上海市自然科学基金(07ZR14083)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：陈样宜沈艳金维荣张洪义孔亚林更多>>
- 相关机构：国家工程研究中心空军总医院上海华冠生物芯片有限公司更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 肝癌细胞HepG2基因表达谱的构建与分析被引量：2
- 2009年
- 为从转录组水平识别HepG2与正常肝组织间的基因表达差异,寻找可能参与肝癌发生发展的重要基因,应用基因表达系列分析技术(SAGE)构建了HepG2的基因表达谱.通过DGED软件进行SAGE标签序列的注释,并与NCBI公共数据库中已有的正常肝脏数据进行比较分析,使用KEGG软件对差异表达基因进行功能分类.共发现HepG2与正常肝组织间差异表达的基因733个,其中表达上调的基因主要与MAPK信号传导通路、细胞周期、细胞粘附等相关,下调基因则主要与烟酸/烟酰胺代谢以及凝血和补体功能相关.荧光实时定量RT-PCR证实了在HepG2中表达升高的IGF2BP2和PEG3基因,在原发性肝癌中的表达亦上调(P<0.05),提示该基因可能是肝癌相关基因.
- 金维荣董辉张洪义陈样宜钱震孔亚林沈艳
- 关键词：基因表达谱基因表达系列分析HEPG2
- 人分泌磷蛋白2基因的克隆、原核表达与活性检测被引量：1
- 2010年
- 提取人肝癌组织RNA,通过RT-PCR扩增人SPP2成熟蛋白编码区基因并克隆至原核表达载体pET-22b(+),将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL2l(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,用Ni-NTA柱进行纯化,SDS-PAGE电泳及Western blot检测并证实目的蛋白的表达,通过重组蛋白对木瓜蛋白酶的抑制作用验证其生物学活性。重组质粒测序和酶切结果显示SPP2成熟蛋白基因已成功克隆到pET-22b(+)。IPTG诱导重组菌后有25kDa大小的目的蛋白表达。优化诱导表达条件,获得可溶性表达的目的蛋白,纯化后纯度达90%,western blot表明其具有His标签抗原活性。重组SPP2成熟蛋白可抑制木瓜蛋白酶的水解作用(酪蛋白为底物),重量抑制比为1∶3.1,抑制比活性为2511U/mg。
- 刘建玲康雪莲董辉王嘉颖曹琳徐晓晶金维荣
- 关键词：基因克隆原核表达
