国家重点基础研究发展计划(2009CB522100)
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 相关作者：邓卫兵罗兆榴欧志君陈文广区景松更多>>
- 相关机构：广州医学院第一附属医院广州市第一人民医院中国工程院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内皮衍生微粒诱导内皮细胞氧自由基产生损伤内皮功能被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨内皮衍生微粒(EMP)诱导内皮功能失调的机制和氧自由基(O2.-)在EMP诱导内皮功能失调中所起的作用。方法:从人血纤维蛋白溶酶原激活抑制剂-1刺激的人脐静脉内皮细胞中提取EMP,(1)采用牛主动脉内皮细胞(BAEC)做细胞培养,分成3组。第1组不做预处理,第2组EMP(1×108/L),第3组EMP(1×108/L)+L-nitroarginiemethylester(L-NAME,1mmol/L),预处理BAEC30min后,用超氧化物歧化酶(SOD)可抑制的铁细胞色素C还原法,测量O.2-的产生情况。(2)从小鼠中分离面动脉,分成4组。第1组不做预处理,第2组EMP(1×108/L),第3组EMP(1×108/L)+SOD(2×105U/L),第4组EMP(1×108/L)+聚乙烯羟乙酸盐超氧化物歧化酶(PEG-SOD,2×105U/L)预处理血管10min后做乙酰胆碱(ACH)诱导下的内皮依赖血管舒张功能试验。结果:(1)EMP明显增加BAECO.2-产生,L-NAME可以抑制50%EMP导致的O.2-产生增加。(2)EMP明显损伤ACH诱导的血管舒张功能,SOD处理未能清除EMP对血管舒张功能的损伤,PEG-SOD可部分恢复EMP处理后的血管舒张功能。结论:EMP诱导血管内皮功能失调至少部分是通过诱导细胞内产生的O2.-所致,为将来寻找包括清除O.2-在内的综合治疗方法提供理论依据。
- 区景松欧志君黄达德罗兆榴邓卫兵陈文广
- 关键词：血管舒张内皮自由基
- 肝X受体激动剂T0901317抑制TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-SMA的表达被引量：4
- 2011年
- 目的探讨肝X受体激动剂T0901317对TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法组织块贴壁法培养人正常肺成纤维细胞,波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学鉴定。T0901317和/或TGF-β1刺激人正常肺成纤维细胞后,分别应用RT-PCR,Western blot和免疫荧光观察α-SMA mRNA和蛋白水平的表达。结果人肺成纤维细胞表达波形蛋白而不表达角蛋白。RT-PCR,Western blot,免疫荧光结果均显示正常肺成纤维细胞基态下组成性表达少量的α-SMA,TGF-β15ng/ml即可以诱导α-SMA mRNA和蛋白表达的明显上调,而T09013175μg/ml时可以明显抑制这种表达的上调。结论肝X受体激动剂T0901317可以在基因和蛋白水平抑制TGF-β1诱导的体外人正常肺成纤维细胞α-SMA表达的上调,可能具有潜在抗纤维化应用价值。
- 任敦强刘明郭永忠马冉钟南山
- 关键词：人肺成纤维细胞肝X受体T0901317
- 应用噬菌体展示技术筛选参与肺纤维化调控的血清反应因子结合蛋白
- 2010年
- 目的筛选上皮-间充质转化细胞中可能介导肌成纤维细胞转分化的血清反应因子(SRF)结合蛋白,探讨其作为转录激活辅助子的分子生物学机制。方法应用噬菌体展示技术,从转化生长因子β1(TGF-β1)诱导转分化的人支气管上皮细胞16HBE及亲本细胞构建cDNA噬菌体展示文库,以调控平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)基因表达的核心转录因子SRF作为固相筛选分子对两文库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的生物筛选过程,噬斑PCR扩增后,对所获克隆进行DNA序列测定和生物信息学分析后进行差异比对。瞬时转染半定量分析mRNA表达。结果两文库筛选所获噬菌体经富集,随机各挑选46个克隆,序列测定后进行同源性搜索,并经过剔除对照库来源的克隆,新发现3种SRF结合蛋白:PAI-RBP1、Nucleolin和HF1OO;PAI-RBP1能促进α-SMA的表达上调。结论通过构建病理模型细胞并与噬菌体展示技术结合,以已知核心转录因子为钓饵发现未知结合蛋白,是一种发现新的转录调节子的有效策略。从转分化的细胞中发现3种新的SRF结合蛋白;对PAI-RBP1的研究初步表明PAI-RBP1参与了α-SMA基因表达的的诱导,可能在肌成纤维细胞活化过程中发挥了一定作用。
- 汪劲松徐军
- 关键词：肺纤维化噬菌体展示转录调控
