl-2基因和脂质体对鸡卵泡颗粒细胞体外分裂和凋亡的影响被引量：13
- 2001年
- 选用正在产蛋的罗曼鸡 ,取其排序第 3的卵泡分离颗粒层细胞 ,用含血清培养基培养 ,并用含脂质体每孔 0 0 ,0 6,1 2 ,2 4,4 8μL和 bcl 2基因重组质粒每孔 0 2 μg转染卵泡颗粒细胞。用流式细胞术等方法分析转基因后的原代细胞和传代细胞的生长与凋亡情况。结果发现 ,与未转染组相比 ,转染后的传代细胞分裂速度较快 (P <0 0 1)、凋亡比率较低 ,G2 /M +S期细胞极显著高于对照 (P <0 0 1) ,且与脂质体浓度有剂量依赖关系。在转染时间为 12h、DNA含量为每孔 0 2 μg的条件下 ,脂质体最佳转染浓度为每孔 1 2 μL。这些结果进一步证明 ,外源 bcl 2 基因或脂质体具有促进细胞分裂、抑制细胞凋亡。
- 周东蕊杨利国姜勋平张书霞杨灿锋
- 关键词：脂质体卵泡颗粒细胞细胞凋亡
- 影响基因疫苗免疫效果的因素被引量：15
- 2004年
- 茆达干杨利国曹少先
- 关键词：影响因素基因疫苗免疫效果抗体抗原
- 鸡Bcl-2基因的克隆及其对卵泡颗粒细胞凋亡的影响被引量：9
- 2002年
- 将鸡的 Bcl- 2基因克隆到真核表达载体 JL V中 ,构建了重组质粒 JL VB。 0 .2μg/孔 JL VB重组质粒经脂质体介导转染卵泡颗粒细胞 ,应用流式细胞术等方法分析了转染 Bcl- 2基因后原代细胞和传代细胞的生长与凋亡情况。与对照组相比 ,转染后的传代细胞分裂速度较快 (P<0 .0 1) ,凋亡比率较低 ,G2 / M+S期细胞比例极显著高于对照组 (P<0 .0 1)。这些结果表明 ,Bcl- 2基因具有促进细胞分裂、抑制细胞凋亡、延长细胞寿命的作用 ,这种作用是直接的。在转染时间为 12 h、DNA量为 0 .3μg/孔的条件下 ,较好的脂质体介导用量为 1.2 μL/孔。
- 姜勋平周东蕊杨利国张书霞茆达干叶荣
- 关键词：BCL-2基因卵泡颗粒细胞细胞凋亡
- 细胞凋亡抑制基因免疫对小鼠生长及生长激素的影响被引量：2
- 2003年
- 本实验用细胞凋亡抑制基因 (bcl- 2 )JLV重组质粒 (JLV -bcl)免疫小鼠 ,测定免疫后小鼠的生长及血浆GH浓度。结果表明 ,经bcl- 2免疫后实验组小鼠体重均低于对照组 ,在 7～ 8周龄时实验A组小鼠体重与对照组存在显著差异 (P <0 .0 5)。用RIA双抗法检测血浆中生长激素 (GH)浓度 ,发现在首免后 3周实验A组小鼠的GH浓度显著低于对照组 (P <0 .0 5)。这些结果均提示bcl- 2基因与小鼠生长有关 ,如果用基因治疗的方法增加bcl-
- 叶荣杨利国茆达干姜勋平陈学进
- 关键词：免疫小鼠生长激素
- 卵泡抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒的构建及表达被引量：35
- 2003年
- 目的 :构建高免疫原性的抑制素真核表达载体。方法 :通过PCR扩增pCMV S基因中的S基因片段 ,然后将抑制素α(1 32 )片段与S的融合基因克隆到真核表达质粒pcDNA13.1( ) :酶切、测序鉴定后 ,采用脂质体包裹法将重组质粒转染Hela细胞 ,用SDS PAGE和ELISA对其表达产物进行检测。用抑制素融合表达质粒免疫大白鼠 ,ELISA检测血中抗抑制素抗体水平。结果 :酶切鉴定和序列分析表明 ,融合基因的表达质粒pClS构建成功。表达质粒在HeLa细胞中获得了表达 ,融合蛋白的分子量约为 2 9kD ,融合蛋白具有抑制素免疫原性。重组质粒免疫使大白鼠产生了抗抑制素抗体。结论 :高免疫原性的抑制素表达质粒的构建为利用抑制素基因免疫技术诱导单胎动物生多胎奠定了基础。
- 茆达干杨利国曹少先张志杰何晓红
- 关键词：卵泡抑制素乙肝表面抗原基因克隆基因表达表达质粒真核表达载体
- 鸡卵泡颗粒细胞转染bcl-2基因对IGF-1分泌的影响
- 本研究选用正在产蛋的罗曼鸡,取其排序第一(F)和第四(F)的卵泡,分离颗粒细胞层细胞。采用脂质体介导方法将来源于F和F卵泡的颗粒细胞用PBS(对照)、空载体或bcl-2重组质粒处理,然后在不完全无血清培养基(不添加胰岛素...
- 周东蕊杨利国刘君华
- 关键词：BCL-2基因IGF-1卵泡颗粒细胞
- 文献传递
- 牛成纤维细胞的分离与体外培养被引量：10
- 2005年
- 研究了牛胎儿和成年牛皮肤组织成纤维细胞的分离、培养、纯化方法和生长特征。通过组织块贴壁培养和分离单细胞接种培养均能获得原代牛皮肤细胞。用2.5 g/L胰蛋白酶+1mmol/L EDTA和5 g/L胶原酶I联合消化牛皮肤组织较2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化,得到更多的单个细胞,两者之间差异极显著(P<0.01),但其死细胞比率却有较大升高;2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化牛胎儿组织得到的单细胞数显著高于皮肤组织消化后得到的细胞数(P<0.01),死细胞比率也高于同种酶消化的皮肤组织。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。2.5 g/L胰蛋白酶+1 mmol/L EDTA消化贴壁细胞后死细胞率明显高于用0.5g/L胰蛋白酶+0.53 mmol/L EDTA消化的细胞(P<0.05);培养24 h后细胞贴壁率前者要明显低于后者(P<0.05)。用0.5 g/L胰蛋白酶轻度消化混杂生长的成纤维细胞和上皮样细胞,经过反复贴壁传代2～3代,可得到较纯的成纤维细胞。
- 叶荣陈学进杨利国
- 关键词：皮肤组织胰蛋白酶体外培养轻度成年牛接种培养
- STR基因座在奶牛个体识别中的应用被引量：15
- 2005年
- 通过分析2份冷冻精液样本和4头可疑种公牛血样的BM1862、BM2113、BM720和TGLA122 STR基因座遗传多样性,旨在判断该2份冷冻精液的种公牛来源,为建立奶牛个识别方法奠定基础。结果表明,应用STR基因座对个体进行识别,鉴别能力达0.9999。说明四个STR基因座可以用于冻精质量监测或奶牛个体识别和亲子鉴定。
- 管峰杨利国艾君涛陆汉希金穗华张淑二李加芳
- 关键词：奶牛冷冻精液种公牛冻精质量STR基因座BM
